Efeito do tabagismo em quimiocinas relacionadas a macrófagos antes e depois do tratamento não cirúrgico da peri-implantite inicial (PICF)

1. Aprovação de ética e determinação do tamanho da amostra

   O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Clínica da Universidade Başkent, Ancara, Türkiye (Número do Protocolo do Estudo: D-KD24/01) de acordo com a Declaração de Helsinque de 1975, conforme revisado em 2013.

   A análise de energia foi realizada usando o software GPood. Com base em pesquisas anteriores comparando os níveis de MIP-1α pré e pós-tratamento em amostras de PICF, o tamanho mínimo de amostra exigido foi calculado como 52 participantes, com 26 participantes em cada grupo para atingir um poder de 80% (tamanho do efeito f = 0,2; erro α = 0,05). Estimando uma taxa de abandono de 20%, o presente estudo teve como objetivo recrutar 63 pacientes.

2. Desenho do estudo

   O planejamento do estudo, o recrutamento de pacientes, os tratamentos e a coleta de amostras foram realizados nas clínicas do Departamento de Periodontologia, Faculdade de Odontologia, Universidade de Gazi, Türkiye, entre janeiro de 2024 e outubro de 2024. Todos os indivíduos que foram diagnosticados com peri-implantite (sangramento peri-implante na sondagem (BOP+) e/ou supuração, PPD de ≥ 6 mm e perda óssea do Crestal Radiográfica de ≥ 3 mm apical da porção mais coronal da parte intraóssea de O implante dentário em sua visita inicial às clínicas de periodontologia da Faculdade de Odontologia da Universidade Gazi, foi convidado a participar do estudo.

3. Critérios de inclusão e exclusão

   Os critérios de inclusão foram: 1) Disposição de participar do estudo, 2) tendo um implante dentário que foi carregado pelo menos um ano antes do início do estudo, diagnosticado com peri-implantite, e que possui DP de 6-7 mm , 3) os implantes estavam em função por pelo menos 1 ano. Os critérios de exclusão foram: 1) tendo recebido terapia periodontal ou qualquer tratamento de descontaminação oral ou recebido antibióticos ou esteróides nos últimos seis meses antes do início do estudo, 2) grávida ou amamentação, 3) sendo diagnosticados com artrite reumatóide, lúpus eritematosus, Doenças sistêmicas mal controladas (como diabetes ou hipertensão), 4) com histórico médico de radiação ou terapia do câncer.

4. População estudada

   Os exames periodontais e radiográficos abrangentes dos dentes e implantes dentários foram realizados para todos os participantes na linha de base. Os parâmetros clínicos no nível do local foram medidos em quatro locais de cada implante (mesial, bucal, distal e lingual/palatal). As medições incluíram PPD (MM), BOP, índice de placa visível (VPI) e largura do tecido queratinizado peri-implante (≥ 2 mm ou <2 mm). Radiografias peri-apicais foram obtidas para medir o nível ósseo radiográfico peri-implante. Todas as medidas clínicas foram realizadas usando uma sonda periodontal. Todas as medidas foram realizadas pelo mesmo investigador. Os pacientes que tiveram PPD ≥ 8 mM em torno de seus implantes foram excluídos do estudo.

   Um total de 63 pacientes com peri-implantite que atenderam aos critérios de inclusão e exclusão foram recrutados para o estudo. Todos os participantes receberam informações verbais e escritas sobre a natureza do estudo, e o consentimento informado por escrito foi obtido de cada participante. A população do estudo foi posteriormente dividida em dois grupos com base no tabagismo autorreferido. Os fumantes eram indivíduos que relataram fumar pelo menos um cigarro por dia por pelo menos um ano (fumando pacientes com peri-implantite (SPI), n = 30), enquanto nunca fumantes eram indivíduos que nunca haviam usado tabaco de nenhuma forma (não fumando pacientes peri-implantite (NSPI), n = 33).

5. Tratamento peri-implante e periodontal

   Todos os pacientes de ambos os grupos receberam tratamento periodontal não cirúrgico de boca completa usando escalleiros ultrassônicos estéreis (pecula-pica-pau-pica-pau-pecuador de peças de mão Scaler Ultrassonic Scaler (HW-5L), EMS, Suíça)), Currets (Lsh6-H7, Osung MND, Coréia) e Irrigações salinas estéreis. O tratamento não cirúrgico da peri-implantite envolveu o desbridamento de acumulações duras e suaves em superfícies de implantes usando curetes de titânio (Titanium Implant Scaler 204SD, Hu-Friedy) por 15 minutos, seguido de irrigação com solução salina estéril. A anestesia de infiltração foi usada se solicitada pelo paciente. As instruções personalizadas de higiene oral foram dadas a todos os participantes após o tratamento. Após 2 meses (8 semanas), os pacientes receberam uma chamada para uma visita de controle, incluindo um desbridamento supragenativo e instruções de higiene oral. Todas as medidas clínicas e radiográficas foram repetidas 4 meses após a conclusão de seu tratamento peri-implante não cirúrgico.

