RT-PCR em Amostras de Urina: Valor Agregado para o Diagnóstico da Infecção pelo Vírus Chikungunya (CHIK_urine)

Objetivos

1. Avaliar o valor agregado da RT-PCR para CHIKV em amostras de urina para o diagnóstico de infecção por CHIKV em comparação com os métodos de referência.
2. Descrever a cinética da RT-PCR para CHIKV em amostras de urina para o diagnóstico de infecção por CHIKV ao longo do tempo.

Desenho do estudo, população, materiais e métodos:

Estudo de coorte prospectivo de pacientes com infecção confirmada por CHIKV (RT-PCR positivo para CHIKV na amostra no momento da inclusão ou soroconversão definida como anticorpo anti-CHIKV Imunoglobulina M (IgM) positivo no dia 14), que frequentam o ambulatório do Institute of Tropical Medicine em Antuérpia e do Horacio Oduber Hospitaal em Aruba dentro de 72 horas após o início da febre. Após a assinatura do consentimento informado, os dados clínicos e epidemiológicos serão registrados em uma Ficha de Registro de Caso padronizada. Amostras basais de sangue e urina serão coletadas conforme necessário para avaliação clínica de rotina do caso individual; a amostragem incluirá ensaios sorológicos para CHIKV, CHIKV E1 (ou teste rápido semelhante), bem como soro e urina para RT-PCR para CHIKV. Após a avaliação inicial, os casos suspeitos de CHIKV são agendados para coleta quinzenal de soro e urina para RT-PCR para CHIKV por um período de 2 semanas, depois após 3, 4 e 12 semanas. O soro em 4 semanas será usado para o segundo ensaio sorológico. Casos suspeitos com teste negativo para CHIKV por RT-PCR no soro serão excluídos.

População do estudo: pacientes com infecção confirmada por CHIKV Tamanho da amostra: painel de 20 casos confirmados por CHIKV Análise de dados e relatório: As porcentagens de RT-PCR positivo na urina (ao longo de diferentes pontos no tempo de duração da infecção por CHIKV) serão calculadas. Proporções de taxas de positividade serão testadas pelo teste χ² para igualdade de proporções. Os valores de Ct entre dois tipos diferentes de amostra (soro/urina) serão comparados pelo cálculo do coeficiente de correlação de Spearman (ρ). Os valores de Ct medidos serão subtraídos (indicados por ∆Ct) e a média de todos os valores de ∆Ct (± 95% de intervalo de confiança) será calculada. Relatórios de acordo com as diretrizes dos Padrões para Relatórios de Precisão de Diagnóstico (STARD).

Desfechos: sensibilidade diagnóstica do CHIKV RT-PCR em amostras de urina em pacientes com infecção confirmada por CHIKV, comparação da sensibilidade analítica (com base nos valores Ct) com RT-PCR no soro, taxas de positividade de amostras de urina RT-PCR ao longo do tempo Questões éticas : O consentimento informado será obtido dos participantes do estudo. Serão obtidos dados demográficos, geográficos, clínicos e laboratoriais; os dados são desidentificados e armazenados em um banco de dados codificado (código conhecido pelos investigadores principais). Aprovação ética por meio do Comitê de Ética (CE) do ITM/University Hospital Antwerp (UZA) e do CE em Aruba.

Resultados esperados e relevância:

Avaliação da sensibilidade do RT-PCR em amostras de urina para diagnosticar infecção por CHIKV na fase pós-virêmica em ambientes endêmicos e não endêmicos. Possíveis vantagens do uso de PCR na urina sobre testes sorológicos são:

1. uma mudança no cronograma para diagnosticar com precisão a infecção por CHIKV que pode beneficiar os viajantes que retornam após a fase aguda.
2. o uso de amostras únicas obtidas por procedimentos não invasivos
3. alta especificidade
4. a oportunidade de tipagem de cepas de CHIKV.