Actividad de Siembra de Agregación de a-Sinucleína Plasmática como un Nuevo Biomarcador para la Enfermedad Neurodegenerativa

La enfermedad por sinucleína, también conocida como sinucleinopatías, es un término general para una clase de enfermedades degenerativas. Incluye principalmente la enfermedad de Parkinson (EP), la demencia con cuerpos de Lewy (DCL), la atrofia multisistémica (AMS) y otras. La enfermedad se caracteriza por el plegamiento anormal de la alfa-sinucleína (α-syn) en el sistema nervioso periférico y central, lo que resulta en la producción de cuerpos de Lewy, neuritas de Lewy, neuronas y cuerpos de inclusión citoplasmáticos gliales en neuronas o células gliales. La ubicación intracelular y el patrón de acumulación de α-syn varían en las diferentes sinucleinopatías. Existen condiciones superpuestas entre las sinucleinopatías, lo que también hace que la precisión del diagnóstico clínico de estas enfermedades sea muy baja. Solo se puede realizar un diagnóstico definitivo después de que el paciente haya fallecido y se evalúen muestras cerebrales mediante tinción inmunohistoquímica. Por lo tanto, para intervenir y salvar la enfermedad por sinucleína con antelación, es necesario desarrollar métodos de diagnóstico más precisos y menos invasivos.

La conversión inducida por agitación en tiempo real (RT-QuIC) es un método para la amplificación in vitro de semillas de proteínas patógenas, que puede permitir que las proteínas semilla con capacidad de amplificación in vitro transformen sustratos en semillas mal plegadas bajo condiciones específicas. RT-QuIC se utilizó originalmente en el diagnóstico de pacientes con proteína priónica. La técnica puede identificar la proteína priónica en forma mal plegada en el líquido cefalorraquídeo de pacientes con enfermedad de Creutzfeldt-Jakob con una especificidad del 100% y una sensibilidad del 95-98%, por lo que se ha incorporado a los criterios de diagnóstico clínico para la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob esporádica. Los estudios han demostrado que las semillas patógenas extraídas del líquido cefalorraquídeo u otros fluidos biológicos o tejidos de los pacientes se incuban con sustratos de proteínas recombinantes, y el uso de agitación intermitente para promover la interacción entre la semilla y el sustrato puede forzar al sustrato a transformarse en semillas de proteínas patógenas. El proceso de reacción RT-QuIC se monitoriza en tiempo real por un detector dentro de la máquina para tioflavina, un colorante fluorescente que fluoresce cuando se une a la capa beta laminar, que también es típica de las fibrillas amiloides. Los estudios han demostrado que analizar el líquido cefalorraquídeo de los pacientes con RT-QuIC puede distinguir con precisión la demencia con cuerpos de Lewy de la demencia no parkinsoniana. En este estudio, se utilizó la técnica RT-QuIC para amplificar la α-syn mal plegada en muestras clínicas para explorar las diferencias en las características proteicas entre las sinucleinopatías, e intentar diagnosticar estas enfermedades mediante este método. En primer lugar, se incluyeron casos clínicos de sinucleinopatía, y se establecieron plasma de 100 sujetos control, 221 casos de pacientes con EP y 127 casos de pacientes con AMS, 10 casos de pacientes con PSP. Utilizando la tecnología RT-QuIC, empleamos aSyn (preparada con éxito en nuestro laboratorio) para amplificar el plasma de sujetos normales y pacientes con sinucleinopatías. Se encontró que la intensidad de fluorescencia máxima (valor extremo), el tiempo pico, K/2 (pendiente en valor extremo/2) y Tmax/2 (tiempo de alcanzar valor extremo/2) pueden utilizarse como indicadores de diagnóstico y diagnóstico diferencial para las sinucleinopatías.