臓器移植後の急性拒絶反応のバイオマーカーとしてのマイクロキメリズムとcfDNAの臨床研究 (CSMCDTITAROT)

臓器移植は現在、末期臓器不全患者に対する有効な治療法となっています。 2010 年に市民の死後、自発的な臓器提供のパイロットが開始されて以来、2015 年には、自発的な臓器提供が唯一の合法的な臓器移植源となり、司法ルートに依存して臓器を取得することから市民の自発的な提供へと移行しました。中国で成功裏に達成され、寄付のケースとその数は年々増加しています。 現在、中国の年間臓器移植件数は1万件を超えており、その中で腎移植が5000件以上、肝移植が2000件以上で首位に立っています。

臓器移植後の早期機能障害の最も一般的な原因は依然として拒絶反応であり、ドナーとレシピエントの主要組織適合性抗原 (MHC、ヒト MHC、HLA としても知られる) のミスマッチは、移植後の拒絶反応の主な原因です。 したがって、臓器移植におけるマッチングの重要性は広く受け入れられています。 HLA タイピングと HLA 高解像度タイピングは、ますます一般的になっています。 同時に、最新の国際研究は、臓器移植における低解像度 HLA タイピングも重大な拒絶反応を引き起こす可能性があることを示していますが、将来の傾向である HLA 高解像度タイピングは、全生存率を改善する可能性があります。 さらに、NGS ハイスループット シーケンスは、HLA 高解像度分類を新たな高みへと押し上げます。

HLA マッチングに加えて、受信者は、手術後の長期生存に大きく影響するドナー移植片に対する特定の免疫寛容を設定できます。 多数の実験的および臨床的データは、マイクロキメリズム形成が移植後のドナー特異的免疫寛容をうまく促進できることを示唆しています。 キメラとは、同種移植や異種移植を受けた際に、ドナーの細胞がレシピエントの体内に存在し、レシピエントの細胞が移植片の中に存在するように、ドナーとレシピエントの細胞が共存・移動している状態を指します。 その中で、マイクロキメラとは、移植レシピエントの末梢血循環における低レベルのドナー細胞 (通常 0.01% 未満) を指し、固形臓器移植患者によく見られます。 マイクロキメリズムの概念は、1990 年代にピッツバーグ大学医学部の Thomas Starzl によって最初に提案され、マイクロキメリズムと移植免疫寛容との間に因果関係が存在する可能性があることを指摘しました。 マイクロキメリズムの長年の存在は、ドナー臓器に対するレシピエントの寛容につながる可能性があります。 通過細胞が多ければ多いほど、より多くの細胞が移動し、移植耐性を形成しやすくなります。これは、肝移植後の最も軽い拒絶反応の現象を説明しています。

ドナー特異的輸血、ドナー骨髄細胞注入、ドナー白血球注入、臓器移植と組み合わせた脾臓切片など、いくつかの方法がマイクロキメリズムを誘発することがわかっています。

マイクロキメリズムの形成は、おそらく移植された移植片の長期生存メカニズムの1つであり、移植後のマイクロキメリズムの検出は、移植片の免疫寛容と拒絶を効果的に予測できますが、非常に効果的な定量方法はありません. また、マイクロキメリズムと免疫寛容の関係については、安定した免疫寛容を示唆する臨床的マイクロキメリズムの形成がどのレベルまでなのか、マイクロキメリズムの検出により免疫抑制剤の離脱を判断できるかどうかなど、疑問が残ります。解決と明確化が残されている緊急の問題です。 定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応と組み合わせた挿入削除 (InDel) サイトに基づいて、検出感度は 0.001% から 0.01% に達し、マイクロキメリズムレベルを正確に定量化し、移植後のマイクロキメリズムを動的に監視できます。

同時に、米国のスタンフォード大学の科学者は、2014 年と 2015 年に、新世代のハイスループット シーケンス技術 (NGS) を使用して、血中のドナー由来の無細胞 DNA (cf DNA) のレベルを検出することを報告し続けました。心臓および肺移植後のレシピエントの血漿。 研究者らは、ドナー由来の cf DNA のレベルが、急性または慢性の拒絶反応が起こると大幅に増加することを発見しました。したがって、拒絶反応または移植損傷を反映するマーカーとして使用できます。

マイクロキメラ化とドナー cfDNA レベルが臓器移植後の拒絶反応と相関していることが報告されていますが、これらの研究はほとんどが少数の症例に基づいており、その結果は定性的であるか、検出技術が限られているために解像度が低いため、特定のマイクロキメリズム率を提供しません。

したがって、研究者は、マイクロキメリズムの役割と、移植片損傷中のドナー由来のcf DNAのレベル、および移植後の拒絶反応を、大規模なサンプルサイズの多施設研究のための新世代の検出技術を使用して明らかにする必要があります。

この研究では、950 例の臓器移植、そのうち 600 例の腎移植、300 例の肝臓移植、50 例の肺移植が募集され、検出されます。 8mlの末梢血をEDTA抗凝固剤で1本のチューブに採取します。 コレクションの時点は次のとおりです。移植後の通常の治療を受けた患者は、週に1回、1か月間、移植後3、6、および12か月に行われます。 急性拒絶反応の場合、追加の血液は診断日に 1 回採取され、7 日間の治療寛解後に 1 回採取されます。 すべてのサンプルで、マイクロキメリズムと cfDNA が検出されました。