Klinisk studie av mikrokimerisme og cfDNA som biomarkører for akutt avstøtning etter organtransplantasjon (CSMCDTITAROT)

Organtransplantasjon har blitt en effektiv terapi for pasienter med organsvikt i sluttstadiet for tiden. Siden lanseringen av frivillig pilotorgandonasjon etter borgernes død i 2010, har frivillig organdonasjon blitt den eneste legitime kilden til organtransplantasjoner i 2015, og overgangen fra å stole på de rettslige kanalene for å skaffe organene til frivillig donasjon av borgere har ble oppnådd med suksess i Kina, donasjonssaker og antallet økte år for år. For tiden har det årlige antallet organtransplantasjoner i Kina passert 10 000 tilfeller, hvorav nyretransplantasjon og levertransplantasjon var i ledelsen, henholdsvis med mer enn 5000 tilfeller og 2000 tilfeller.

Avvisning er fortsatt den vanligste årsaken til tidlig dysfunksjon etter organtransplantasjon, og mismatching av store histokompatibilitetsantigener (MHC, human MHC, også kjent som HLA) hos giveren og mottakeren er den viktigste årsaken til avvisning etter transplantasjon. Derfor har viktigheten av matching i organtransplantasjon blitt allment akseptert. HLA-skriving og HLA-skriving med høy oppløsning blir mer og mer vanlig. Samtidig viser den siste internasjonale forskningen at lavoppløselig HLA-typing ved organtransplantasjon også kan forårsake betydelig avvisning, mens HLA-høyoppløselig typing, den fremtidige trenden, kan forbedre den totale overlevelsesraten. Videre vil NGS high-throughput sekvensering presse HLA høyoppløsningsklassifisering til en ny høyde.

Foruten HLA-matching, kan mottakere sette opp spesifikk immuntoleranse mot donortransplantater som vil påvirke langsiktig overlevelse etter operasjon betydelig. Et stort antall eksperimentelle og kliniske data har antydet at mikrokimerisme-dannelsen med hell kan lette donorspesifikk immuntoleranse etter transplantasjon. Chimera refererer til tilstanden til cellene fra giveren og fra mottakeren sameksisterer og beveger seg til hverandre ettersom donorcellene eksisterer i mottakerkroppen etter å ha mottatt allograft- eller xenograft-transplantasjonen, og mottakercellene eksisterer også i graften. Blant dem refererer mikrokimærer til de lave nivåene av donorceller (vanligvis mindre enn 0,01%) i den perifere blodsirkulasjonen til transplanterte mottakere, som ofte sees hos pasienter med solid organtransplantasjon. Konseptet mikrokimerisme ble først foreslått av Thomas Starzl ved Medicine School of University of Pittsburgh på 1990-tallet, som påpekte at mellom mikrokimerisme og transplantasjonsimmuntoleranse ligger en mulig årsak og virkningsforhold. Den langvarige tilstedeværelsen av mikrokimerisme kan føre til mottakerens toleranse overfor donororganet. Jo flere forbipasserende celler organet har, jo flere celler skifter det ut, noe som gjør det lettere å danne transplantasjonstoleranse, noe som forklarer fenomenet med den mildeste avstøtingen etter levertransplantasjon.

Det er funnet flere metoder for å indusere mikrokimerisme, inkludert donorspesifikk transfusjon, donorbenmargscelleinfusjon, donorleukocyttinfusjon, miltskive kombinert med organtransplantasjon og så videre.

Dannelsen av mikrokimerisme er sannsynligvis en av de langsiktige overlevelsesmekanismene til det transplanterte transplantatet, og påvisning av mikrokimerisme etter transplantasjon kan effektivt forutsi immuntoleransen og avvisningen av transplantatet, mens det ikke er noen veldig effektiv kvantifiseringsmetode. I tillegg er forholdet mellom mikrokimerisme og immuntoleranse fortsatt tvilsomt, for eksempel hvilket nivå av klinisk mikrokimerisme som antyder stabil immuntoleranse, og om det er mulig å bestemme uttak av immunsuppressive midler ved påvisning av mikrokimerisme og etc., disse er presserende problemer gjenstår å løse og avklare. Basert på InDel-stedet (Insertion Deletion) kombinert med kvantitativ sanntids polymerasekjedereaksjon, kan deteksjonssensitiviteten nå 0,001 % til 0,01 %, noe som nøyaktig kan kvantifisere mikrokimerismenivået og dynamisk overvåke mikrokimerisme etter transplantasjonen.

Samtidig fortsatte forskere fra Stanford University i USA å rapportere i 2014 og 2015 at bruk av en ny generasjon high-throughput sekvenseringsteknologi (NGS) for å oppdage nivået av donoravledet cellefritt DNA (cf DNA) i blod plasma fra mottakere etter hjerte- og lungetransplantasjon. Etterforskerne fant at nivået av donor-avledet cf-DNA ble betydelig økt når akutt eller kronisk avstøtning skjer, og derfor kunne det brukes som en markør for å reflektere avvisning eller transplantatskade.

Det er rapportert at mikrokimerisering og donor-cfDNA-nivåer er korrelert med avstøtning etter organtransplantasjon, men disse studiene er for det meste basert på et lite antall tilfeller og resultatene av disse er kvalitative eller med lav oppløsningsverdi på grunn av begrensede deteksjonsteknikker. ikke gi en spesifikk mikrokimerismerate.

Derfor må etterforskerne klargjøre rollen til mikrokimerisme og nivået av donoravledet cf DNA under transplantatskade samt avvisning etter transplantasjon ved bruk av en ny generasjon deteksjonsteknologi for multisenterstudie med stor prøvestørrelse.

I denne studien vil 950 tilfeller av organtransplantasjon, hvorav 600 tilfeller av nyretransplantasjon, 300 tilfeller av levertransplantasjon og 50 tilfeller av lungetransplantasjon rekrutteres og oppdages. 8 ml perifert blod samles i 1 rør med EDTA-antikoagulasjon. Tidspunktene for samlingen er som følger: Pasienter med rutinemessig behandling etter transplantasjon utføres en gang i uken i 1 måned og deretter 3, 6 og 12 måneder etter transplantasjon. Ved akutt avstøtning vil tilleggsblodet tas én gang på diagnosedagen og én gang etter 7 dagers behandlingsremisjon. Alle prøvene ble påvist for mikrokimerisme og cfDNA.