Entwicklung und prospektive Validierung eines standardisierten durchflusszytometrischen Assays der neutrophilen Myeloperoxidase-Expression im peripheren Blut zum Ausschluss myelodysplastischer Syndrome. (MPO-MDS-Develp)

Das Hauptziel der MPO-MDS-Entwicklungsstudie ist die Abschätzung der diskriminativen Genauigkeit (d. h. Fläche unter der ROC-Kurve zusammen mit 95 % KI) eines standardisierten und halbautomatischen durchflusszytometrischen Assays der neutrophilen MPO-Expression im peripheren Blut für die Diagnose von MDS bei erwachsenen Patienten.

Die sekundären Ziele sind die Bewertung von:

1. Intra-Labor-Reproduzierbarkeit (Intra- und Inter-Assay-Präzision) für die intraindividuelle RCV-Messung der neutrophilen MPO-Expression in peripherem Blut;
2. Probenstabilität für die intraindividuelle RCV-Messung der neutrophilen MPO-Expression im peripheren Blut zu verschiedenen Zeitpunkten im Vergleich zu H0 (Lagerung bei 4°C und Raumtemperatur);
3. Inter-Labor-Reproduzierbarkeit für die intraindividuelle RCV-Messung der neutrophilen MPO-Expression im peripheren Blut;
4. der negative prädiktive Wert für die intra-individuelle RCV-Messung der neutrophilen MPO-Expression im peripheren Blut (mit einem vordefinierten Schwellenwert von 30,0 %) zum Ausschluss von MDS bei aufeinanderfolgenden erwachsenen Patienten.

Das MPO-MDS-Develop-Projekt ist eine multizentrische Querschnittsstudie zur diagnostischen Genauigkeit eines Indextests im Vergleich zu einem Referenzstandard bei unselektierten aufeinanderfolgenden Patienten.

Screening: Alle konsekutiven Patienten, die mit Verdacht auf MDS an das Immunhämatologie-Labor an den Studienzentren überwiesen werden, werden auf ihre Eignung hin untersucht. Ein Laborarzt überprüft die Einschluss- und Ausschlusskriterien anhand computergestützter Kranken- und Laboraufzeichnungen.

Rekrutierung: Die Teilnehmer werden in die Studie aufgenommen, sobald alle Screening-Aktivitäten durchgeführt wurden und nur, wenn der Patient alle Einschluss- und keine Ausschlusskriterien erfüllt. Die Zustimmung zur durchflusszytometrischen Analyse von peripheren Blutproben und zur Datenerfassung durch Diagrammüberprüfung wird im Rahmen eines „Nicht-Einspruchs“-Regimes (Opt-out) eingeholt: Nachdem geeignete schriftliche Informationen geliefert wurden, werden Querschnittsdaten erfasst, außer in bei Widerspruch des Patienten. Allen in die Studie eingeschlossenen Patienten wird eine eindeutige Patientenidentifikationsnummer zugewiesen. Diese Nummer wird verwendet, um den Patienten während der gesamten Studie zu identifizieren.

Indextest: Die durchflusszytometrische Analyse der Neutrophilen-Myeloperoxidase-Expression im peripheren Blut wird unter Verwendung eines einzigen gebrauchsfertigen Röhrchens mit lyophilisierten Antikörpern durchgeführt, die in Zusammenarbeit mit Becton Dickinson France SAS entwickelt und gegenüber dem Referenzstandard verblindet wurden.

Referenzstandard: Die Diagnose von MDS wird gemäß der Klassifikation der Weltgesundheitsorganisation (WHO) gestellt, basierend auf klinischen Daten, peripherer Blutzytopenie, Zytomorphologie von peripherem Blut und Knochenmarkaspirat und zytogenetischer Analyse. Die Kriterien für die MDS-Diagnose sind 1) das Vorhandensein von ≥ 10 % dysplastischen Zellen in jeder hämatopoetischen Linie, 2) der Ausschluss einer akuten myeloischen Leukämie (definiert durch das Vorhandensein von ≥ 20 % peripherer Blut- oder Knochenmarkblasten) und 3) die Ausschluss von reaktiven Ätiologien der Dysplasie. Zytopenie ist definiert durch Hämoglobinkonzentration < 10 g/dl, Thrombozytenzahl < 100 x 109/l und/oder absolute Neutrophilenzahl < 1,8 x 109/l. Eine Diagnose von MDS könnte jedoch bei milderen Zytopenie-Werten gestellt werden. Idiopathische Zytopenie ungewisser Signifikanz (ICUS) ist definiert durch unerklärliche leichte anhaltende Zytopenie für mindestens 6 Monate und das Versäumnis, die Diagnose auf MDS gemäß den veröffentlichten Richtlinien zu stellen. In Übereinstimmung mit der WHO-Klassifikation stützt sich die MDS-Subkategorisierung auf den Grad der Dysplasie (unilineage versus multilineage), den Blastenprozentsatz, das Vorhandensein von Ringsideroblasten und die zytogenetische Analyse (del(5q)). Die Kriterien für die CMML-Diagnose sind 1) das Vorhandensein einer anhaltenden peripheren Blutmonozytose ≥ 1 x 109/l und 2) Monozyten, die mehr als 10 % der Differenzialzahl der weißen Blutkörperchen ausmachen. Die Auswertung der Knochenmark-Zytomorphologie wird prospektiv von erfahrenen Hämatopathologen durchgeführt, denen die Index-Testergebnisse verblindet sind.

Patienten mit bestätigtem MDS-Verdacht: Teilnehmer, bei denen die Diagnose MDS (oder CMML) durch den Referenzstandard bestätigt wird, werden als Patienten mit bestätigtem MDS-Verdacht kategorisiert.

Patienten mit unbestätigtem MDS-Verdacht: Teilnehmer, bei denen die Diagnose MDS (oder CMML) durch den Referenzstandard ausgeschlossen ist, werden als Patienten mit unbestätigtem MDS-Verdacht kategorisiert. Diese letztere Untergruppe umfasst Patienten mit ICUS, wie in Übereinstimmung mit den veröffentlichten Richtlinien definiert.

Nachsorge: In dieser Querschnittsstudie zur diagnostischen Genauigkeit ist keine Nachsorge geplant.