Klinická studie mikrochimerismu a cfDNA jako biomarkerů pro akutní rejekci po transplantaci orgánů (CSMCDTITAROT)

Transplantace orgánů se v současnosti stala účinnou terapií pro pacienty v konečném stádiu orgánového selhání. Od zahájení pilotního dobrovolného dárcovství orgánů po smrti občanů v roce 2010 se dobrovolné dárcovství orgánů stalo jediným legitimním zdrojem transplantací orgánů v roce 2015 a přechod od spoléhání se na soudní cesty při získávání orgánů k dobrovolnému dárcovství občanů bylo úspěšně dosaženo v Číně, případy darů a jejich počet rok od roku rostl. V současné době přesáhl roční počet transplantací orgánů v Číně 10 000 případů, z toho vedla transplantace ledvin a transplantace jater s více než 5 000 případy a 2 000 případy.

Odmítnutí je stále nejčastější příčinou časné dysfunkce po transplantaci orgánu a nesoulad hlavních histokompatibilních antigenů (MHC, lidský MHC, také známý jako HLA) dárce a příjemce je hlavní příčinou odmítnutí po transplantaci. Proto je význam shody při transplantaci orgánů široce akceptován. HLA typizace a HLA typizace s vysokým rozlišením jsou stále běžnější. Nejnovější mezinárodní výzkum zároveň ukazuje, že typizace HLA s nízkým rozlišením při transplantaci orgánů může také způsobit významné odmítnutí, zatímco typizace s vysokým rozlišením HLA, budoucí trend, může zlepšit celkovou míru přežití. Kromě toho vysokokapacitní sekvenování NGS posune klasifikaci HLA s vysokým rozlišením na novou úroveň.

Kromě HLA párování mohou příjemci nastavit specifickou imunitní toleranci vůči dárcovským štěpům, což významně ovlivní dlouhodobé přežití po operaci. Velké množství experimentálních a klinických dat naznačuje, že tvorba mikrochimérismu může úspěšně usnadnit dárcovskou specifickou imunitní toleranci po transplantaci. Chiméra označuje stav buněk od dárce a od příjemce koexistují a vzájemně se pohybují, protože dárcovské buňky existují v těle příjemce po obdržení aloštěpu nebo transplantace xenoštěpu a buňky příjemce existují také ve štěpu. Mezi nimi mikrochiméra označuje nízké hladiny dárcovských buněk (obvykle méně než 0,01 %) v periferním krevním oběhu příjemců transplantátu, což je běžně pozorováno u pacientů s transplantací solidních orgánů. Koncept mikrochimérismu byl poprvé navržen Thomasem Starzlem na Lékařské fakultě University of Pittsburgh v 90. letech 20. století, který poukázal na to, že mezi mikrochimerismem a transplantační imunitní tolerancí je možný vztah příčiny a účinku. Dlouhodobá přítomnost mikrochimérismu může vést k toleranci příjemce vůči dárcovskému orgánu. Čím více buněk kolemjdoucích orgán má, tím více buněk se posouvá ven, což usnadňuje vytvoření tolerance k transplantaci, což vysvětluje fenomén nejmírnějšího odmítnutí po transplantaci jater.

Bylo zjištěno několik metod pro indukci mikrochimérismu, včetně dárcově specifické transfuze, infuze buněk kostní dřeně dárce, infuze dárcovských leukocytů, řez sleziny v kombinaci s transplantací orgánů a tak dále.

Vznik mikrochimérismu je pravděpodobně jedním z dlouhodobých mechanismů přežití transplantovaného štěpu a detekce mikrochimérismu po transplantaci může účinně predikovat imunitní toleranci a odmítnutí štěpu, přičemž neexistuje žádná velmi účinná kvantifikační metoda. Kromě toho zůstává sporný vztah mezi mikrochimérismem a imunotolerancí, např. do jaké úrovně tvorby klinického mikrochimérismu, která naznačuje stabilní imunitní toleranci, a zda je možné stanovit stažení imunosupresiv detekcí mikrochimerismu atd. jsou naléhavé problémy, které je třeba vyřešit a objasnit. Na základě místa vložení delece (InDel) kombinované s kvantitativní polymerázovou řetězovou reakcí v reálném čase může citlivost detekce dosáhnout 0,001 % až 0,01 %, což může přesně kvantifikovat úroveň mikrochimerismu a dynamicky monitorovat mikrochimérismus po transplantaci.

Současně vědci ze Stanfordské univerzity ve Spojených státech pokračovali v letech 2014 a 2015 ve zprávách, že pomocí nové generace vysoce výkonné sekvenační technologie (NGS) k detekci hladiny dárcovské bezbuněčné DNA (cf DNA) v krvi plazmy příjemců po transplantaci srdce a plic. Výzkumníci zjistili, že hladina cf DNA pocházející od dárce byla významně zvýšena, když dojde k akutní nebo chronické rejekci, takže by mohla být použita jako marker k vyjádření rejekce nebo poranění štěpu.

Bylo hlášeno, že mikrochimerizace a hladiny cfDNA dárce korelují s rejekcí po transplantaci orgánu, ale tyto studie jsou většinou založeny na malém počtu případů a jejich výsledky jsou kvalitativní nebo s nízkou hodnotou rozlišení kvůli omezeným technikám detekce, takže mohou neposkytují specifickou míru mikrochimérismu.

Vyšetřovatelé proto potřebují objasnit roli mikrochimérismu a hladinu cf DNA odvozené od dárce během poškození štěpu a také rejekce po transplantaci pomocí nové generace detekční technologie pro multicentrickou studii s velkou velikostí vzorku.

V této studii bude zahrnuto a odhaleno 950 případů transplantace orgánů, z toho 600 případů transplantace ledvin, 300 případů transplantace jater a 50 případů transplantace plic. Do 1 zkumavky s antikoagulací EDTA bude odebráno 8 ml periferní krve. Časové body odběru jsou následující: Pacienti s rutinní léčbou po transplantaci jsou preformováni jednou týdně po dobu 1 měsíce a poté 3, 6 a 12 měsíců po transplantaci. V případě akutní rejekce bude dodatečná krev odebrána jednou v den diagnózy a jednou po 7 dnech remise léčby. Všechny vzorky byly detekovány na mikrochimerismus a cfDNA.