Confronto dello stato mutazionale KRAS/BRAF con tecniche convenzionali e analisi di campioni di plasma (KPLEX2)

L'analisi qualitativa e quantitativa delle alterazioni genetiche con un test efficiente, semplice ed economico da campioni di sangue potrebbe ottimizzare il processo decisionale terapeutico e la cura personalizzata del cancro. I livelli di DNA libero da cellule (ccfDNA) nel plasma dei pazienti con CRC sono significativamente più alti che nei pazienti sani. Questi livelli diminuiscono progressivamente nei pazienti senza tumore durante il periodo di follow-up e aumentano nei pazienti con recidiva o metastasi. Nel prossimo futuro, il rilevamento del DNA circolante (ccfDNA) potrebbe quindi rappresentare una svolta tecnologica per la diagnosi, la prognosi, il rilevamento della crescita tumorale e il follow-up dei pazienti oncologici.

Abbiamo progettato un metodo raffinato e innovativo che consente contemporaneamente la determinazione di tre parametri: la quantificazione specifica del ccfDNA derivato dal tumore, l'indice di frammentazione del ccfDNA e l'SNP (Single Nucleotide Polymorphism) o rilevamento della mutazione puntiforme. Oltre alla sua sensibilità e specificità senza precedenti, questo metodo basato su qPCR (denominato IntPlex®), recentemente brevettato dal CNRS, è facile e rapido ed è il primo test multiplex per ccfDNA.

La valutazione e la validazione del test IntPlex® sono state esaminate in risposta alla pressante necessità di determinare lo stato mutazionale KRAS/BRAF prima della terapia anti-EGFR nei pazienti con CRC. Di conseguenza, il metodo è stato adattato per rilevare le sei mutazioni KRAS più frequenti in CRC (G12D, G12V, G13D, G12S, G12C, G12A) e BRAF V600E. Abbiamo quindi condotto il primo studio prospettico in cieco per confrontare i dati sullo stato mutazionale di KRAS e BRAF ottenuti dall'analisi del tessuto tumorale con metodi gold standard di routine e del DNA plasmatico utilizzando il nostro metodo originale (comunicazione orale ASCO). Lo stato mutazionale è stato determinato con entrambi i metodi in 70 campioni di pazienti. I nostri risultati hanno mostrato chiaramente per la prima volta che l'analisi ccfDNA per la mutazione KRAS potrebbe sostituire vantaggiosamente l'analisi della sezione tumorale. L'analisi del CcfDNA ha mostrato una specificità e una sensibilità del 100% per la mutazione BRAF V600E. Per le sei mutazioni puntiformi KRAS testate, il metodo ha mostrato una specificità del 100% e una sensibilità dell'87% con un valore di concordanza del 96%.

L'obiettivo di questo studio prospettico multicentrico è quello di convalidare, e in definitiva tradurre nella pratica clinica di routine, l'uso dell'analisi plasmatica del ccfDNA per la determinazione dello stato di mutazione KRAS nei pazienti con mCRC.