장기이식 후 급성거부반응의 바이오마커로서의 마이크로키메리즘과 cfDNA의 임상 연구 (CSMCDTITAROT)

장기 이식은 현재 말기 장기 부전 환자에게 효과적인 치료법이 되었습니다. 2010년 시민 사망 후 자발적 장기기증 시범사업을 시작한 이후 2015년에는 자발적 장기기증이 유일한 합법적인 장기이식 출처가 되었으며, 장기를 얻기 위해 사법적 채널에 의존하는 것에서 시민의 자발적인 기증으로 전환하는 데 있어 중국에서 성공적으로 달성되었으며, 기부 건수는 해마다 증가하고 있습니다. 현재 중국의 연간 장기 이식 건수는 10,000건을 초과했으며, 그 중 신장 이식과 간 이식이 각각 5,000건 이상, 2,000건 이상으로 선두를 달리고 있습니다.

거부는 여전히 장기 이식 후 초기 기능 장애의 가장 흔한 원인이며 기증자와 수혜자의 주요 조직 적합성 항원(MHC, 인간 MHC, HLA라고도 함)의 불일치가 이식 후 거부의 주요 원인입니다. 따라서 장기 이식에서 매칭의 중요성은 널리 받아들여져 왔습니다. HLA 타이핑 및 HLA 고해상도 타이핑이 점점 보편화되고 있습니다. 동시에 최신 국제 연구에 따르면 장기 이식 시 저해상도 HLA 타이핑도 심각한 거부 반응을 유발할 수 있는 반면, 미래 트렌드인 HLA 고해상도 타이핑은 전체 생존율을 향상시킬 수 있습니다. 또한 NGS 고처리량 시퀀싱은 HLA 고해상도 분류를 새로운 차원으로 끌어올릴 것입니다.

HLA 일치 외에도 수혜자는 수술 후 장기 생존에 상당한 영향을 미치는 기증자 이식편에 대한 특정 면역 내성을 설정할 수 있습니다. 다수의 실험 및 임상 데이터는 마이크로키메리즘 형성이 이식 후 공여자 특이적 면역 관용을 성공적으로 촉진할 수 있음을 시사했습니다. 키메라는 동종이식이나 이종이식을 받은 후 기증자의 세포가 수혜자의 체내에 존재하고 이식편에도 수혜자의 세포가 존재하는 것처럼 공여자와 수혜자의 세포가 공존하며 서로 이동하는 상태를 말한다. 그 중 마이크로키메라는 이식 수혜자의 말초 혈액 순환에서 기증자 세포의 낮은 수준(보통 0.01% 미만)을 말하며, 이는 고형 장기 이식 환자에서 흔히 볼 수 있습니다. 마이크로키메리즘의 개념은 1990년대 피츠버그 대학교 의과대학의 Thomas Starzl에 의해 처음 제안되었으며, 마이크로키메리즘과 이식 면역 내성 사이에는 가능한 원인과 결과 관계가 있음을 지적했습니다. 마이크로키메리즘의 오랜 존재는 기증 기관에 대한 수혜자의 내성으로 이어질 수 있습니다. 장기에 통과 세포가 많을수록 더 많은 세포가 이동하여 이식 내성을 형성하기 쉬워지며, 이는 간 이식 후 가장 가벼운 거부 현상을 설명합니다.

기증자 특정 수혈, 기증자 골수 세포 주입, 기증자 백혈구 주입, 장기 이식과 결합된 비장 절편 등을 포함하여 마이크로키메리즘을 유도하는 여러 가지 방법이 발견되었습니다.

마이크로키메리즘의 형성은 아마도 이식된 이식편의 장기 생존 기작 중 하나일 것이며, 이식 후 마이크로키메리즘의 검출은 이식편의 면역 내성 및 거부반응을 효과적으로 예측할 수 있는 반면, 매우 효과적인 정량 방법은 없다. 또한 안정적인 면역관용을 시사하는 임상적 마이크로키메리즘 형성 수준이 어느 정도인지, 마이크로키메리즘 검출 등을 통해 면역억제제의 중단 여부를 판단할 수 있는지 등 마이크로키메리즘과 면역내성 사이의 관계는 여전히 의문의 여지가 있다. 해결하고 명확히 해야 할 긴급한 문제가 남아 있습니다. 정량적 실시간 폴리머라제 연쇄 반응과 결합된 삽입 결실(InDel) 사이트를 기반으로 검출 감도는 0.001% ~ 0.01%에 도달할 수 있으며, 이는 마이크로키메리즘 수준을 정확하게 정량화하고 이식 후 마이크로키메리즘을 동적으로 모니터링할 수 있습니다.

동시에 미국 스탠포드 대학의 과학자들은 2014년과 2015년에 차세대 고처리량 시퀀싱 기술(NGS)을 사용하여 혈액 내 공여자 유래 무세포 DNA(cf DNA) 수준을 검출한다고 계속 보고했습니다. 심장 및 폐 이식 후 수혜자의 혈장. 연구자들은 기증자 유래 cf DNA의 수준이 급성 또는 만성 거부가 발생할 때 크게 증가하여 거부 또는 이식 손상을 반영하는 마커로 사용할 수 있음을 발견했습니다.

microchimerization과 donor-cfDNA level은 장기이식 후 거부반응과 상관관계가 있는 것으로 보고되었으나 이러한 연구들은 대부분 소수의 증례에 기반을 두고 있으며 그 결과는 정성적이거나 제한된 검출기술로 인해 저해상도 값을 가질 수 있다. 특정 마이크로키메리즘 비율을 제공하지 않습니다.

따라서 연구자들은 대규모 샘플 크기의 다기관 연구를 위한 차세대 검출 기술을 사용하여 이식 후 거부뿐만 아니라 이식 손상 동안 마이크로키메리즘의 역할과 기증자 유래 cf DNA의 수준을 명확히 할 필요가 있습니다.

본 연구에서는 장기이식 950건 중 신장이식 600건, 간이식 300건, 폐이식 50건을 모집하여 검출한다. EDTA 항응고제가 포함된 1개의 튜브에 8ml의 말초 혈액을 수집합니다. 수집 시점은 다음과 같다. 이식 후 일상적인 치료를 받는 환자는 1개월 동안 주 1회, 이식 후 3, 6, 12개월에 시행한다. 급성 거부반응의 경우 진단 당일 1회, 치료 관해 7일 후 추가 채혈한다. 모든 샘플은 마이크로키메리즘 및 cfDNA에 대해 검출되었습니다.