RT-PCR en Muestras de Orina: Valor Agregado para el Diagnóstico de la Infección por el Virus Chikungunya (CHIK_urine)

Objetivos

1. Evaluar el valor agregado de la RT-PCR para CHIKV en muestras de orina para el diagnóstico de infección por CHIKV en comparación con los métodos de referencia.
2. Describir la cinética de RT-PCR para CHIKV en muestras de orina para diagnosticar la infección por CHIKV a lo largo del tiempo.

Diseño del estudio, población, materiales y métodos:

Estudio de cohorte prospectivo de pacientes con infección por CHIKV confirmada (RT-PCR para CHIKV positivo en la muestra en el momento de la inclusión o seroconversión definida como inmunoglobulina M (IgM) anti-CHIKV positiva en el día 14), que acuden a consulta externa del Instituto de Medicina Tropical en Amberes y el Horacio Oduber Hospital en Aruba dentro de las 72 horas posteriores al inicio de la fiebre. Luego de firmar el consentimiento informado, los datos clínicos y epidemiológicos se registrarán en un Formulario de Registro de Caso estandarizado. Se recolectarán muestras de sangre y orina de referencia según sea necesario para la evaluación clínica de rutina del caso individual; el muestreo incluirá ensayos serológicos de CHIKV en suero, CHIKV E1 (o una prueba rápida similar), así como suero y orina para RT-PCR para CHIKV. Después de la evaluación inicial, los casos sospechosos de CHIKV se programan para la recolección quincenal de suero y orina para RT-PCR para CHIKV durante 2 semanas, luego después de 3, 4 y 12 semanas. El suero a las 4 semanas se utilizará para el segundo ensayo serológico. Se excluirán los casos sospechosos que den negativo para CHIKV por RT-PCR en suero.

Población de estudio: pacientes con infección por CHIKV confirmada Tamaño de la muestra: panel de 20 casos confirmados por CHIKV Análisis e informes de datos: Se calcularán los porcentajes de RT-PCR en orina positiva (en diferentes puntos temporales de duración de la infección por CHIKV). Las proporciones de las tasas de positividad se probarán mediante la prueba de χ² para la igualdad de proporciones. Los valores Ct entre dos tipos de muestras diferentes (suero/orina) se compararán mediante el cálculo del coeficiente de correlación de rangos de Spearman (ρ). Los valores de Ct medidos se restarán (indicados por ∆Ct) y se calculará la media de todos los valores de ∆Ct (intervalo de confianza de ± 95 %). Informes de acuerdo con las pautas de los Estándares para informes de precisión diagnóstica (STARD).

Criterios de valoración: sensibilidad diagnóstica de CHIKV RT-PCR en muestras de orina en pacientes con infección confirmada por CHIKV, comparación de la sensibilidad analítica (basada en valores Ct) con RT-PCR en suero, tasas de positividad de muestras de orina RT-PCR a lo largo del tiempo Cuestiones éticas : Se obtendrá el consentimiento informado de los participantes del estudio. Se obtendrán datos demográficos, geográficos, clínicos y de laboratorio; los datos se anonimizan y se almacenan en una base de datos codificada (código conocido por los investigadores principales). Aprobación ética a través del Comité de Ética (EC) del ITM/ University Hospital Antwerp (UZA) y el EC en Aruba.

Resultados esperados y relevancia:

Evaluación de la sensibilidad de la RT-PCR en muestras de orina para el diagnóstico de infección por CHIKV en la fase posvirémica tanto en entornos endémicos como no endémicos. Las posibles ventajas del uso de PCR en orina sobre los ensayos serológicos son:

1. un cambio en el marco de tiempo para diagnosticar con precisión la infección por CHIKV que podría beneficiar a los viajeros que regresan y consultan después de la fase aguda.
2. el uso de especímenes únicos que se obtienen mediante procedimientos no invasivos
3. alta especificidad
4. la oportunidad de tipificar cepas de CHIKV.