Opracowanie i prospektywna walidacja standardowego testu cytometrii przepływowej ekspresji mieloperoksydazy neutrofili we krwi obwodowej w celu wykluczenia zespołów mielodysplastycznych. (MPO-MDS-Develp)

Głównym celem badania MPO-MDS-develop jest oszacowanie dokładności dyskryminacyjnej (tj. pola pod krzywą ROC wraz z 95% przedziałem ufności) znormalizowanego i półautomatycznego testu cytometrii przepływowej ekspresji neutrofili MPO we krwi obwodowej w celu postawienia diagnozy MDS u ​​dorosłych pacjentów.

Cele drugorzędne to ocena:

1. odtwarzalność wewnątrzlaboratoryjna (precyzja wewnątrz- i między-testowa) dla wewnątrzosobniczego pomiaru RCV ekspresji neutrofili MPO we krwi obwodowej;
2. stabilność próbek do wewnątrzosobniczego pomiaru RCV ekspresji MPO neutrofili we krwi obwodowej w różnych punktach czasowych w porównaniu z H0 (przechowywane w temperaturze 4°C iw temperaturze pokojowej);
3. odtwarzalność międzylaboratoryjna dla wewnątrzosobniczego pomiaru RCV ekspresji neutrofili MPO we krwi obwodowej;
4. ujemna wartość predykcyjna dla wewnątrzosobniczego pomiaru RCV ekspresji MPO neutrofili we krwi obwodowej (z zadanym progiem 30,0%) w wykluczeniu MDS u ​​kolejnych dorosłych pacjentów.

Projekt MPO-MDS-Develop jest wieloośrodkowym, przekrojowym badaniem trafności diagnostycznej testu wskaźnikowego w porównaniu ze standardem referencyjnym u niewyselekcjonowanych kolejnych pacjentów.

Badania przesiewowe: Wszyscy kolejni pacjenci kierowani do laboratorium immunohematologicznego w ośrodkach badawczych z podejrzeniem MDS zostaną poddani badaniu przesiewowemu pod kątem kwalifikowalności. Lekarz laboratoryjny dokona przeglądu kryteriów włączenia i wyłączenia, korzystając z skomputeryzowanej dokumentacji medycznej i laboratoryjnej.

Rekrutacja: Uczestnicy zostaną włączeni do badania po przeprowadzeniu wszystkich czynności przesiewowych i tylko wtedy, gdy pacjent spełni wszystkie kryteria włączenia i żadne kryteria wykluczenia. Wyrażenie zgody na analizę próbki krwi obwodowej metodą cytometrii przepływowej i zbieranie danych w drodze przeglądu karty będzie wymagać zasady „braku sprzeciwu” (opt-out): po dostarczeniu odpowiedniej pisemnej informacji zostaną zebrane dane przekrojowe, z wyjątkiem przypadku sprzeciwu pacjenta. Wszyscy pacjenci włączeni do badania otrzymają unikalny numer identyfikacyjny pacjenta. Numer ten będzie używany do identyfikacji pacjenta przez cały czas trwania badania.

Test wskaźnikowy: Analiza metodą cytometrii przepływowej ekspresji mieloperoksydazy neutrofili we krwi obwodowej zostanie przeprowadzona przy użyciu pojedynczej, gotowej do użycia probówki z liofilizowanymi przeciwciałami, opracowanymi we współpracy z firmą Becton Dickinson France SAS i zaślepionymi względem standardu referencyjnego.

Norma referencyjna: Rozpoznanie MDS zostanie ustalone zgodnie z klasyfikacją Światowej Organizacji Zdrowia (WHO), na podstawie danych klinicznych, cytopenii krwi obwodowej, cytomorfologii krwi obwodowej i aspiratu szpiku kostnego oraz analizy cytogenetycznej. Kryteriami rozpoznania MDS są: 1) obecność ≥10% komórek dysplastycznych w dowolnej linii krwiotwórczej, 2) wykluczenie ostrej białaczki szpikowej (definiowanej przez obecność ≥20% blastów we krwi obwodowej lub szpiku kostnym) oraz 3) wykluczenie reaktywnych etiologii dysplazji. Cytopenia jest definiowana jako stężenie hemoglobiny <10 g/dl, liczba płytek krwi <100x109/l i/lub bezwzględna liczba neutrofilów <1,8x109/l. Jednak diagnozę MDS można postawić przy łagodniejszym poziomie cytopenii. Idiopatyczna cytopenia o niepewnym znaczeniu (ICUS) jest definiowana jako niewyjaśniona, łagodna, utrzymująca się przez co najmniej 6 miesięcy cytopenia i niepowodzenie w ustaleniu rozpoznania MDS zgodnie z opublikowanymi wytycznymi. Zgodnie z klasyfikacją WHO, podział na podkategorie MDS będzie zależał od stopnia dysplazji (unilineage versus multilineage), odsetka blastów, obecności syderoblastów pierścieniowych i analizy cytogenetycznej (del(5q)). Kryteriami rozpoznania CMML są: 1) obecność przetrwałej monocytozy krwi obwodowej ≥1 x109/l oraz 2) ilość monocytów stanowiąca ponad 10% różnicowej liczby krwinek białych. Ocena cytomorfologii szpiku kostnego zostanie przeprowadzona prospektywnie przez doświadczonych hematopatologów, którzy nie znają wyników testu wskaźnikowego.

Pacjenci z potwierdzonym podejrzeniem MDS: Uczestnicy, u których standard referencyjny potwierdzi rozpoznanie MDS (lub CMML), zostaną sklasyfikowani jako pacjenci z potwierdzonym podejrzeniem MDS.

Pacjenci z niepotwierdzonym podejrzeniem MDS: Uczestnicy, u których standard odniesienia wyklucza rozpoznanie MDS (lub CMML), zostaną sklasyfikowani jako pacjenci z niepotwierdzonym podejrzeniem MDS. Ta ostatnia podgrupa będzie obejmowała pacjentów z ICUS, jak zdefiniowano zgodnie z opublikowanymi wytycznymi.

Kontynuacja: W tym przekrojowym badaniu dokładności diagnostycznej nie planuje się żadnych wizyt kontrolnych.