Analisi dei biomarcatori molecolari nei tumori degli annessi perioculari

Lo scopo di questa ricerca è raccogliere prospetticamente e retrospettivamente i carcinomi sebacei della Fondazione Policlinico Gemelli, esaminarli dal punto di vista immunopatologico e morfologico e stabilire una correlazione tra queste caratteristiche e fattori genetici molecolari. La conduzione di questa ricerca contribuirà alla delucidazione e all’avanzamento di un percorso terapeutico-diagnostico multidisciplinare. Lo studio utilizzerà campioni chirurgici, indipendentemente dallo stadio della malattia, che sono stati fissati in formalina e inclusi in paraffina. Tali campioni sono stati precedentemente raccolti per la pratica clinica presso l'Oncologia Oculare della Fondazione Policlinico A. Gemelli IRCCS. È stato preventivamente ottenuto il consenso informato dei pazienti all'utilizzo di tali campioni per scopi di ricerca. Ogni campione sarà sottoposto ad un esame microscopico completo, seguito mediante precisa sottoclassificazione secondo la classificazione dell'OMS e la caratterizzazione immunofenotipica. Verrà compilata una raccolta esaustiva di attributi prognostici istopatologici convenzionalmente standardizzati per i carcinomi sebacei. Successivamente, i campioni di tessuto vengono inviati per IHC singolo e/o multiplo. I tessuti tumorali saranno sottoposti a quantificazione digitale automatizzata insieme alla valutazione multiparametrica delle linee cellulari. Integrazione dell'IHC con l'automazione digitale dell'analisi. Il sequenziamento dell'esoma verrà eseguito sul DNA estratto da sezioni incluse in paraffina al fine di rilevare varianti specifiche dei tumori.

Per ciascun tumore, come fonte di DNA verranno utilizzate da tre a nove sezioni (10 micrometri di spessore). Dopo l'identificazione e la separazione del tessuto tumorale dal tessuto normale da parte del patologo, i due DNA verranno sequenziati indipendentemente. Verrà effettuato un confronto tra varianti derivate da tessuto tumorale e tessuto normale, con risultati contrastanti. I risultati attesi includono 1) varianti somatiche o tumore-specifiche, che sono inesistenti nel tessuto sano, e 2) varianti che vengono perse durante l'evoluzione del tumore a causa della delezione cromosomica segmentale o di altri meccanismi che inducono la perdita dell'eterozigosità. Durante la fase prospettica del progetto, i tumori di nuovo sviluppo verranno preservati. Inoltre, questa risorsa faciliterà l'analisi del metiloma, che è in aggiunta all'analisi dell'esoma.