Onko Helicobacter pylori -infektio syy tai hoidon epäonnistuminen lasten raudanpuuteanemiassa Bangladeshissa?

Täydentäväksi tutkimukseksi ehdotamme:

1. Mahdollista, kaksoissokkoutettua, lumekontrolloitua kenttäkoetta ehdotetaan kahdellesadallekuusikymmenelle lapselle kaupunkien lähiyhteisöstä lähellä Dhakan kaupunkia.
2. Raudan imeytymisen arviointi ennen ja jälkeen infektiolääkityksen 20 lapsella, joilla on H. Pylori -infektio ja raudanpuuteanemia

3. Kenttäkoe

   1.1 Tutkimusjoukon kuvaus Lapset rekrytoidaan Nandiparasta, kaupunkien lähistöltä, joka sijaitsee 11 kilometriä Dhakan kaupungista koilliseen. Tässä yhteisössä on 3 500 asukasta noin 2,5 neliökilometrin alueella. Asukkaista 70 % miehistä on luokiteltu päivätyöläisiksi, 20 % riksanvetäjiksi ja 5 % puuseppiksi tai palvelushaltijoiksi. Naisista 15 prosenttia on päivätyöläisiä ja 85 prosenttia kotiäitejä. Perheen keskikoko on 4,5 jäsentä. Slummissa on kunnallinen vesihuolto juomiseen ja ruoanlaittoon, ja useimmat perheet asuvat huonosti rakennetuissa taloissa. Suurin osa taloista on mutaseinämäisiä olkikattoisilla kuivilla lehdillä ja bambu- tai peltikatoilla. Alle viisivuotiaita on noin 700. H. pylori -infektion esiintyvyys alle viidellä lapsella tässä yhteisössä on 50 %.44 Kansainvälinen ripulisairauksien tutkimuskeskus, Bangladesh (ICDDR,B) on johtanut viikoittaista klinikkaa väestön vähäisten sairaustapausten varalta vuodesta 1986 lähtien.

   Kaikille paikkakunnan lapsille tehdään aluksi seulonta raudanpuuteanemian ja H. pylori -infektion varalta. Tutkimuksen ja testien selityksen jälkeen hankitaan tietoinen suostumus vanhemmilta tai laillisilta huoltajilta. Demografiset tiedot, kuten nimi, syntymäaika, sukupuoli, paino, pituus, vanhempien taloudellinen asema, ruokinnan luonne ja aiempi lääkitys viimeisen kuukauden ajalta, tallennetaan.

   Raudanpuuteanemian seulonta Sormenpäällä otetuista 50 µl kapillaariverinäytteistä arvioidaan hemoglobiini (Hgb) -pitoisuus. Hemoglobiinipitoisuuden mittaaminen on hyödyllisin testi raudanpuuteanemian seulonnassa, koska se heijastaa suoraan kehossa esiintyvimmän välttämättömän rautayhdisteen määrää. Lapset, joiden hemoglobiinipitoisuus on alle 110 g/l, katsotaan anemiaksi. Lapsilla, joilla on alhainen Hgb, joka on todettu alkuseulonnassa, raudanpuuteanemian diagnoosi vahvistetaan venepunktion Hgb:n, seerumin ferritiinipitoisuuden ja seerumin transferriinireseptoripitoisuuden perusteella. Hemoglobiinipitoisuus voi laskea ohimenevästi tulehduksen tai infektion vuoksi, eikä se tällaisessa tilanteessa viittaa patologiseen anemiaan. Kaikista biokemiallisista testeistä raudan tilan arvioimiseksi alhainen SF on tarkin raudanpuutteen testi. SF:n suurin haittapuoli on, että se on helposti kohonnut vasteena mihin tahansa infektoijan tulehdustilaan. Yksi sTfR:n suuri etu on, että toisin kuin SF, infektio tai tulehdusprosessi ei vaikuta merkittävästi sTfR:ään. Kuitenkin sTfR-tasot kohoavat tilanteissa, joissa punasolujen vaihtuvuus on lisääntynyt, kuten hemolyyttinen anemia, eli talassemia jne. Tasainen raja-arvo >8,5 mg/l viittaa kohonneeseen sTfR:ään ja siten raudanpuutteeseen tai hemolyyttiseen anemiaan.

