Bestraling, chemotherapie, vaccin en anti-MART-1- en anti-gp100-cellen voor patiënten met gemetastaseerd melanoom

Achtergrond:

• We hebben humane perifere bloedlymfocyten (PBL's) ontwikkeld om een ​​T-celreceptor (TCR) tot expressie te brengen die menselijke leukocytantigenen (HLAA*0201) beperkte epitopen herkent die zijn afgeleid van het gp100- of het MART-1-melanoomantigeen.
• We hebben enkele retrovirale vectoren geconstrueerd die zowel alfa- als bèta-T-celreceptorketens (TCR) bevatten en die de genetische overdracht van deze TCR met hoge efficiëntie (meer dan 30 procent) kunnen mediëren zonder enige selectie uit te voeren.
• In co-kweken met HLA-A*0201-positieve melanomen scheidden deze TCR-getransduceerde T-cellen een aanzienlijke hoeveelheid interferon-gamma (IFN-y) af, maar er werd geen significante secretie waargenomen in controle-co-kweken.
• gp100:154-162 TCR of MART-1:27-35 TCR getransduceerde T-cellen kunnen efficiënt HLAA*0201-positieve tumoren doden. Er was weinig of geen herkenning van normale fibroblasten.
• Adoptieve overdracht van een van deze door TCR overgedragen gen-gemodificeerde perifere bloedlymfocyten (PBL) na een niet-myeloablatief lymfodepletieregime zou tumorregressie kunnen mediëren bij 13-30 procent van de patiënten met gemetastaseerd melanoom, hoewel er geen volledige respons werd waargenomen.

Doelstellingen:

Primaire doelen:

• In cohort 1 en 2, om te bepalen of de toediening van zowel de anti-gp100:154-162 TCR-gemanipuleerde als anti-MART-1:27-35 TCR-gemanipuleerde perifere bloedlymfocyten (PBL), aldesleukin en ofwel de gp100: 154-162-peptide of het MART-1:26-35(27L)-peptide aan patiënten die een preparatief chemoradiatie-lymfodepletieregime volgen, zal resulteren in volledige tumorregressie bij patiënten met gemetastaseerd melanoom.
• In cohort 3 en 4, om te bepalen of de toediening van zowel de anti-gp100:154-162 TCR-gemanipuleerde als anti-MART-1:27-35 TCR-gemanipuleerde CD8+ perifere bloedlymfocyten (PBL), aldesleukine en ofwel de gp100 :154-162-peptide of het MART-1:26-35(27L)-peptide aan patiënten die een preparatief regime van chemoradiatie en lymfodepletie volgen, zal resulteren in volledige tumorregressie bij patiënten met gemetastaseerd melanoom.
• Bepaal of de toediening van het specifieke vaccin (het gp100:154-162-peptide of het MART-1:26-35(27L)-peptide) de persistentie van de specifiek overgedragen cellen (anti-gp100:154-162 TCR PBL, respectievelijk anti-gp100:154-162 TCR CD8+ PBL, de anti-MART-1:27-35 TCR PBL of de anti-MART-1:27-35 TCR CD8+ PBL).

Secundaire doelstellingen:

- Bepaal het toxiciteitsprofiel van deze behandelingsregimes.

Geschiktheid:

Patiënten die HLA-A*0201-positief zijn en 18 jaar of ouder zijn, moeten:

• gemetastaseerd melanoom met meetbare ziekte
• eerder behandeld met IL-2 voor melanoom;
• normale waarden voor fundamentele laboratoriumwaarden.

Patiënten hebben mogelijk niet:

• gelijktijdige ernstige medische ziekten;
• elke vorm van primaire of secundaire immunodeficiëntie;
• ernstige overgevoeligheid voor een van de middelen die in dit onderzoek zijn gebruikt;
• contra-indicaties voor toediening van hoge doses aldesleukin.

Ontwerp:

• In cohort 1 en 2:

  • Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) zullen worden verkregen door middel van leukaferese (ongeveer 5 keer 10(9) cellen) en worden gekweekt in aanwezigheid van anti-CD3 (OKT3) en aldesleukine en afzonderlijke aliquots zullen worden getransduceerd met het anti-gp100:154- 162 TCR en de anti-MART-1:27-35 TCR retrovirale vector.
  • Transductie wordt geïnitieerd door blootstelling van ongeveer 10(8) tot 5 maal 10(8) cellen aan supernatant dat de retrovirale vectoren bevat. Deze gp100- en MART-1 TCR-getransduceerde cellen zullen afzonderlijk worden geëxpandeerd en getest op hun antitumoractiviteit.
  • Zodra is aangetoond dat gemanipuleerde lymfocyten biologisch actief zijn volgens de strikte criteria uiteengezet in het analysecertificaat, zullen de patiënten een chemoradiatie, lymfocytendepletiepreparatief regime krijgen bestaande uit cyclofosfamide en fludarabine en 600 cGy totale lichaamsbestraling gevolgd door intraveneuze infusie van ex vivo tumorreactief , gp100 en MART-1 TCR-gen-getransduceerde cellen plus IV aldesleukine (720.000 IE/kg q8h voor maximaal 15 doses).
  • Patiënten zullen worden gerandomiseerd om ofwel het gp100:154-162-peptide of het MART-1:26-35(27L)-peptide te ontvangen, geëmulgeerd in onvolledig Freund's adjuvans.
  • Patiënten ondergaan een volledige evaluatie van de tumor met lichamelijk onderzoek, computertomografie (CT) van de borst, buik en bekken en klinische laboratoriumevaluatie vier tot zes weken na de behandeling en vervolgens maandelijks gedurende ongeveer 3 tot 4 maanden of totdat aan de criteria buiten het onderzoek is voldaan.
  • De studie zal worden uitgevoerd met behulp van een fase II optimaal ontwerp waarbij in eerste instantie 21 evalueerbare patiënten zullen worden opgenomen in elk van twee cohorten. Als geen van de 21 patiënten per cohort een volledige klinische respons ervaart, zullen er geen nieuwe patiënten worden ingeschreven, maar als 1 of meer van de eerste 21 evalueerbare patiënten die in dat cohort zijn ingeschreven een volledige klinische respons hebben, zal de opbouw naar dat cohort doorgaan totdat in dat cohort zijn in totaal 41 evalueerbare patiënten opgenomen.
  • Cohort 1 en 2 worden afgesloten met instemming van amendement D.

• Cohort 3 en 4 worden gestart met instemming van amendement D.

  • Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) zullen worden verkregen door middel van leukaferese (ongeveer 5 keer 10(9) cellen) en CD8+-cellen zullen worden geselecteerd uit de culturen, met behulp van het Miltenyi CliniMACS-apparaat, voordat ze worden gestimuleerd en getransduceerd. Afzonderlijke aliquots van CD8+-cellen zullen worden getransduceerd met de anti-gp100:154-162 TCR en de anti-MART-1:27-35 TCR retrovirale vectoren.
  • Transductie wordt geïnitieerd door blootstelling van ongeveer 10(8) tot 5 maal 10(8) CD8+-cellen aan supernatant dat de retrovirale vectoren bevat. Deze gp100- en MART-1 TCR-getransduceerde cellen zullen afzonderlijk worden geëxpandeerd en getest op hun antitumoractiviteit.
  • Zodra is aangetoond dat gemanipuleerde lymfocyten biologisch actief zijn volgens de strikte criteria uiteengezet in het analysecertificaat, zullen de patiënten een chemoradiatie, lymfocytendepletiepreparatief regime krijgen bestaande uit cyclofosfamide en fludarabine en 600 cGy totale lichaamsbestraling gevolgd door intraveneuze infusie van ex vivo tumorreactief , gp100 en MART-1 TCR-gen-getransduceerde CD8+-cellen plus IV aldesleukine (720.000 IE/kg q8h voor maximaal 15 doses).
  • Patiënten zullen worden gerandomiseerd om ofwel het gp100:154-162-peptide (cohort 3) ofwel het MART-1:26-35(27L)-peptide (cohort 4) te ontvangen, geëmulgeerd in onvolledig Freund's adjuvans.
  • Patiënten zullen een volledige evaluatie van de tumor ondergaan met lichamelijk onderzoek, CT van de borstkas, buik en bekken en klinische laboratoriumevaluatie vier tot zes weken na de behandeling en vervolgens maandelijks gedurende ongeveer 3 tot 4 maanden of totdat aan de criteria buiten het onderzoek is voldaan.
  • De studie zal worden uitgevoerd met een optimale fase II-opzet, waarbij in eerste instantie 21 evalueerbare patiënten zullen worden ingeschreven in elk van cohort 3 en 4. Als geen van de 21 patiënten per cohort een volledige klinische respons ervaart, zullen geen verdere patiënten worden ingeschreven, maar als 1 of meer van de eerste 21 evalueerbare patiënten die in dat cohort zijn ingeschreven, hebben een volledige klinische respons. Daarna gaat de opbouw naar dat cohort door totdat er in totaal 41 evalueerbare patiënten in dat cohort zijn ingeschreven.