Efecto del tabaquismo en las quimiocinas relacionadas con los macrófagos antes y después del tratamiento no quirúrgico de la periimprantitis inicial (PICF)

1. Aprobación y determinación de ética del tamaño de la muestra

   El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de Investigación Clínica de la Universidad de Başkent, Ankara, Türkiye (Número de protocolo de estudio: D-KD24/01) de acuerdo con la Declaración de Helsinki de 1975, según lo revisado en 2013.

   El análisis de potencia se realizó utilizando el software GPower. Según investigaciones anteriores que comparan los niveles de MIP-1α pre y posterior al tratamiento en las muestras de PICF, se calculó el tamaño mínimo de la muestra requerido como 52 participantes, con 26 participantes en cada grupo para lograr una potencia del 80% (tamaño de efecto F = 0.2; Estimando una tasa de abandono del 20%, el presente estudio tuvo como objetivo reclutar a 63 pacientes.

2. Diseño de estudio

   La planificación del estudio, el reclutamiento de pacientes, los tratamientos y la recolección de muestras se realizaron en las clínicas del Departamento de Periodontología, Facultad de Odontología, Universidad Gazi, Türkiye, entre enero de 2024 y octubre de 2024. Todos los individuos que fueron diagnosticados con periimplantitis (sangrado periimplante en el sondeo (BOP+) y/o supuración, PPD de ≥ 6 mM y pérdida ósea crestal radiográfica de ≥ 3 mM apical de la porción más coronal de la parte intraosética de El implante dental en su visita inicial en las clínicas de periodontología de la Facultad de Odontología de la Universidad Gazi fue invitado a participar en el estudio.

3. Criterios de inclusión y exclusión

   Los criterios de inclusión fueron: 1) disposición a participar en el estudio, 2) tener un implante dental que se cargó al menos un año antes del inicio del estudio, que se diagnosticó con periimplantitis, y que tiene una EP de 6-7 mM , 3) Los implantes habían estado en funcionamiento durante al menos 1 año. Los criterios de exclusión fueron: 1) haber recibido terapia periodontal o cualquier tratamiento de descontaminación oral o haber recibido antibióticos o esteroides en los últimos seis meses antes del inicio del estudio, 2) estar embarazada o lactancia, 3) ser diagnosticado con artritis reumatoide, lupus eritematoso, Enfermedades sistémicas mal controladas (como diabetes o hipertensión), 4) tener antecedentes médicos de radiación o terapia contra el cáncer.

4. Población de estudio

   Se realizaron exámenes integrales periodontales y radiográficos de los dientes e implantes dentales para todos los participantes al inicio. Los parámetros clínicos a nivel de sitio se midieron en cuatro sitios de cada implante (mesial, bucal, distal y lingual/palatina). Las mediciones incluyeron PPD (MM), BOP, índice de placa visible (VPI) y ancho de evaluaciones de tejido queratinizado periimplante (≥ 2 mm o <2 mm). Se obtuvieron radiografías periácticas para medir el nivel óseo radiográfico periimplante. Todas las mediciones clínicas se realizaron utilizando una sonda periodontal. Todas las mediciones fueron realizadas por el mismo investigador. Los pacientes que tenían PPD ≥ 8 mm alrededor de sus implantes fueron excluidos del estudio.

   Un total de 63 pacientes con periimprantitis que cumplieron con los criterios de inclusión y exclusión fueron reclutados para el estudio. Todos los participantes recibieron información verbal y escrita sobre la naturaleza del estudio, y se obtuvo el consentimiento informado por escrito de cada participante. La población de estudio se dividió más tarde en dos grupos basados ​​en fumar cigarrillos autoinformados. Los fumadores eran individuos que informaron fumar al menos un cigarrillo por día durante al menos un año (pacientes con periimprantitis peri-implantitis (SPI), n = 30), mientras que los nunca fumadores eran individuos que nunca habían usado tabaco en ninguna forma (no fumar Pacientes de periimplantitis (NSPI), n = 33).

5. Tratamiento peri-implantado y periodontal

   Todos los pacientes en ambos grupos recibieron tratamiento periodontal no quirúrgico de la boca completa con escaladores ultrasónicos estériles (pázoe de pezo cavitron ultrasónico escalador de escalera (HW-5L), EMS, Suiza)), Correts (LSH6-H7, Osung MND, Corea) y Riegaciones salinas estériles. El tratamiento no quirúrgico de la periimplantitis implicó el desbridamiento de acumulaciones duras y blandas en superficies de implantes utilizando cuajas de titanio (escalador de implante de titanio 204SD, Hu-fríteo) durante 15 minutos, seguido de riego con solución salina estéril. La anestesia de infiltración se usó si el paciente solicitó. Se dieron instrucciones de higiene oral personalizadas a todos los participantes después del tratamiento. Después de 2 meses (8 semanas), los pacientes recibieron una llamada para una visita de control, incluida un desbridamiento supragingal e instrucciones de higiene oral. Todas las mediciones clínicas y radiográficas se repitieron 4 meses después de la finalización de su tratamiento peri-implantado no quirúrgico.

