Comparación del estado mutacional de KRAS/BRAF con técnicas convencionales y análisis de muestras de plasma (KPLEX2)

Analizar cualitativa y cuantitativamente las alteraciones genéticas con un test eficaz, sencillo y rentable a partir de muestras de sangre podría optimizar la toma de decisiones terapéuticas y la atención personalizada del cáncer. Los niveles de ADN libre de células (ccfDNA) en el plasma de pacientes con CCR son significativamente más altos que en pacientes sanos. Estos niveles disminuyen progresivamente en pacientes libres de tumor durante el período de seguimiento y aumentan en pacientes con recurrencia o metástasis. Por tanto, en un futuro próximo, la detección de ADN circulante (ccfDNA) podría representar un gran avance tecnológico para el diagnóstico, pronóstico, detección de crecimiento tumoral y seguimiento de pacientes con cáncer.

Diseñamos un método refinado e innovador que permite la determinación simultánea de tres parámetros: la cuantificación específica del ccfDNA derivado del tumor, el índice de fragmentación del ccfDNA y la detección de mutaciones puntuales o SNP (Single Nucleotide Polymorphism). Además de su sensibilidad y especificidad sin precedentes, este método basado en qPCR (denominado IntPlex®), recientemente patentado por el CNRS, es fácil y rápido, y la primera prueba multiplexada para ccfDNA.

La evaluación y validación de la prueba IntPlex® se examinó en respuesta a la urgente necesidad de determinar el estado mutacional de KRAS/BRAF antes de la terapia anti-EGFR en pacientes con CRC. Como consecuencia, el método se adaptó para detectar las seis mutaciones de KRAS más frecuentes en CRC (G12D, G12V, G13D, G12S, G12C, G12A) y BRAF V600E. Luego llevamos a cabo el primer estudio prospectivo ciego para comparar los datos de estado mutacional de KRAS y BRAF obtenidos del análisis de tejido tumoral mediante métodos estándar de oro de rutina y del ADN plasmático utilizando nuestro método original (comunicación oral de ASCO). El estado mutacional se determinó por ambos métodos en 70 muestras de pacientes. Nuestros resultados mostraron claramente por primera vez que el análisis ccfDNA para la mutación KRAS podría reemplazar ventajosamente el análisis de la sección del tumor. El análisis de CcfDNA mostró una especificidad y sensibilidad del 100 % para la mutación BRAF V600E. Para las seis mutaciones puntuales de KRAS probadas, el método exhibió una especificidad del 100 % y una sensibilidad del 87 % con un valor de concordancia del 96 %.

El objetivo de este estudio prospectivo multicéntrico es validar y, en última instancia, trasladar a la práctica clínica habitual el uso del análisis de plasma de ccfDNA para la determinación del estado de mutación de KRAS en pacientes con mCRC.