A mikrokimérizmus és a cfDNS klinikai vizsgálata a szervátültetés utáni akut kilökődés biomarkereként (CSMCDTITAROT)

A szervátültetés napjainkban a végstádiumú szervelégtelenségben szenvedő betegek hatékony terápiájává vált. Az állampolgárok halála utáni önkéntes szervadományozás 2010-es beindítása óta az önkéntes szervadományozás lett a szervátültetések egyetlen legitim forrása 2015-ben, és az átállás az igazságügyi csatornákra való támaszkodásról a szervek megszerzésében az állampolgárok önkéntes adományozására Kínában sikeresen elérték, az adományozási esetek és a szám évről évre nőtt. Jelenleg Kínában a szervátültetések éves száma meghaladta a 10 000 esetet, ebből a veseátültetés és a májátültetés volt az élen, több mint 5000, illetve 2000 esettel.

Még mindig a kilökődés a leggyakoribb oka a szervátültetés utáni korai diszfunkciónak, és a donor és a recipiens fő hisztokompatibilitási antigének (MHC, humán MHC, más néven HLA) hibája a transzplantáció utáni kilökődés fő oka. Ezért széles körben elfogadottá vált az egyeztetés fontossága a szervátültetésben. Egyre elterjedtebb a HLA gépelés és a HLA nagy felbontású gépelés. Ugyanakkor a legújabb nemzetközi kutatások azt mutatják, hogy az alacsony felbontású HLA tipizálás szervátültetésben is jelentős kilökődést okozhat, míg a jövőbeli trend, a HLA nagy felbontású tipizálása javíthatja az általános túlélési arányt. Ezenkívül az NGS nagy áteresztőképességű szekvenálása új magasságba emeli a HLA nagyfelbontású osztályozását.

A HLA illesztés mellett a recipiensek specifikus immuntoleranciát állíthatnak fel a donor graftokkal szemben, ami jelentősen befolyásolja a műtét utáni hosszú távú túlélést. Számos kísérleti és klinikai adat utal arra, hogy a mikrokimérizmus kialakulása sikeresen elősegítheti a donor-specifikus immuntoleranciát a transzplantáció után. A kiméra arra utal, hogy a donorból és a recipiensből származó sejtek egymás mellett léteznek és egymáshoz költöznek, mivel az allograft vagy xenograft transzplantáció után a donor sejtek léteznek a recipiens testben, és a recipiens sejtek a graftban is léteznek. Ezek közül a mikrokiméra a donorsejtek alacsony szintjére utal (általában kevesebb, mint 0,01%) a transzplantált betegek perifériás vérkeringésében, ami általában a szilárd szervátültetésen átesett betegeknél figyelhető meg. A mikrokimérizmus fogalmát először Thomas Starzl javasolta a Pittsburghi Egyetem Orvostudományi Karán az 1990-es években, és rámutatott, hogy a mikrokimérizmus és a transzplantációs immuntolerancia között lehetséges ok-okozati összefüggés lehet. A mikrokimérizmus régóta fennálló jelenléte a recipiens toleranciájához vezethet a donor szervvel szemben. Minél több áthaladó sejt van a szervben, annál több sejt tolódik ki, így könnyebben alakul ki transzplantációs tolerancia, ami megmagyarázza a májátültetés utáni legenyhébb kilökődés jelenségét.

Számos módszert találtak mikrokimérizmus indukálására, ideértve a donorspecifikus transzfúziót, a donor csontvelősejt-infúziót, a donor leukocita infúziót, a lépszeletet szervátültetéssel kombinálva és így tovább.

A mikrokimérizmus kialakulása valószínűleg az egyik hosszú távú túlélési mechanizmus az átültetett graftban, és a mikrokimérizmus transzplantáció utáni kimutatása hatékonyan képes előre jelezni a graft immuntoleranciáját és kilökődését, miközben nincs túl hatékony kvantifikációs módszer. Emellett továbbra is kérdéses a mikrokimérizmus és az immuntolerancia közötti kapcsolat, például, hogy a stabil immuntoleranciára utaló klinikai mikrokimérizmus kialakulása milyen szinten van, és hogy a mikrokimérizmus kimutatásával stb. megállapítható-e az immunszuppresszív szerek kivonása. sürgős problémákat kell még megoldani és tisztázni. Az InDel (Insertion Deletion) hely és a kvantitatív valós idejű polimeráz láncreakció kombinációja alapján a detektálási érzékenység elérheti a 0,001% és 0,01% közötti értéket, ami pontosan meghatározhatja a mikrokimérizmus szintjét és dinamikusan monitorozhatja a mikrokimérizmust a transzplantáció után.

Ugyanakkor az egyesült államokbeli Stanford Egyetem tudósai 2014-ben és 2015-ben továbbra is arról számoltak be, hogy a nagy áteresztőképességű szekvenálási technológia (NGS) új generációját alkalmazzák a donor eredetű sejtmentes DNS (cf DNS) szintjének kimutatására a vérben. szív- és tüdőtranszplantáció utáni recipiensek plazmája. A kutatók azt találták, hogy a donor eredetű cf DNS szintje szignifikánsan megnőtt akut vagy krónikus kilökődés esetén, így markerként használható a kilökődés vagy graftsérülés tükrözésére.

Beszámoltak arról, hogy a mikrokimerizáció és a donor-cfDNS szintek korrelálnak a szervátültetés utáni kilökődéssel, de ezek a vizsgálatok többnyire kis számú eseten alapulnak, és az eredmények kvalitatívak vagy a korlátozott kimutatási technikák miatt alacsony felbontásúak. nem adnak specifikus mikrokiméra arányt.

Ezért a kutatóknak tisztázniuk kell a mikrokimérizmus szerepét és a donor eredetű cf DNS szintjét a graft sérülése során, valamint a transzplantáció utáni kilökődést a detektálási technológia új generációjával a többközpontú, nagy mintaméretű vizsgálathoz.

Ebben a tanulmányban 950 szervátültetési esetet vesznek fel és észlelnek, ebből 600 vesetranszplantációt, 300 májátültetést és 50 tüdőtranszplantációt. 8 ml perifériás vért gyűjtünk 1 csőbe EDTA antikoagulánssal. A gyűjtés időpontjai a következők: A transzplantáció után rutin kezelésben részesülő betegeket hetente egyszer 1 hónapon keresztül, majd 3, 6 és 12 hónappal a transzplantáció után végezzük. Akut kilökődés esetén a további vért egyszer a diagnózis felállításának napján, majd 7 napos kezelési remisszió után egyszer veszik le. Minden mintában kimutattuk a mikrokimérizmust és a cfDNS-t.