6. Se recogieron muestras de PICF de recolección de muestras de todos los participantes antes (T0) y 4 meses después del tratamiento no quirúrgico periimplante (T1). Se utilizó un protocolo de muestreo de 30 segundos. Antes de muestreo, el área de muestra se aisló con rollos de algodón y se secó usando una suave corriente de aire. Se recogió una sola muestra de PICF de cada bolsillo de implante utilizando tiras de periopaper (Oralflow Inc., Nueva York, EE. UU.). Estas tiras de papel se colocaron 1-2 mm bajo la grieta del bolsillo y se mantuvieron precisamente 30 segundos. Para minimizar la evaporación, la cuantificación del volumen se realizó inmediatamente después del muestreo utilizando un dispositivo PerioTron 8000 (Oralflow Inc., Nueva York, EE. UU.). El Periotron 8000 se calibró antes de comenzar el estudio y se recalibró periódicamente. Después de cuantificar el volumen PICF, cada tira de papel se colocó en un tubo de Eppendorf seco. Las muestras se almacenaron a -80 ° C hasta que se transfirieron en hielo seco a la Universidad de Turku, Instituto de Odontología, Finlandia, para análisis bioquímicos.
7. Análisis de biomarcadores

Cada muestra de PICF se eluyó en 200 µl de solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contenía albúmina sérica bovina al 0,5%. Los tubos se centrifugaron a 10,000 g a 4 ° C durante 10 minutos. Las concentraciones CCL-2, CCL-8, CCL-3 y CXCL-9 se detectaron con Luminex® 200 ™ usando kits de inmunoensayo multiplex (ensayos de quimiocinas humanas Bio-Plex Pro ™, Bio-Rad Laboratories, California, EE. UU.) las recomendaciones del fabricante. Las concentraciones (PG/ml) se convirtieron a la cantidad de mediador recogido a los 30 segundos (PG/30 s). Los límites inferiores de cuantificación (LLOQ) para cada quimiocina fueron los siguientes: 0.3 pg/ml para CCL-2, 0.03 pg/ml para CCL-8, 0.4 pg/ml para CCL-3 y 1.8 pg/ml para CXCL- 9.

8. Análisis estadístico

El análisis de datos se realizó utilizando IBM SPSS Statistics (versión 29.0 para Windows; IBM Corp). La normalidad de los resultados se evaluó con la prueba de Shapiro-Wilk. Las diferencias grupales en las variables categóricas se evaluaron utilizando la prueba de chi-cuadrado de Pearson, mientras que la distribución de edad entre grupos se comparó utilizando la prueba t de muestras independientes. La prueba U de Mann-Whitney se aplicó para comparar resultados clínicos y bioquímicos entre grupos. Para comparar resultados de línea de base (T0) y postoperatorios de 4 meses (T1) de variables bioquímicas y clínicas dentro de cada grupo, se utilizó la prueba de rango firmado de Wilcoxon. Se usó análisis de medidas repetidas de prueba de varianza (controlada por edad) para determinar si hay una diferencia en la efectividad del tratamiento a lo largo del tiempo. Las conversiones logarítmicas (LOG10) se aplicaron a los niveles de quimiocinas (PG/30 s) antes del análisis de medidas repetidas de la prueba de varianza. Se consideró que un valor p de <0.05 era estadísticamente significativo para todos los parámetros. Se usó un modelo de regresión logística de cuatro parámetros para calcular las concentraciones de quimiocinas en PICF. CCL-2 se detectó en todas las muestras, mientras que CCL-8 estaba por debajo del límite de detección (LOD) en 77 muestras (T0: 55%, T1: 85%), CCL-3 en 30 muestras (T0: 15%, T1 : 40%), y CXCL-9 en 26 muestras (T0: 15%, T1: 34%). En los análisis descriptivos, debido a un alto número de datos faltantes, CCL-8 se excluyó de las comparaciones estadísticas, mientras que las concentraciones CCL-3 y CXCL-9 por debajo de la curva de regresión se sustituyeron con un valor igual a la mitad de su límite más bajo de cuantificación ( LOD/2)