Клиническое исследование микрохимеризма и вкДНК как биомаркеров острого отторжения после трансплантации органов (CSMCDTITAROT)

В настоящее время трансплантация органов стала эффективным методом лечения пациентов с терминальной стадией недостаточности органов. С момента запуска пилотного добровольного донорства органов после смерти граждан в 2010 г., в 2015 г. добровольное донорство органов стало единственным законным источником трансплантации органов, а переход от использования судебных каналов получения органов к добровольному донорству граждан ускорился. были успешно достигнуты в Китае, случаев пожертвований и их число увеличивалось из года в год. В настоящее время ежегодное количество трансплантаций органов в Китае превысило 10 000 случаев, из которых лидировали трансплантация почки и трансплантация печени, соответственно более 5000 случаев и 2000 случаев.

Отторжение по-прежнему является наиболее распространенной причиной ранней дисфункции после трансплантации органов, а несоответствие основных антигенов гистосовместимости (MHC, человеческий MHC, также известный как HLA) донора и реципиента является основной причиной отторжения после трансплантации. Таким образом, важность соответствия при трансплантации органов получила широкое признание. HLA-типирование и HLA-типирование с высоким разрешением становятся все более и более распространенными. В то же время, последние международные исследования показывают, что HLA-типирование с низким разрешением при трансплантации органов также может вызывать значительное отторжение, в то время как будущее HLA-типирование с высоким разрешением может улучшить общую выживаемость. Кроме того, высокопроизводительное секвенирование NGS поднимет классификацию HLA с высоким разрешением на новую высоту.

Помимо соответствия HLA, реципиенты могут установить специфическую иммунную толерантность к донорским трансплантатам, что значительно повлияет на долгосрочную выживаемость после операции. Большое количество экспериментальных и клинических данных свидетельствует о том, что формирование микрохимеризма может успешно способствовать донор-специфической иммунной толерантности после трансплантации. Химера относится к состоянию, при котором клетки донора и реципиента сосуществуют и перемещаются друг к другу, поскольку донорские клетки существуют в организме реципиента после получения трансплантации аллотрансплантата или ксенотрансплантата, а реципиентные клетки также существуют в трансплантате. Среди них микрохимера относится к низкому уровню донорских клеток (обычно менее 0,01%) в периферическом кровообращении реципиентов трансплантата, что обычно наблюдается у пациентов с трансплантацией паренхиматозных органов. Концепция микрохимеризма была впервые предложена Томасом Старзлом на Медицинской школе Университета Питтсбурга в 1990-х годах, который указал, что между микрохимеризмом и иммунной толерантностью к трансплантату лежит возможная причинно-следственная связь. Длительное наличие микрохимеризма может привести к толерантности реципиента к донорскому органу. Чем больше в органе клеток-пассажиров, тем больше клеток он смещает, что облегчает формирование толерантности к трансплантации, чем и объясняется явление наиболее легкого отторжения после трансплантации печени.

Было обнаружено, что несколько методов вызывают микрохимеризм, включая донор-специфическое переливание, инфузию донорских клеток костного мозга, инфузию донорских лейкоцитов, срез селезенки в сочетании с трансплантацией органов и так далее.

Формирование микрохимеризма, вероятно, является одним из долгосрочных механизмов выживания пересаженного трансплантата, и обнаружение микрохимеризма после трансплантации может эффективно прогнозировать иммунную толерантность и отторжение трансплантата, в то время как не существует очень эффективного метода количественного определения. Кроме того, остается под вопросом взаимосвязь между микрохимеризмом и иммунотолерантностью, например, до какого уровня формирования клинического микрохимеризма можно предположить устойчивую иммунотолерантность, можно ли определить отмену иммунодепрессантов по выявлению микрохимеризма и т.д. остаются неотложными проблемы, требующие решения и уточнения. На основе сайта с делецией вставки (InDel) в сочетании с количественной полимеразной цепной реакцией в реальном времени чувствительность обнаружения может достигать от 0,001% до 0,01%, что позволяет точно определять уровень микрохимеризма и динамически контролировать микрохимеризм после трансплантации.

В то же время ученые из Стэнфордского университета в США продолжали сообщать в 2014 и 2015 годах, что использование технологии высокопроизводительного секвенирования нового поколения (NGS) для определения уровня донорской бесклеточной ДНК (cf DNA) в крови плазма реципиентов после трансплантации сердца и легких. Исследователи обнаружили, что уровень донорской ДНК cf значительно повышается при остром или хроническом отторжении, поэтому его можно использовать в качестве маркера, отражающего отторжение или повреждение трансплантата.

Сообщалось, что микрохимеризация и уровни донорской вкДНК коррелируют с отторжением после трансплантации органов, но эти исследования в основном основаны на небольшом числе случаев, и результаты которых являются качественными или с низким значением разрешения из-за ограниченных методов обнаружения, таким образом, могут не обеспечивают конкретную скорость микрохимеризма.

Таким образом, исследователям необходимо уточнить роль микрохимеризма и уровня донорской вк ДНК при повреждении трансплантата, а также отторжении после трансплантации с использованием технологии обнаружения нового поколения для многоцентрового исследования с большим размером выборки.

В этом исследовании будут набраны и обнаружены 950 случаев трансплантации органов, из которых 600 случаев трансплантации почек, 300 случаев трансплантации печени и 50 случаев трансплантации легких. 8 мл периферической крови будут собраны в 1 пробирку с антикоагулянтом ЭДТА. Временные точки сбора следующие: Пациенты с плановым лечением после трансплантации проводят 1 раз в неделю в течение 1 месяца, а затем через 3, 6 и 12 месяцев после трансплантации. В случае острого отторжения дополнительная кровь будет собираться один раз в день постановки диагноза и один раз после 7 дней ремиссии лечения. Во всех образцах был обнаружен микрохимеризм и вкДНК.