Respostas Inflamatórias e Comportamentais Induzidas por Endotoxinas e Preditores de Diferenças Individuais

Design de estudo

Vinte e cinco indivíduos serão incluídos no presente estudo, que seguirá um desenho prospectivo, controlado por placebo e cruzado. Os participantes serão cegos, assim como o pessoal de pesquisa responsável pelos participantes e pelo laboratório.

Os indivíduos serão designados aleatoriamente no design cruzado com dois ensaios, com cerca de quatro semanas de intervalo entre as estimulações de LPS:

1. Ensaio 1: endotoxina. Os indivíduos receberão uma injeção intravenosa de endotoxina a 2 ng/kg de peso corporal.
2. Ensaio 2: placebo. Os indivíduos receberão uma injeção intravenosa de cloreto de sódio como placebo da injeção de endotoxina.

Dez outros voluntários saudáveis ​​serão recrutados em um estudo piloto antes do início do estudo principal, a fim de testar as tarefas comportamentais que serão utilizadas. Esses sujeitos serão recrutados entre o pessoal da universidade ou entre os estudantes universitários. Eles realizarão quatro tarefas comportamentais específicas e preencherão os questionários avaliando variáveis ​​psicológicas e comportamentais para associar os resultados das tarefas comportamentais a avaliações comportamentais psicológicas e subjetivas. Nenhuma amostra biológica (amostras de sangue, urina ou camiseta) será coletada em indivíduos recrutados no estudo piloto.

Tratamento

O LPS é fornecido pela LGC Promochem AB, Albanoliden 5, 4tr, 506 30 Borås, Suécia. A endotoxina da USP (Convenção Farmacopéica dos Estados Unidos) (Cat. Nº 1235503) vem como um pó liofilizado (liofilizado) e cada frasco contém 10.000 unidades de endotoxina USP. Cada frasco contém aproximadamente 1 micrograma de Endotoxina e é misturado com 5 mililitros (mL) de água estéril.

procedimento de estudo

O estudo será conduzido no Departamento de Ciências Clínicas do Hospital Danderyd.

Antes da inclusão e randomização, os indivíduos comparecerão ao hospital para serem submetidos a um exame médico, incluindo um eletrocardiograma e análises laboratoriais de sangue. Nesta ocasião serão avaliados dados sociodemográficos e histórico médico, bem como variáveis ​​corporais (peso, altura, composição corporal) e atividade física por meio da versão sueca do IPAQ (International Physical Activity Questionnaire). A história de depressão maior será avaliada usando a Mini-International Neuropsychiatric Interview (M.I.N.I.) para depressão maior. As variáveis ​​psicológicas que podem afetar a resposta comportamental (ou imune) ao LPS, e que não se acredita mudar entre o dia da triagem e os dias do teste, também serão avaliadas nesse momento, usando vários questionários de autoavaliação baseados na web. Essas medidas incluirão a percepção dos sujeitos sobre o corpo e o risco à saúde (por exemplo, consciência interoceptiva, vulnerabilidade percebida a doenças, ansiedade de saúde e reatividade de nojo, amplificação somatossensorial, medo de sensações relacionadas à ansiedade) e bem-estar psicológico (por exemplo, percepção estresse, otimismo, apoio social, bem-estar cognitivo). O tempo total para o exame médico será de 30 a 45 minutos. O tempo de preenchimento dos questionários é estimado em aproximadamente 45 minutos, mas pode ser feito em casa. Os participantes também receberão um kit com camiseta (com algodão costurado) e sabonete sem perfume. Os participantes serão convidados a vestir a camiseta pela manhã (após lavar as axilas) em cada dia de teste e retirá-la após a chegada. Isso permitirá a coleta de amostras de odor corporal pré-tratamento (linha de base).

Os participantes serão então submetidos aos dois ensaios realizados em ordem aleatória, com pelo menos seis semanas de wash-out: endotoxina versus placebo.

