Klinisk studie av mikrokimerism och cfDNA som biomarkörer för akut avstötning efter organtransplantation (CSMCDTITAROT)

Organtransplantation har för närvarande blivit en effektiv terapi för patienter med organsvikt i slutstadiet. Sedan lanseringen av frivillig pilotdonation av organ efter medborgarnas död 2010, har den frivilliga organdonationen blivit den enda legitima källan till organtransplantationer 2015, och övergången från att förlita sig på de rättsliga kanalerna för att skaffa organ till frivillig donation av medborgare har framgångsrikt uppnåtts i Kina, donationsfall och antalet ökade år för år. För närvarande har det årliga antalet organtransplantationer i Kina överstigit 10 000 fall, varav njurtransplantation och levertransplantation var i täten, med mer än 5000 fall respektive 2000 fall.

Avstötning är fortfarande den vanligaste orsaken till tidig dysfunktion efter organtransplantation, och felmatchningen av stora histokompatibilitetsantigener (MHC, human MHC, även känd som HLA) hos donatorn och mottagaren är den främsta orsaken till avstötning efter transplantation. Därför har vikten av matchning vid organtransplantation blivit allmänt accepterad. HLA-typning och HLA-högupplöst typning blir allt vanligare. Samtidigt visar den senaste internationella forskningen att lågupplöst HLA-typning vid organtransplantation också kan orsaka betydande avstötning, medan HLA-högupplöst typning, den framtida trenden, kan förbättra den totala överlevnaden. Dessutom kommer NGS high-throughput sekvensering att lyfta HLA högupplöst klassificering till en ny höjd.

Förutom HLA-matchning kan mottagare ställa in specifik immuntolerans mot donatortransplantat, vilket avsevärt kommer att påverka den långsiktiga överlevnaden efter operationen. Ett stort antal experimentella och kliniska data har föreslagit att bildningen av mikrokimerism framgångsrikt kan underlätta donatorspecifik immuntolerans efter transplantation. Chimera hänvisar till tillståndet hos cellerna från donatorn och från mottagaren samexisterar och flyttar till varandra eftersom donatorcellerna existerar i mottagarkroppen efter att ha mottagit allotransplantatet eller xenotransplantatet och mottagarcellerna existerar även i transplantatet. Bland dem hänvisar mikrokimer till de låga nivåerna av donatorceller (vanligtvis mindre än 0,01 %) i den perifera blodcirkulationen hos transplanterade mottagare, vilket vanligtvis ses hos patienter med solid organtransplantation. Begreppet mikrokimerism föreslogs först av Thomas Starzl vid Medicine School of University of Pittsburgh på 1990-talet, som påpekade att mellan mikrochimerism och transplantatimmuntolerans ligger ett möjligt orsaks- och verkanssamband. Den långvariga närvaron av mikrokimerism kan leda till mottagarens tolerans mot donatororganet. Ju fler förbipasserande celler organet har, desto fler celler skiftar det ut, vilket gör det lättare att bilda transplantationstolerans, vilket förklarar fenomenet med den mildaste avstötningen efter levertransplantation.

Flera metoder har visat sig inducera mikrokimerism, inklusive donatorspecifik transfusion, donatorbenmärgscellinfusion, donatorleukocytinfusion, mjältskiva i kombination med organtransplantation och så vidare.

Bildandet av mikrokimerism är förmodligen en av de långsiktiga överlevnadsmekanismerna för det transplanterade transplantatet, och upptäckten av mikrokimerism efter transplantation kan effektivt förutsäga immuntoleransen och avstötningen av transplantatet, medan det inte finns någon särskilt effektiv kvantifieringsmetod. Dessutom förblir förhållandet mellan mikrokimerism och immunotolerans tveksamt, såsom till vilken nivå av den kliniska mikrokimerismbildningen som tyder på stabil immuntolerans, och om det är möjligt att bestämma tillbakadragandet av immunsuppressiva medel genom detektering av mikrochimerism och etc., dessa är akuta problem kvar att lösa och klargöra. Baserat på InDel-stället (Insertion Deletion) kombinerat med kvantitativ realtidspolymeraskedjereaktion, kan detektionskänsligheten nå 0,001 % till 0,01 %, vilket exakt kan kvantifiera mikrokimerismnivån och dynamiskt övervaka mikrokimerism efter transplantationen.

Samtidigt fortsatte forskare från Stanford University i USA att rapportera under 2014 och 2015 att man använder en ny generation av high-throughput sekvenseringsteknologi (NGS) för att detektera nivån av donatorhärlett cellfritt DNA (cf DNA) i blod plasma från mottagare efter hjärt- och lungtransplantation. Utredarna fann att nivån av donatorhärlett cf-DNA ökade signifikant när akut eller kronisk avstötning inträffar, så det kan användas som en markör för att återspegla avstötning eller transplantatskada.

Det har rapporterats att mikrokimerisering och donator-cfDNA-nivåer är korrelerade med avstötning efter organtransplantation, men dessa studier är mestadels baserade på ett litet antal fall och vars resultat är kvalitativa eller med lågt upplösningsvärde på grund av begränsade detektionstekniker. ger inte en specifik mikrokimerismhastighet.

Därför måste utredarna klargöra rollen av mikrokimerism och nivån av donatorhärlett cf DNA under transplantatskada såväl som avstötning efter transplantation med hjälp av en ny generation av detektionsteknologi för multicenterstudie med stor provstorlek.

I denna studie kommer 950 fall av organtransplantation, varav 600 fall av njurtransplantation, 300 fall av levertransplantation och 50 fall av lungtransplantation att rekryteras och upptäckas. 8 ml perifert blod kommer att samlas upp i 1 rör med EDTA-antikoagulation. Tidpunkterna för insamlingen är följande: Patienter med rutinbehandling efter transplantation utförs en gång i veckan i 1 månad och sedan 3, 6 och 12 månader efter transplantation. Vid akut avstötning kommer det extra blodet att samlas in en gång på diagnosdagen och en gång efter 7 dagars behandlingsremission. Alla prover detekterades för mikrochimerism och cfDNA.