Étude clinique du microchimérisme et de l'ADNc comme biomarqueurs du rejet aigu après transplantation d'organe (CSMCDTITAROT)

La transplantation d'organes est devenue une thérapie efficace pour les patients atteints d'insuffisance organique en phase terminale à l'heure actuelle. Depuis le lancement du projet pilote de don volontaire d'organes après le décès de citoyens en 2010, le don volontaire d'organes est devenu la seule source légitime de greffes d'organes en 2015, et le passage du recours aux voies judiciaires pour obtenir les organes au don volontaire de citoyens s'est été réalisé avec succès en Chine, les cas de dons et le nombre ont augmenté d'année en année. A l'heure actuelle, le nombre annuel de transplantations d'organes en Chine a dépassé les 10 000 cas, dont la transplantation rénale et la transplantation hépatique étaient en tête, avec respectivement plus de 5 000 cas et 2 000 cas.

Le rejet reste la cause la plus fréquente de dysfonctionnement précoce après une transplantation d'organe, et la non-concordance des principaux antigènes d'histocompatibilité (MHC, MHC humain, également connu sous le nom de HLA) du donneur et du receveur est la principale cause de rejet après la transplantation. Par conséquent, l'importance de l'appariement dans la transplantation d'organes a été largement acceptée. Le typage HLA et le typage HLA haute résolution deviennent de plus en plus courants. Dans le même temps, les dernières recherches internationales montrent que le typage HLA à basse résolution dans la transplantation d'organes peut également provoquer un rejet important, tandis que le typage HLA à haute résolution, la tendance future, peut améliorer le taux de survie global. De plus, le séquençage à haut débit NGS poussera la classification HLA à haute résolution vers un nouveau sommet.

Outre l'appariement HLA, les receveurs peuvent établir une tolérance immunitaire spécifique aux greffons du donneur, ce qui affectera considérablement la survie à long terme après l'opération. Un grand nombre de données expérimentales et cliniques ont suggéré que la formation de microchimérisme peut faciliter avec succès la tolérance immunitaire spécifique du donneur après la transplantation. La chimère fait référence à l'état des cellules du donneur et du receveur qui coexistent et se déplacent les unes vers les autres, car les cellules du donneur existent dans le corps du receveur après avoir reçu l'allogreffe ou la xénogreffe et les cellules du receveur existent également dans la greffe. Parmi eux, les microchimères font référence aux faibles niveaux de cellules du donneur (généralement moins de 0,01 %) dans la circulation sanguine périphérique des receveurs de greffe, ce qui est couramment observé chez les patients ayant subi une greffe d'organe solide. Le concept de microchimérisme a été proposé pour la première fois par Thomas Starzl à l'École de médecine de l'Université de Pittsburgh dans les années 1990, qui a souligné qu'entre le microchimérisme et la tolérance immunitaire de la greffe se trouve une possible relation de cause à effet. La présence de longue date du microchimérisme peut entraîner une tolérance du receveur à l'organe du donneur. Plus l'organe a de cellules passantes, plus il en sort, ce qui facilite la formation d'une tolérance à la transplantation, ce qui explique le phénomène de rejet le plus léger après une transplantation hépatique.

Plusieurs méthodes ont été trouvées pour induire le microchimérisme, notamment la transfusion spécifique au donneur, la perfusion de cellules de moelle osseuse du donneur, la perfusion de leucocytes du donneur, la tranche de rate combinée à la transplantation d'organes, etc.

La formation du microchimérisme est probablement l'un des mécanismes de survie à long terme du greffon greffé, et la détection du microchimérisme après transplantation permet de prédire efficacement la tolérance immunitaire et le rejet du greffon, alors qu'il n'existe pas de méthode de quantification très efficace. De plus, la relation entre le microchimérisme et l'immunotolérance reste discutable, par exemple à quel niveau de la formation clinique de microchimérisme qui suggère une tolérance immunitaire stable, et s'il est possible de déterminer le retrait des agents immunosuppresseurs par la détection du microchimérisme, etc., ces sont des problèmes urgents qui restaient à résoudre et à clarifier. Sur la base du site de suppression d'insertion (InDel) combiné à une réaction en chaîne par polymérase quantitative en temps réel, la sensibilité de détection peut atteindre 0,001 % à 0,01 %, ce qui permet de quantifier avec précision le niveau de microchimérisme et de surveiller dynamiquement le microchimérisme après la transplantation.

Dans le même temps, des scientifiques de l'Université de Stanford aux États-Unis ont continué à signaler en 2014 et 2015 que l'utilisation d'une nouvelle génération de technologie de séquençage à haut débit (NGS) pour détecter le niveau d'ADN sans cellule dérivé du donneur (cf ADN) dans le sang plasma des receveurs après transplantation cardiaque et pulmonaire. Les chercheurs ont découvert que le niveau d'ADN cf dérivé du donneur était considérablement augmenté en cas de rejet aigu ou chronique, il pouvait donc être utilisé comme marqueur pour refléter le rejet ou la lésion du greffon.

Il a été rapporté que la microchimérisation et les niveaux de donneur-cfDNA sont corrélés avec le rejet après transplantation d'organe, mais ces études sont principalement basées sur un petit nombre de cas et dont les résultats sont qualitatifs ou avec une faible valeur de résolution en raison de techniques de détection limitées. ne fournissent pas un taux de microchimérisme spécifique.

Par conséquent, les chercheurs doivent clarifier le rôle du microchimérisme et le niveau d'ADN cf dérivé du donneur pendant la lésion du greffon ainsi que le rejet après la transplantation en utilisant une nouvelle génération de technologie de détection pour une étude multicentrique avec un échantillon de grande taille.

Dans cette étude, 950 cas de transplantation d'organe, dont 600 cas de transplantation rénale, 300 cas de transplantation hépatique et 50 cas de transplantation pulmonaire seront recrutés et détectés. 8 ml de sang périphérique seront prélevés dans 1 tube avec anticoagulation EDTA. Les moments de collecte sont les suivants : Les patients ayant un traitement de routine après la greffe sont préformés une fois par semaine pendant 1 mois puis à 3, 6 et 12 mois après la greffe. En cas de rejet aigu, le sang supplémentaire sera prélevé une fois le jour du diagnostic, et une fois après 7 jours de rémission du traitement. Tous les échantillons ont été détectés pour le microchimérisme et le cfDNA.