6. A amostras de amostras PICF foram coletadas de todos os participantes antes (T0) e 4 meses após o tratamento não cirúrgico (T1) Peri-Implante. Foi utilizado um protocolo de amostragem de 30 segundos. Antes da amostragem, a área de amostra foi isolada com rolos de algodão e seca usando um fluxo suave de ar. Uma única amostra PICF foi coletada de cada bolso do implante usando tiras de periopaper (Oralflow Inc., Nova York, EUA). Essas tiras de papel foram colocadas 1-2 mm sob a fenda do bolso e mantidas por exatamente 30 segundos. Para minimizar a evaporação, a quantificação do volume foi realizada imediatamente após a amostragem usando um dispositivo periotron 8000 (Oralflow Inc., Nova York, EUA). O periotron 8000 foi calibrado antes de iniciar o estudo e recalibrado periodicamente. Após quantificar o volume PICF, cada tira de papel foi colocada em um tubo seco Eppendorf. As amostras foram armazenadas a -80 ° C até serem transferidas em gelo seco para a Universidade de Turku, Instituto de Odontologia, Finlândia, para análises bioquímicas.
7. Análise de Biomarcadores

Cada amostra do PICF foi eluída em 200 µl de solução salina tamponada com fosfato (PBS) contendo albumina sérica bovina a 0,5%. Os tubos foram então centrifugados a 10.000 g a 4 ° C por 10 minutos. As concentrações CCL-2, CCL-8, CCL-3 e CXCL-9 foram detectadas com Luminex® 200 ™ usando kits de imunoensaio multiplex (Bio-Plex Pro ™ Human Chemokine ensaios, Bio-Rad Laboratories, Califórnia, EUA) de acordo com as recomendações do fabricante. As concentrações (PG/mL) foram convertidas na quantidade de mediador coletada em 30 segundos (PG/30 s). Os limites inferiores da quantificação (LLOQ) para cada quimiocina foram os seguintes: 0,3 pg/ml para Ccl-2, 0,03 pg/ml para CCL-8, 0,4 pg/ml para CCl-3 e 1,8 pg/ml para CXCl- 9.

8. Análise Estatística

A análise de dados foi realizada usando as estatísticas do IBM SPSS (versão 29.0 para Windows; IBM Corp). A normalidade dos resultados foi avaliada com o teste de Shapiro-Wilk. As diferenças de grupo nas variáveis ​​categóricas foram avaliadas usando o teste de qui-quadrado de Pearson, enquanto a distribuição de idade entre os grupos foi comparada usando o teste t de amostras independentes. O teste U de Mann-Whitney foi aplicado para comparar os resultados clínicos e bioquímicos entre os grupos. Para comparar os resultados da linha de base (T0) e de 4 meses pós-operatória (T1) de variáveis ​​bioquímicas e clínicas dentro de cada grupo, foi utilizado o teste assinado de Wilcoxon. Medidas repetidas A análise do teste de variância (controlada para a idade) foi usada para determinar se há uma diferença na eficácia do tratamento ao longo do tempo. As conversões logarítmicas (log10) foram aplicadas aos níveis de quimiocina (PG/30 S) antes da análise de medidas repetidas do teste de variação. Um valor p <0,05 foi considerado estatisticamente significativo para todos os parâmetros. Um modelo de regressão logística de quatro parâmetros foi utilizado para calcular as concentrações de quimiocina no PICF. O CCL-2 foi detectado em todas as amostras, enquanto o CCL-8 estava abaixo do limite de detecção (LOD) em 77 amostras (T0: 55%, T1: 85%), CCL-3 em 30 amostras (T0: 15%, T1 : 40%) e CXCL-9 em 26 amostras (T0: 15%, T1: 34%). Nas análises descritivas, devido a um alto número de dados ausentes, o CCL-8 foi excluído de comparações estatísticas, enquanto as concentrações de CCL-3 e CXCL-9 abaixo da curva de regressão foram substituídas por um valor igual à metade do limite mais baixo da quantificação ( LOD/2)