Os participantes serão solicitados a evitar exercícios extenuantes e ingestão de álcool 48 horas antes do dia do teste, evitar temperos fortes 24 horas antes do dia do teste e tomar um café da manhã leve na manhã do dia do teste. Os participantes chegarão pela manhã (às 7h30). Eles vão entregar a camiseta matinal (veja acima) e trocar por uma camiseta nova (com almofadas de algodão costuradas na axila) para usar o dia todo. As camisetas serão utilizadas para avaliação comportamental e análise do composto odor corporal. Logo após sua chegada, serão colocados dois cateteres intravenosos: um para coleta de sangue em um braço e outro em uma das mãos para injeção de endotoxina ou cloreto de sódio que será retirado após a injeção. Um creme anestésico será fornecido para espalhar em seu braço, a fim de minimizar a dor da punção venosa. Os indivíduos então descansarão por pelo menos 30 minutos.

A injeção de endotoxina ou cloreto de sódio será realizada quando o descanso for concluído (por volta das 8h30). Amostras de sangue (10 mL em tubos de EDTA (ácido etilenodiaminotetracético) e 10 mL em tubos de citrato de sódio) serão coletadas imediatamente antes da injeção de endotoxina ou cloreto de sódio e 1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6 e 7,5 horas após a injeção. Além disso, 2,5 mL em tubos PAXGene™ serão colhidos antes e 2, 4 e 7,5 horas após a injeção. Duas amostras adicionais em tubos de EDTA (8 mL de sangue) serão coletadas antes da injeção e 3 e 7,5 horas após a injeção. A quantidade total de sangue coletada será de cerca de 200 mL, correspondendo a um terço da quantidade doada em uma doação de sangue. Amostras de sangue serão usadas para medir as concentrações de citocinas pró e anti-inflamatórias e outros marcadores inflamatórios (por exemplo, proteína C-reativa - PCR) usando Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA), subpopulações de células imunes e concentrações de micropartículas usando citometria de fluxo , marcadores genéticos usando análises de expressão gênica de análise de Cap (CAGE) e contagem e diferencial de glóbulos brancos.

Amostras de urina serão coletadas antes da injeção de endotoxina ou cloreto de sódio (ou seja, antes da colocação dos cateteres) e o mais tarde possível após a injeção (classicamente cerca de quatro horas após a injeção).

Os participantes serão monitorados com eletrocardiograma contínuo. A saturação de oxigênio (SO2), a pressão arterial e a temperatura corporal serão monitoradas a cada 30 minutos. O dióxido de nitrogênio (NO2) será monitorado continuamente, a metemoglobina verificada ao mesmo tempo que cada amostra de sangue.

Questionários de autoavaliação avaliando variáveis ​​comportamentais e psicológicas serão preenchidos pelos participantes imediatamente antes da injeção de endotoxina ou cloreto de sódio (durante o período de descanso), três horas e 7,5 horas após a injeção. Um pequeno questionário avaliando o comportamento doentio (SicknessQ) será repetidamente preenchido pelos participantes de pouco antes a 7,5 horas após a injeção de endotoxina ou cloreto de sódio. Os sujeitos serão filmados na cama e usarão um distintivo sociométrico, a fim de analisar a resposta comportamental dos participantes a uma situação padronizada de interação social.

As fotografias serão tiradas antes (ou seja, antes da colocação dos cateteres), duas horas depois e 7,5 horas após a injeção, para avaliação posterior dos rostos (por exemplo, saúde, atratividade, cansaço). Paralelamente, a cor da pele será medida ao mesmo tempo que as amostras de sangue (exceto T1.5), a fim de avaliar um potencial efeito mediador das classificações de saúde dos rostos. A análise da marcha e do movimento dos indivíduos será realizada duas horas e meia após a injeção. Testes cognitivos computadorizados curtos serão realizados após esses testes, pouco antes de três horas após a injeção. Os sujeitos realizarão uma tarefa de motivação após completarem os questionários três horas após a injeção. Além disso, dois testes de avaliação do comportamento em resposta a estímulos positivos/negativos e saudáveis/doentes (um teste de comportamento de aproximação-evitação e um teste de regulação da emoção) serão executados três horas e meia após a injeção.

Os participantes terão direito a uma refeição ligeira (lanche e bebida à base de sumo) por volta da hora de almoço (12h30) e entregarão a t-shirt pouco antes de cinco horas e meia após a injecção.

As últimas amostras de sangue serão coletadas 7,5 horas após a injeção e os participantes receberão alta.

O acompanhamento do experimento será feito por um médico, supervisionado por um especialista em anestesia e terapia intensiva.