   Seerumin transferriinireseptorien mittaamisesta tulee myös lupaava uusi testi raudan tilan arvioinnissa erityisesti anemian epidemiologisessa arvioinnissa. Seerumin ferritiinimittausten yhteydessä suoritettu seerumin transferriinireseptori erottaa todellisen raudanpuutteen anemiasta kroonisten sairauksien tai tulehdussairauksien anemiasta ja tarjoaa siksi suuren edun raudanpuuteanemian todellisen esiintyvyyden määrittämisessä populaatiotutkimuksissa. . Matalan hemoglobiinin, matalan seerumin ferritiinin ja kohonneen seerumin transferriinireseptorin yhdistelmä on raudanpuuteanemian diagnostiikka. Raudanpuutteen diagnoosi tehdään, kun seuraavat kriteerit täyttyvät: transferriinireseptori > 8,3 mg/l, seerumin ferritiinipitoisuus

   H. Pylori -tartunnan saaneiden lasten seulonta Aneemiset lapset seulotaan H. Pylori -tartunnan varalta käyttämällä ureahengitystiettä (UBT), jota pidetään monissa H. pylori -infektion diagnostisissa vertailutesteissä. Olemme äskettäin perustaneet testin osoitteessa ICDDR, B.44 Lyhyesti menettelyt ovat seuraavat.

   Urea-hengitystesti Hengitysnäyte kerätään perusviivan 13 CO2 varalta vacutainerissa 2 tunnin paastojakson jälkeen. Tämän jälkeen lapset voivat juoda 100 ml täysmaitoa. Kymmenen minuuttia myöhemmin annetaan 40 mg 13 C ureaa (99 % 13C, Tracer Technologies, Boston, Massachusetts), kun se on liuotettu 25 ml:aan vettä. Substraatin annon jälkeen hengitysnäytteet otetaan uudelleen kahtena kappaleena 30 minuutin kuluttua. Näytteet kerätään kaksisuuntaisen lasten maskin, johon on kiinnitetty takaiskuventtiili, kautta tyhjiösäiliöön ja varastoidaan lähetettäväksi Alabaman yliopistoon hengitysilman CO2-massaspektrometrin 13C-pitoisuuden mittaamiseksi. Perustason ylitys ilmaistaan ​​tuhannesosina (delta 0/00). Hengitystesti, jossa lähtötason ylitys on 5,00/00 30 minuutin kohdalla, katsotaan positiiviseksi H. pylori -infektiolle.

   1.2 Tutkimuslasten valinta Tähän tutkimukseen otetaan raudanpuuteanemialapset, joiden paino ylittää 60 % National Center for Health Statisticsista (NCHS), joilla ei ole näyttöä puutosairaudesta tai systeemisestä infektiosta ja joiden vanhemmat ovat antaneet tietoisen suostumuksen.

   Poissulkemiskriteerit Lapset, joilla on seuraavat ongelmat, suljetaan pois.

   • Akuutti infektio tai ilmeinen tulehdusprosessi
   • Merkkejä vitamiinien puutteesta
   • Vaikea anemia (hemoglobiini
   • Vaikea aliravitsemus (marasmus, marasminen kwasiorkar tai kwasiorkar)
   • Koukkumatojen ja/tai Giardia lamblian (kysta tai vegetatiivinen muoto) esiintyminen ulosteen mikroskooppisessa tutkimuksessa
   • Rasvan esiintyminen ulosteen mikroskooppisessa tutkimuksessa
   • Piilöveren esiintyminen ulosteessa, kuten Guaiac-testi osoittaa
   • Antibioottien tai muiden lääkkeiden ottaminen mistä tahansa syystä edellisen kuukauden aikana

   1.3 Toimenpide Yksityiskohtainen sairaushistoria kirjataan. Paino ja pituus mitataan tutkimukseen ilmoittautumisen yhteydessä. Paljaat painot saadaan 10 g:n tarkkuudella vaakavaa'alla (Gebrüder Soehnle, Murrhardt, Saksa) ja kirjataan kolmen peräkkäisen mittauksen keskiarvo. Alle kaksivuotiaiden lasten makuupituus mitataan liukulaudan infantometrillä (Harpenden, St. Albans, Englanti). Vanhemmilla lapsilla seisomakorkeus on määritettävä paikallisesti rakennetulla instrumentilla, jossa metallimitta pidennetään jalkalevyn ja päätangon väliin, johon on kiinnitetty nestetaso vaakasuoran asennon varmistamiseksi. Kahden peräkkäisen korkeusmittauksen keskiarvo 0,1 cm:n tarkkuudella kirjataan havaittuna arvona. Mittauksia verrataan Terveystilastokeskuksen tietojen mukaisiin standardeihin ja Z-pisteellä arvioituun ravitsemustilaan. , Keskihajonnan yksiköiden mediaaniekvivalenttien prosenttiosuus määritetään ja luokitellaan Waterlow'n kaavion mukaisesti.

