Comparação do estado mutacional KRAS/BRAF com técnicas convencionais e análise de amostras de plasma (KPLEX2)

A análise qualitativa e quantitativa das alterações genéticas com um teste eficiente, simples e econômico a partir de amostras de sangue pode otimizar a tomada de decisões terapêuticas e o tratamento personalizado do câncer. Os níveis de DNA livre de células (ccfDNA) no plasma de pacientes com CRC são significativamente maiores do que em pacientes saudáveis. Esses níveis diminuem progressivamente em pacientes sem tumor durante o período de acompanhamento e aumentam em pacientes com recorrência ou metástase. Em um futuro próximo, a detecção de DNA circulante (ccfDNA) poderia, portanto, representar um avanço tecnológico para diagnóstico, prognóstico, detecção de crescimento tumoral e acompanhamento de pacientes com câncer.

Desenhamos um método refinado e inovador que permite simultaneamente a determinação de três parâmetros: a quantificação específica do ccfDNA derivado do tumor, o índice de fragmentação do ccfDNA e a detecção de SNP (Single Nucleotide Polymorphism) ou mutação pontual. Além de sua sensibilidade e especificidade sem precedentes, este método baseado em qPCR (denominado IntPlex®), recentemente patenteado pelo CNRS, é fácil e rápido, e o primeiro teste multiplexado para ccfDNA.

A avaliação e validação do teste IntPlex® foi examinada em resposta à necessidade premente de determinar o estado mutacional KRAS/BRAF antes da terapia anti-EGFR em pacientes com CRC. Como consequência, o método foi adaptado para detectar as seis mutações KRAS mais frequentes no CRC (G12D, G12V, G13D, G12S, G12C, G12A) e no BRAF V600E. Em seguida, realizamos o primeiro estudo prospectivo cego para comparar os dados do estado mutacional KRAS e BRAF obtidos da análise do tecido tumoral por métodos padrão-ouro de rotina e do DNA plasmático usando nosso método original (comunicação oral da ASCO). O estado mutacional foi determinado por ambos os métodos em 70 amostras de pacientes. Nossos resultados mostraram claramente, pela primeira vez, que a análise de ccfDNA para a mutação KRAS poderia substituir vantajosamente a análise da seção do tumor. A análise de CcfDNA mostrou 100% de especificidade e sensibilidade para a mutação BRAF V600E. Para as seis mutações pontuais KRAS testadas, o método exibiu 100% de especificidade e 87% de sensibilidade com um valor de concordância de 96%.

O objetivo deste estudo prospectivo multicêntrico é validar e, finalmente, traduzir na prática clínica de rotina, o uso da análise plasmática de ccfDNA para a determinação do estado de mutação KRAS em pacientes com mCRC.