Estudio clínico de microquimerismo y cfDNA como biomarcadores de rechazo agudo tras trasplante de órganos (CSMCDTITAROT)

El trasplante de órganos se ha convertido en la actualidad en una terapia eficaz para los pacientes con insuficiencia orgánica terminal. Desde el lanzamiento de la prueba piloto de donación voluntaria de órganos después de la muerte de los ciudadanos en 2010, la donación voluntaria de órganos se ha convertido en la única fuente legítima de trasplantes de órganos en 2015, y la transición de depender de los canales judiciales para obtener los órganos a la donación voluntaria de los ciudadanos ha se ha logrado con éxito en China, los casos de donación y el número aumentó año tras año. En la actualidad, el número anual de trasplantes de órganos en China ha superado los 10.000 casos, de los cuales el trasplante de riñón y el trasplante de hígado estaban a la cabeza, respectivamente con más de 5000 casos y 2000 casos.

El rechazo sigue siendo la causa más común de disfunción temprana después del trasplante de órganos, y la incompatibilidad de los principales antígenos de histocompatibilidad (MHC, MHC humano, también conocido como HLA) del donante y el receptor es la principal causa de rechazo después del trasplante. Por lo tanto, la importancia del emparejamiento en el trasplante de órganos ha sido ampliamente aceptada. La tipificación HLA y la tipificación HLA de alta resolución son cada vez más comunes. Al mismo tiempo, las últimas investigaciones internacionales muestran que la tipificación HLA de baja resolución en el trasplante de órganos también puede causar un rechazo significativo, mientras que la tipificación HLA de alta resolución, la tendencia futura, puede mejorar la tasa de supervivencia general. Además, la secuenciación de alto rendimiento NGS impulsará la clasificación de alta resolución HLA a un nuevo nivel.

Además de la coincidencia de HLA, los receptores pueden establecer una tolerancia inmunológica específica a los injertos de donantes, lo que afectará significativamente la supervivencia a largo plazo después de la operación. Una gran cantidad de datos experimentales y clínicos han sugerido que la formación de microquimerismo puede facilitar con éxito la tolerancia inmunológica específica del donante después del trasplante. La quimera se refiere a la condición de las células del donante y del receptor que coexisten y se mueven entre sí, ya que las células del donante existen en el cuerpo del receptor después de recibir el trasplante de aloinjerto o xenoinjerto y las células del receptor también existen en el injerto. Entre ellos, las microquimeras se refieren a los bajos niveles de células del donante (generalmente menos del 0,01 %) en la circulación sanguínea periférica de los receptores de trasplantes, lo que se observa comúnmente en los pacientes con trasplante de órganos sólidos. El concepto de microquimerismo fue propuesto por primera vez por Thomas Starzl en la Facultad de Medicina de la Universidad de Pittsburgh en la década de 1990, quien señaló que entre el microquimerismo y la tolerancia inmunológica del trasplante existe una posible relación de causa y efecto. La presencia prolongada de microquimerismo puede conducir a la tolerancia del receptor al órgano del donante. Cuantas más células transeúntes tiene el órgano, más células se desplazan, lo que facilita la formación de tolerancia al trasplante, lo que explica el fenómeno del rechazo más leve después del trasplante de hígado.

Se han encontrado varios métodos para inducir microquimerismo, incluyendo transfusión específica de donante, infusión de células de médula ósea de donante, infusión de leucocitos de donante, corte de bazo combinado con trasplante de órganos, etc.

La formación de microquimerismo es probablemente uno de los mecanismos de supervivencia a largo plazo del injerto trasplantado, y la detección de microquimerismo después del trasplante puede predecir eficazmente la tolerancia inmune y el rechazo del injerto, mientras que no existe un método de cuantificación muy eficaz. Además, la relación entre el microquimerismo y la inmunotolerancia sigue siendo cuestionable, como el nivel de formación clínica del microquimerismo que sugiere una inmunotolerancia estable, y si es posible determinar la retirada de los agentes inmunosupresores mediante la detección del microquimerismo, etc., estos Quedan problemas urgentes por resolver y aclarar. Según el sitio de eliminación de inserción (InDel) combinado con la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real, la sensibilidad de detección puede alcanzar del 0,001 % al 0,01 %, lo que puede cuantificar con precisión el nivel de microquimerismo y monitorear dinámicamente el microquimerismo después del trasplante.

Al mismo tiempo, científicos de la Universidad de Stanford en los Estados Unidos continuaron informando en 2014 y 2015 que el uso de una nueva generación de tecnología de secuenciación de alto rendimiento (NGS) para detectar el nivel de ADN libre de células derivadas de donantes (ADN cf) en sangre plasma de receptores después de un trasplante cardíaco y pulmonar. Los investigadores encontraron que el nivel de ADN cf derivado del donante aumentó significativamente cuando ocurre un rechazo agudo o crónico, por lo que podría usarse como marcador para reflejar el rechazo o la lesión del injerto.

Se ha informado que la microquimerización y los niveles de cfDNA del donante se correlacionan con el rechazo después del trasplante de órganos, pero estos estudios se basan principalmente en un pequeño número de casos y cuyos resultados son cualitativos o con un valor de resolución bajo debido a técnicas de detección limitadas, por lo que pueden no proporciona una tasa específica de microquimerismo.

Por lo tanto, los investigadores deben aclarar el papel del microquimerismo y el nivel de ADN cf derivado del donante durante la lesión del injerto, así como el rechazo después del trasplante utilizando una nueva generación de tecnología de detección para estudios multicéntricos con muestras de gran tamaño.

En este estudio se reclutarán y detectarán 950 casos de trasplante de órganos, de los cuales 600 casos de trasplante renal, 300 casos de trasplante hepático y 50 casos de trasplante pulmonar. Se recogerán 8 ml de sangre periférica en 1 tubo con anticoagulación con EDTA. Los puntos de tiempo de la recolección son los siguientes: Los pacientes con tratamiento de rutina después del trasplante se realizan una vez por semana durante 1 mes y luego a los 3, 6 y 12 meses después del trasplante. En caso de rechazo agudo, la sangre adicional se recolectará una vez el día del diagnóstico y una vez después de 7 días de remisión del tratamiento. Todas las muestras fueron detectadas para microquimerismo y cfDNA.