   Kaikki lapset käyvät fyysisen tarkastuksen kohteena jonkun tutkijan toimesta. Lapset jaetaan yhteen neljästä ryhmästä satunnaistuksen mukaan:

   • Anti Hp ryhmä
   • Fe ryhmä
   • Anti-Hp ryhmä + Fe ryhmä
   • Placebo ryhmä

   Jotta voitaisiin verrata rautahoitoresistenssin yleistä esiintyvyyttä raudanpuutteisten lasten keskuudessa, tulee olemaan viides ryhmä, joka koostuu lapsista, joilla on raudanpuuteanemia, mutta joilla ei ole H. pylori -infektiota. Tätä ryhmää hoidetaan rautahoidolla.

   Anti-Hp-hoito: Klaritromysiini 15 mg/kg/vrk kahteen annokseen jaettuna 10 päivän ajan plus omepratsoli 20 mg kerta-annos 14 päivän ajan. ,

   Rautahoito: Rautaannos 3 mg/kg/vrk (tai noin 30 mg/vrk) rautasulfaattina, kuten Dallman41 suosittelee, annetaan yhtenä annoksena aamulla puolen tunnin sisällä ennen ateriaa. Rautahoitoa annetaan 90 päivän ajan.

   Placebo glukoosisiirappi

   1.3.1 Ravintolisä Interventiosiirappi(t) annetaan päivittäin yhtenä annoksena aamulla tyhjään mahaan (puoli tuntia ennen ateriaa). Lumeryhmän lapset saavat saman määrän glukoosisiirappia. Kaikki hoidot säilytetään identtisissä tummanruskeissa astioissa, ja niitä syöttää terveydenhuollon työntekijä, joka ei ole tietoinen tutkimuksen luonteesta ja pullon sisällöstä. Kaksikymmentä neljän tunnin syöntiä kirjataan ennalta koodatulle lomakkeelle ruokavalion palauttamisen avulla.

   Lapsia seurataan kolmen kuukauden ajan täydennyshoidon päättymisen jälkeen. Urea-hengitystesti toistetaan lisäyksen lopussa ja 1 ja 3 kuukauden kuluttua lisäyksen jälkeen. Laskimoverta (500 µl) otetaan seerumin ferritiinin, transferriinireseptorin ja hemoglobiinipitoisuuden määrittämistä varten 1 ja 3 kuukauden lisäravinteen jälkeen. Plaseboryhmän lapsille annetaan kolmen kuukauden valvottu rautalisähoitojakso tutkimusjakson lopussa.

   1.4 Otoskoon laskeminen Otoskoko on laskettu (i) H. Pylori -infektion esiintyvyyden, (ii) rautahoitovasteen puuttumisen esiintyvyyden perusteella.

   Näytteen kokolaskenta perustuu H. Pylori -infektion esiintyvyyteen

   Ottaen huomioon H. Pylori -infektion esiintyvyys 50 % ja raudanpuuteanemian 70 %44, odotamme H. Pyloriin liittyvää anemiaa 50 %:lla tämän yhteisön imeväisistä ja lapsista. Odotamme H. Pyloriin liittyvän raudanpuuteanemian esiintyvyyden vähenevän 25 % antibiootti- ja rautahoitojen jälkeen. Tämän suuruisen eron havaitsemiseksi 5 %:n tasolla ja 80 %:n teholla näytteen koko lasketaan seuraavasti:

   N = [P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Missä P1 = H. Pyloriin liittyvän anemian esiintyvyys P2 = H. Pyloriin liittyvän anemian esiintyvyys hoidon jälkeen

   =[50(50) +25(75)] * 8 / (25)2

   = 56 jokaisessa ryhmässä

   Aiemman tässä yhteisössä tehdyn tutkimuksen perusteella odotamme noin 15 prosentin keskeyttämisasteen. (Akramuzzaman SM, henkilökohtainen viestintä) tarvittava otoskoko on 65 lasta kussakin ryhmässä ja lasten kokonaisotos on 260.

