Analyse molekularer Biomarker in periokularen Adnextumoren

Ziel dieser Forschung ist es, prospektiv und retrospektiv Talgdrüsenkarzinome aus der Fondazione Policlinico Gemelli zu sammeln, sie immunpathologisch und morphologisch zu untersuchen und eine Korrelation zwischen diesen Merkmalen und molekulargenetischen Faktoren herzustellen. Die Durchführung dieser Forschung wird zur Aufklärung und Weiterentwicklung eines multidisziplinären therapeutisch-diagnostischen Weges beitragen. Für die Studie werden unabhängig vom Krankheitsstadium chirurgische Proben verwendet, die formalinfixiert und in Paraffin eingebettet wurden. Diese Proben wurden zuvor für die klinische Praxis in der Augenonkologie der Fondazione Policlinico A. Gemelli IRCCS gesammelt. Die informierte Zustimmung der Patienten zur Verwendung dieser Proben für Forschungszwecke wurde zuvor eingeholt. Jede Probe wird anschließend einer umfassenden mikroskopischen Untersuchung unterzogen durch präzise Subklassifizierung gemäß der WHO-Klassifikation und immunphänotypische Charakterisierung. Es wird eine umfassende Sammlung konventionell standardisierter histopathologischer Prognosemerkmale für Talgdrüsenkarzinome zusammengestellt. Anschließend werden Gewebeproben zur Einzel- und/oder Mehrfach-IHC verschickt. Tumorgewebe werden einer automatisierten digitalen Quantifizierung in Verbindung mit einer multiparametrischen Zelllinienbewertung unterzogen. Integration von IHC in die digitale Automatisierung der Analyse. Die Exomsequenzierung wird an DNA durchgeführt, die aus in Paraffin eingebetteten Abschnitten extrahiert wurde, um Varianten zu erkennen, die für Tumoren spezifisch sind.

Für jeden Tumor werden drei bis neun Schnitte (10 Mikrometer dick) als DNA-Quelle verwendet. Nach der Identifizierung und Trennung des Tumorgewebes vom normalen Gewebe durch den Pathologen werden die beiden DNAs unabhängig voneinander sequenziert. Es wird ein Vergleich zwischen Varianten durchgeführt, die aus Tumor- und Normalgewebe stammen, mit gegensätzlichen Ergebnissen. Zu den erwarteten Ergebnissen gehören 1) somatische oder tumorspezifische Varianten, die in gesundem Gewebe nicht vorkommen, und 2) Varianten, die während der Tumorentwicklung aufgrund segmentaler chromosomaler Deletion oder anderer Mechanismen, die einen Heterozygotieverlust induzieren, verloren gehen. In der prospektiven Phase des Projekts werden neu entwickelte Tumore konserviert. Darüber hinaus wird diese Ressource zusätzlich zur Exomanalyse die Methylomanalyse erleichtern.