Análisis de biomarcadores moleculares en tumores anexiales perioculares

El propósito de esta investigación es recolectar prospectiva y retrospectivamente carcinomas sebáceos de la Fondazione Policlinico Gemelli, examinarlos inmunopatológica y morfológicamente y establecer una correlación entre estas características y factores genéticos moleculares. La realización de esta investigación contribuirá al esclarecimiento y avance de una vía terapéutica-diagnóstica multidisciplinaria. El estudio utilizará muestras quirúrgicas, independientemente del estadio de la enfermedad, que hayan sido fijadas con formalina e incluidas en parafina. Estas muestras fueron recolectadas previamente para la práctica clínica en la Oncología Ocular de la Fondazione Policlinico A. Gemelli IRCCS. Previamente se obtuvo el consentimiento informado de los pacientes sobre el uso de estas muestras con fines de investigación. Cada muestra será sometida a un examen microscópico completo, seguido mediante una subclasificación precisa de acuerdo con la clasificación de la OMS y la caracterización inmunofenotípica. Se compilará una colección exhaustiva de atributos de pronóstico histopatológico estandarizados convencionalmente para los carcinomas sebáceos. Después de esto, se envían muestras de tejido para IHC única y/o múltiple. Los tejidos tumorales se someterán a una cuantificación digital automatizada junto con una evaluación de líneas celulares multiparamétrica. Integrando IHC con la automatización digital del análisis. La secuenciación del exoma se realizará en ADN extraído de secciones incluidas en parafina para detectar variantes específicas de tumores.

Para cada tumor, se utilizarán de tres a nueve secciones (de 10 micrómetros de espesor) como fuente de ADN. Tras la identificación y separación del tejido tumoral del tejido normal por parte del patólogo, los dos ADN se secuenciarán de forma independiente. Se realizará una comparación entre variantes derivadas de tejido tumoral y normal, con resultados contrastantes. Los resultados previstos incluyen 1) variantes somáticas o específicas del tumor, que no existen en el tejido sano, y 2) variantes que se pierden durante la evolución del tumor como resultado de la deleción cromosómica segmentaria u otros mecanismos que inducen la pérdida de heterocigosidad. Durante la fase prospectiva del proyecto, se preservarán los tumores recién desarrollados. Además, este recurso facilitará el análisis del metiloma, que se suma al análisis del exoma.