   Laskelma perustuu rautahoitoon reagoimattomien esiintyvyyteen

   Havainnot meneillään olevasta tutkimuksesta, jossa suun kautta annettavaa raudan lisäysohjelmaa aneemisille potilaille suoritetaan Dinajpurissa (Bangladeshin pohjoisosassa), viittaa siihen, että 70 % rautalisää saaneesta ryhmästä ei reagoi (S. Rahman, henkilökohtainen viestintä). H. Pylori-infektion esiintyvyys ehdotetussa tutkimuspopulaatiossa on noin 50 %,35 ja odotamme, että oraalisen rautalisän jälkeen ei-vastetta saaneita on 40 % vähemmän H. pylori negatiivisessa ryhmässä verrattuna H. pylori positiiviseen ryhmään. . Tämän suuruisen eron havaitsemiseksi 5 %:n tasolla ja 80 %:n teholla näytteen koko lasketaan seuraavasti:

   N = [P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Missä P1 = anemian esiintyvyys rautalisän jälkeen H. pylori -tartunnan saaneilla lapsilla P2 = anemian esiintyvyys rautalisän jälkeen ei-tartunnan saaneilla lapsilla

   • [(70)(30) +(42)(58)] * 8 / (35)2 =46 kussakin ryhmässä

   15 %:n keskeyttämisasteella lapsia tulee olemaan 53 kussakin ryhmässä eli yhteensä 212 lapsen otos.

   Otamme tähän tutkimukseen suuremman otoksen, eli 260 lasta.

   1.5 Satunnaistaminen Perussatunnaistuskaavion laatii asianmukaisesti koulutettu henkilö, joka ei ole yhteydessä tutkimukseen, käyttäen satunnaisia ​​permutoituja lohkolukuja, joiden koko on kolme. Anti-Hp-hoitoa, rautahoitoa tai lumelääkettä sisältävät pullot ovat ulkonäöltään identtisiä, ja ne on järjestetty satunnaiskaaviota vastaavaan järjestykseen ja ne on numeroitu. Pullojen sarjanumero vastaa tutkimukseen otettujen potilaiden sarjanumeroa. Koska yksi lapsiryhmä saisi samanaikaisesti anti-Hp-hoitoa ja rautahoitoa, jokaiselle lapsiryhmälle tulee kaksi pulloa (pullot A tai B), jotta tutkimus tehdään kaksoissokkoutetuksi. Lapsille, jotka kuuluvat anti-Hp plus Iron -hoitoon, yksi pullo sisältää anti-Hp-hoitoa tai toinen rautahoitoa. Pelkästään rautaterapiaan tai anti-Hp-hoitoon kuuluvat lapset saavat yhden pullon, joka sisältää lääkkeen, kun taas toinen sisältää glukoosisiirappia. Koska anti-Hp-hoidon kesto on 14 päivää, tähän ryhmään kuuluvat lapset saavat glukoosisiirappia loppukuukauden ajan, jotta hoidon kesto olisi sama neljän ryhmän kesken.

   1.6 Laboratoriotesti Hb-pitoisuus määritetään syaanimethemoglobiinimenetelmällä, seerumin ferritiini määritetään radioimmunometrisellä määrityksellä. Seerumin transferriinireseptori mitataan entsyymikytkentäisellä immunosorbenttimäärityksellä (ELISA). Uloste testataan piilevän veren esiintymisen varalta guajakkireaktion avulla (Occultotest, Ames Co., Elkhart, Inc.,. USA). Seerumin pepsinogeeni ja gastriini mitataan radioimmunomäärityksellä.

   1.7 Tutkimuksesta vetäytyminen - Kohteen poikkeavuus joko siksi, että hän lähtee tutkimusalueelta muualle ennen tutkimuksen päättymistä tai

   - koska lapsi tarvitsee suunnittelematonta hoitoa vakavan väliaikaisen infektion vuoksi.

   Vieroituksen hoito analyysin aikana Kaikkien satunnaistettujen lasten tulokset otetaan mukaan tutkimuksen analyysiin. Poistuneiden potilaiden tiedot otetaan mukaan peruuttamishetkeen asti. Tehdään myös lisäanalyysi, jossa tällaiset potilaat suljetaan pois

   1.8 Tulosmuuttujat

   Suuri

   - H. Pylori-infektion ilmaantuvuus hoidon jälkeen.

