Respuestas inflamatorias y conductuales inducidas por endotoxinas y predictores de diferencias individuales

Diseño del estudio

Se incluirán veinticinco sujetos en el presente estudio, que seguirá un diseño prospectivo, controlado con placebo y cruzado. Se cegará a los participantes, así como al personal investigador a cargo de los participantes y del laboratorio.

Los sujetos se asignarán al azar en el diseño cruzado con dos ensayos, con aproximadamente cuatro semanas de lavado entre estimulaciones con LPS:

1. Ensayo 1: endotoxina. Los sujetos recibirán una inyección intravenosa de endotoxina a 2 ng/kg de peso corporal.
2. Ensayo 2: placebo. Los sujetos recibirán una inyección intravenosa de cloruro de sodio como placebo de la inyección de endotoxina.

Se reclutarán otros diez voluntarios sanos en un estudio piloto antes del comienzo del estudio principal, para probar las tareas conductuales que se utilizarán. Estos sujetos serán reclutados entre el personal universitario o entre los estudiantes universitarios. Realizarán cuatro tareas conductuales específicas y completarán los cuestionarios evaluando variables psicológicas y conductuales para asociar los resultados de las tareas conductuales a evaluaciones psicológicas y conductuales subjetivas. No se tomarán muestras biológicas (muestras de sangre, orina o camisetas) en los sujetos reclutados en el estudio piloto.

Tratamiento

El LPS lo proporciona LGC Promochem AB, Albanoliden 5, 4tr, 506 30 Borås, Suecia. La endotoxina USP (Convención de la Farmacopea de los Estados Unidos) (Cat. n.º 1235503) viene en forma de polvo liofilizado (liofilizado) y cada vial contiene 10 000 unidades de endotoxina USP. Cada vial contiene aproximadamente 1 microgramo de Endotoxina y se mezcla con 5 mililitros (mL) de agua estéril.

Procedimiento de estudio

El estudio se llevará a cabo en el Departamento de Ciencias Clínicas del Hospital Danderyd.

Antes de la inclusión y aleatorización, los sujetos acudirán al hospital para someterse a un examen médico, incluido un electrocardiograma y análisis de laboratorio de sangre. En esta ocasión se evaluarán datos sociodemográficos e historial médico, así como variables corporales (peso, talla, composición corporal) y actividad física mediante la versión sueca del IPAQ (Cuestionario Internacional de Actividad Física). Los antecedentes de depresión mayor se evaluarán mediante la Mini-Entrevista neuropsiquiátrica internacional (M.I.N.I.) para la depresión mayor. Las variables psicológicas que podrían afectar la respuesta conductual (o inmunitaria) a LPS, y que no se cree que cambien entre el día de la selección y los días del ensayo, también se evaluarán en ese momento, utilizando varios cuestionarios de autoevaluación basados ​​en la web. Estas medidas incluirán la percepción de los sujetos del cuerpo y el riesgo para la salud (p. ej., conciencia interoceptiva, vulnerabilidad percibida a la enfermedad, ansiedad por la salud y reactividad al asco, amplificación somatosensorial, miedo a las sensaciones relacionadas con la ansiedad) y bienestar psicológico (p. ej., percepción estrés, optimismo, apoyo social, bienestar cognitivo). El tiempo total para el examen médico será de 30-45 minutos. El tiempo para completar los cuestionarios se estima en aproximadamente 45 minutos, pero se puede hacer desde casa. Los participantes también recibirán un kit con una camiseta (con discos de algodón cosidos) y un jabón sin olor. Se les pedirá a los participantes que usen la camiseta por la mañana (después de lavarse las axilas) en cada día de prueba y se la quiten después de su llegada. Esto permitirá recolectar muestras de olor corporal antes del tratamiento (línea de base).

Luego, los participantes se someterán a los dos ensayos realizados en un orden aleatorio, con al menos seis semanas de lavado: endotoxina versus placebo.