   - Seerumin hemoglobiinin, seerumin ferritiinipitoisuuden nousu tai seerumin transferriinireseptorien tason lasku.

   - Lasten määrä kussakin ryhmässä, joilla on IDA ensisijaisesti määriteltynä ennen ja jälkeen interventiota

   Pieni

   - Antropometristen indeksien muutos

2. Raudan absorptiotutkimus Raudan absorptiotutkimukseen valitaan 20 lasta, joilla on positiivinen Urea-hengitystesti ja raudanpuuteanemia. Tutkimuksen tarkoitus ja kaikki raudan imeytymistutkimukseen liittyvät toimenpiteet selitetään vanhemmille ja hankitaan suostumukset. Ennen raudan imeytymistutkimuksen aloittamista kaikille lapsille annetaan kaupallista herakorjattua lehmänmaidon korviketta, jossa on 8 mg Fe/l (Nidina 1; Nestle, Pariisi, Ranska) vähintään kolmen viikon ajan. 21 päivän korvikeruokinnan jälkeen heidät otetaan kliinisen tutkimus- ja palvelukeskuksen Metabolic Ward -osastolle.

Leimatun raudan erytrosyyttien sisällyttämistä (radiostabiili) on käytetty menestyksekkäästi suolistosta tapahtuvan imeytymisen tutkimiseen. Punasolujen lisäämismenetelmään kuuluu raudan isotoopin oraalinen antaminen, minkä jälkeen mitataan raudan isotooppisuhde erytrosyyteissä valittuna ajankohtana annon jälkeen. Seuraamme tekniikkaa, jolla mitataan lasten raudan imeytymistä kaksoisstabiililla isotooppitekniikalla, jonka Kastenmayer et al. ovat äskettäin kehittäneet.

2.1 Raudan absorptiotutkimusmenetelmä

Merkittyjen rautasulfaattiliuosten valmistus Rikastettua 57Fe- ja 58Fe-rautaoksidia (Fe2O3) ostetaan Oak ridge National Laboratorylta (Oak Ridge, TN, USA). Raudan isotooppikoostumukset 58Fe-valmisteessa (Oak ridge National Laboratoriesin toimittamana) ovat (mg): (paino-%) 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,6)57 Fe (3,47) ja 58 Fe (60,28). Raudan isotooppikoostumukset 57Fe:ssä (paino-%) ovat; 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,60), 57Fe (3,47) ja 58Fe (60,28).

Rautaoksidi liuotetaan väkevään H2SO4:ään kuplittamalla hiilimonoksidia liuoksen läpi lämmössä noin neljän tunnin ajan. Liuos poistetaan sitten johtamalla puhdistettua typpeä sen läpi useiden minuuttien ajan. Äänenvoimakkuutta säädetään sitten vähennetyllä vedellä. Kahden ml:n erä saaduista 57 FeSO4- ja 58 FeSO4-liuoksesta siirretään läpinäkymättömiin ampulleihin. Jokainen ampulli puhdistetaan typellä ja suljetaan. Ampullit sisältävät joko 200 µg/ml kokonaisrautaa (rautasulfaattina) ja 150 µg/ml 57Fe:tä tai 700 µg/ml kokonaisrautaa (rautasulfaattina) ja 420 µg/ml 58Fe:tä. Yksittäisestä ampullista saatu alikvootti käytetään 57Fe- ja 58Fe-piikillä varustettujen työliuosten valmistukseen.

Parenteraalisten 57 Fe -liuosten stabiilisuus ja turvallisuus Ennen i.v. 57FeSO4-liuoksen pyrogeenisyys, steriiliys ja stabiilisuus testataan pikkulapsille. Limulus amoebocyte lysate (LAL) -testaus ja toistuva viljely bakteerien ja sienten kasvua varten sen varmistamiseksi, että 57FeSO4-liuokset ovat pyrogeenivapaita ja steriilejä tutkimuksessa käytettävillä pitoisuuksilla. Parenteraalisten liuosten ravintosisältö on kuvattu aiemmin. 57FeSO4-ravinneliuoksen kokonaisraudan pitoisuus määritetään atomiabsorptiospektrometrialla ennen suodatusta ja sen jälkeen (0,22 µ suodattimet) ja ajan kuluessa huoneenlämpötilassa.