Se les pedirá a los participantes que se abstengan de hacer ejercicio extenuante y tomar alcohol 48 horas antes del día de la prueba, que eviten las especias fuertes 24 horas antes del día de la prueba y que tomen un desayuno ligero la mañana del día de la prueba. Los participantes llegarán por la mañana (a las 7:30). Se cambiarán la camiseta de la mañana (ver arriba) y se cambiarán por una camiseta nueva (con almohadillas de algodón cosidas en la axila) para usar durante todo el día. Las camisetas se utilizarán para la evaluación del comportamiento y el análisis del compuesto del olor corporal. Poco después de su llegada, se colocarán dos catéteres intravenosos: uno para la extracción de sangre en un brazo y otro en una mano para la inyección de endotoxina o cloruro de sodio que se retirarán después de la inyección. Se le proporcionará una crema anestésica para untar en su brazo con el fin de minimizar el dolor de la venopunción. Luego, los sujetos descansarán durante al menos 30 minutos.

La inyección de endotoxina o cloruro de sodio se realizará cuando se haya completado el descanso (alrededor de las 8:30 a.m.). Se tomarán muestras de sangre (10 ml en tubos con EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) y 10 ml en tubos con citrato de sodio) justo antes de la inyección de endotoxina o cloruro de sodio y 1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6 y 7,5 horas después de la inyección. Además, se tomarán 2,5 ml en tubos PAXGene™ antes y 2, 4 y 7,5 horas después de la inyección. Se tomarán dos muestras adicionales en tubos con EDTA (8 ml de sangre) antes de la inyección y 3 y 7,5 horas después de la inyección. La cantidad total de sangre extraída será de unos 200 mL, lo que corresponde a un tercio de la cantidad entregada en una donación de sangre. Las muestras de sangre se utilizarán para medir las concentraciones de citocinas proinflamatorias y antiinflamatorias y otros marcadores inflamatorios (p. ej., proteína C reactiva - PCR) mediante el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), subpoblaciones de células inmunitarias y concentraciones de micropartículas mediante citometría de flujo. , marcadores genéticos utilizando análisis de expresión génica de análisis Cap (CAGE) y recuento y diferencial de glóbulos blancos.

Las muestras de orina se tomarán antes de la inyección de endotoxina o cloruro de sodio (es decir, antes de colocar los catéteres) y lo más tarde posible después de la inyección (normalmente alrededor de cuatro horas después de la inyección).

Los participantes serán monitoreados con electrocardiograma continuo. Se controlará la saturación de oxígeno (SO2), la presión arterial y la temperatura corporal cada 30 minutos. El dióxido de nitrógeno (NO2) se controlará continuamente, la metahemoglobina se controlará al mismo tiempo que cada muestra de sangre.

Los participantes completarán cuestionarios de autoevaluación que evalúan variables conductuales y psicológicas justo antes de la inyección de endotoxina o cloruro de sodio (durante el período de descanso), tres horas y 7,5 horas después de la inyección. Los participantes completarán repetidamente un breve cuestionario que evalúa el comportamiento de la enfermedad (SicknessQ) desde justo antes hasta 7,5 horas después de la inyección de endotoxina o cloruro de sodio. Los sujetos serán filmados cuando estén en la cama y llevarán una placa sociométrica, con el fin de analizar la respuesta conductual de los participantes ante una situación estandarizada de interacción social.

Se tomarán fotografías antes (es decir, antes de colocar los catéteres), dos horas después y 7,5 horas después de la inyección, para evaluar más las caras (p. ej., salud, atractivo, cansancio). Paralelamente, el color de la piel se medirá al mismo tiempo que las muestras de sangre (excepto T1.5) para evaluar un posible efecto mediador de las calificaciones de salud de las caras. El análisis de la marcha y el movimiento de los sujetos se realizará dos horas y media después de la inyección. Después de estas pruebas, se realizarán pruebas cognitivas computarizadas breves, justo antes de las tres horas posteriores a la inyección. Los sujetos realizarán una tarea de motivación después de completar los cuestionarios tres horas después de la inyección. Además, tres horas y media después de la inyección se realizarán dos pruebas que evalúan el comportamiento en respuesta a estímulos positivos/negativos y de salud/enfermedad (una prueba de conducta de acercamiento-evitación y una prueba de regulación de la emoción).

Los participantes podrán tomar una comida ligera (snack y bebida de jugo) alrededor de la hora del almuerzo (12.30) y entregarán su camiseta justo antes de las cinco horas y media después de la inyección.

Las últimas muestras de sangre se tomarán 7,5 horas después de la inyección y los participantes serán dados de alta.

El seguimiento del experimento será realizado por un médico, supervisado por un especialista en anestesia y cuidados intensivos.