2.2 Raudan absorptiotutkimuksen tutkimussuunnitelma Tutkimukseen osallistuvat imeväiset saavat yhdistelmän parenteraalista ja enteraalista ravintoa. 57FeSO4-liuos annetaan parenteraalisesti, kun taas 58FeSO4 annetaan enteraalisesti. Sen jälkeen 57Fe:n ja 58Fe:n erytrosyyttien sitoutuminen mitataan verinäytteistä, jotka otetaan kaksi viikkoa ensimmäisten infuusioiden jälkeen. Verenkierron erytrosyyteissä olevan suonensisäisen annoksen prosenttiosuutta käytetään vertailuna verenkierrossa olevien punasolujen imeytyneen raudan prosenttiosuudelle (suun kautta annetusta annoksesta). "Korjattu" erytrosyyttien 58Fe- ja 57Fe-inkorporaatioprosentti (58Fe inc-cor/57Fe inc-cor) lasketaan matemaattisesti, kuten alla on kuvattu.

Ennen iv-antoa lapsille 0,7-0,8 ml 57FeS04-liuosta (0,2 mg/ml) lisätään burytroliin, joka sisältää 30 ml parenteraaliseen ruokinnassa käytettävää ravintoliuosta steriileillä tekniikoilla. Aiemmin turvallisesti käytetty rauta-ravinneseos infusoidaan hitaasti lasten ääreislaskimoon 12-24 tunnin aikana infuusiopumpun avulla.

Pian 57FeSO4-liuoksen parenteraalisen infuusion alkamisen jälkeen lapsille annetaan enteraalinen 58FeSO4. Tänä aikana 57FeSO4:n parenteraalista infuusiota jatketaan. Kun on tarkistettu, että nenämahaletku on oikein sijoitettu mahalaukkuun, letku imetään mahan sisällön tarkistamiseksi. Jos maha on tyhjä, 1,5 ml 58 FeSO4 annostellaan suoraan ruiskun kautta syöttöletkuun. Sitten putki huuhdellaan 0,5 ml:lla steriiliä vettä. Parenteraalisen 57FeSO4:n annostus on 0,15 mg/kg (57Fe:llä rikastettu rautasulfaattiliuos), mikä antaisi 0,12 mg/kg 57Fe:a. Enteraaliannos on 1,5 mg/kg (58Fe-rikastettu rautasulfaattiliuos), josta saadaan 0,8 mg/kg 58Fe:tä. Lapset kotiutetaan Helicobacter pylori -infektion hoidossa (klaritromysiini plus omepratsoli) 10 päivän ajaksi.

Kuukauden hoidon jälkeen äitejä pyydetään tuomaan lapsensa CRSC:hen. Toistuva UBT- ja raudan absorptiotutkimus tehdään.

2.3 Verinäytteet Verinäytteet otetaan ennen stabiilien isotooppien (perustason) antamista ja 14 päivän kuluttua molemmissa tapauksissa. Verinäytteen koko on 200-300 µl suurempi näytettä kohti.

2.4 Punasolujen raudan inkorporaation laskeminen Punasoluihin annetun 58Fe:n ja 57Fe:n (mg) määrä tietyllä hetkellä 't' leimatun raudan annoksen antamisen jälkeen lasketaan samalla tavalla kuin Zlotkin et al 1995.

58 Fe sis. =Rt58/54 -Ro58/54 xFe ympyrä x 0,00322 Ro58/54

57 Feinc = R157/54-Ro57/54 x Fe ympyrä x 0,0218 Ro57/54

Tässä yhtälössä 58 Feinc ja 57 Feinc ilmaistaan ​​milligrammoina. R158/54, R157/54 ja R057/54 ovat isotooppisuhteet ilmaistuna painon perusteella 58Fe/54Fe:lle ja 57Fe/54Fe:lle, jotka määritetään pilkotuista verinäytteistä hetkellä "t" annostelun jälkeen ja lähtötasolla (ennen 58Fe ja pre57Fe-annokset) vastaavasti; Fe circ on kiertävän raudan määrä. Fe circ hetkellä "t"; 0,0032 ja 0,0218 ovat 58 Fe:n ja 57 Fe:n luonnolliset runsaat (painoosuudet). Kierrättävän kokonaisraudan määrä, Fe circ, ilmaistuna mg:na, arvioidaan seuraavasti

Fe circ. =BV x Hb x 3,47

missä BV on veren tilavuus litroina, oletetaan olevan 0,085 l/kg ruumiinpainosta; Hb on hemoglobiinipitoisuus g/l; 3,47 on raudan pitoisuus Hb:nä (mg/g).

Punasoluihin sisällytetyn 58Fe:n tai 57Fe:n määrä, % Fe inc, ilmaistaan ​​prosentteina annetuista 58Fe- tai 57Fe-annoksista. Feinc.

• 58 Fe lisäys = 58 Fe lisäys x 100 tai Fe ink
• 57 Fe lisäys = 57 Fe lisäys x 100 57 Fe lisäys

Korjattu erytrosyyttiprosentti erytrosyyttien stabiilien isotooppisuhteiden analysointia varten lasketaan käyttämällä iv-infusoidun 57Fe:n punasolujen inkorporaatioprosenttia.

• 58Fe inc-cor = % 58Fe sis. x 100.
• 57 Feinc

Massaspektrometrinen analyysi Verinäytteiden valmistelua massaspektrometristä analyysiä varten ja rikastettujen standardien valmistusta noudatetaan Kastenmayer et ai. kuvaamien menetelmien mukaisesti. Heparinisoidun kokoveren näytteet kostutetaan tuhkaksi väkevällä HNO3:lla suhteessa 1:3 (veri:happo) (tilavuus/tilavuus) kuumalla levyllä alhaisella lämmöllä 20-30 minuutin ajan. Digestoidut liuokset säädetään deionisoidulla vedellä rautapitoisuudeksi 10 µg/ml. Isotooppipitoiset standardit instrumentin kalibrointia varten valmistetaan samalla tavalla kuin tuntemattomille näytteille. Isotooppisuhteet 58Fe/54Fe ja 57Fe/54Fe veressä ennen ja jälkeen isotooppien samanaikaisen enteraalisen (58Fe) ja parenteraalisen (57Fe) annon määritetään tietokoneohjatulla lämpöionisaatiomassaspektrometrillä käyttäen Elan Model 250 ICP/MS -järjestelmää, (SCIEX, Inc., Thornhill, Ontario, Kanada), toimi isotooppisuhdemoodissa, jota seurasivat Zlotkin et ai. lastenlääketieteen ja ravitsemustieteen laitoksella Tronoton yliopistossa, Kanadassa.

Intubaatiotesti Aiemmin kuvattu standardi intubaatiotesti14 suoritetaan tälle alaryhmälle raudan absorptiotutkimuksen päätyttyä. Lyhyesti sanottuna, koska pehmeä mahalaukku (18G) sijoitetaan vatsan riippuvaisimpaan osaan. Vasemmalla makuuasennossa makaavilta lapsilta otetaan mahahapponäytteet manuaalisella imulla. Putken asento varmistetaan auskultaatiolla, mahanesteen imulla ja putkeen ruiskutetun veden lähes täydellisellä talteenotolla. Mahanestenäytteet heitetään pois ensimmäisten 10 minuutin aikana intuboinnin jälkeen. Sen jälkeen näytteet kerätään ja säilytetään 15 minuutin eränä 90 minuutin ajan. 90 minuutin keräyksen jälkeen (perusnäyte) pentagastriinia (peptavlon, ICI) injektoidaan ihonalaisesti annoksella 0,6 ug/kg. Näytettä, joka seuraa pentagastriinistimulaatiota 60 minuutin ajan, kutsutaan "stimuloiduksi näytteeksi". Mahalaukun eritteen tilavuus kussakin 15 minuutin kokoelmassa kirjataan ja ilmaistaan ​​millilitraina tunnissa. Jokaisen hapon pitoisuudet mitataan titraamalla 1 ml mahanestettä 0,01 N natriumhydroksidilla pH-arvoon 7,4 käyttämällä automaattista titrauslaitetta (Metrohm, Herisau, Sveitsi). Kokonaishapon tuotanto laskettiin jokaiselle aikapintille kertomalla mahanesteen tilavuus ja happokonsentraatio. Perustason (BAO) ja stimuloidun hapon tuotanto (SAO) laskettiin perustuen 2 näytteeseen, jotka oli kerätty perusviivamittausta varten, ja 4 näytteen perusteella, jotka kerättiin pentagastriinin antamisen jälkeen, ja ilmaistiin mMol/h.