Czy zakażenie Helicobacter pylori jest przyczyną lub niepowodzeniem leczenia niedokrwistości z niedoboru żelaza u dzieci w Bangladeszu?

Proponujemy studia uzupełniające:

1. Proponuje się prospektywne, podwójnie ślepe, kontrolowane placebo badanie terenowe z udziałem dwustu sześćdziesięciu dzieci ze społeczności podmiejskiej w pobliżu miasta Dhaka.
2. Ocena wchłaniania żelaza przed i po leczeniu przeciwinfekcyjnym u 20 dzieci z zakażeniem H. pylori i niedokrwistością z niedoboru żelaza

3. Próba terenowa

   1.1 Opis badanej populacji Dzieci będą rekrutowane z Nandipara, społeczności podmiejskiej położonej 7 mil na północny wschód od miasta Dhaka. Ta społeczność liczy 3500 mieszkańców na obszarze około 2,5 mil kwadratowych. Wśród mieszkańców 70% mężczyzn to robotnicy dniówkowi, 20% to rikszarze, a 5% to stolarze lub usługodawcy. Piętnaście procent kobiet to pracownicy najemni, a 85% to gospodynie domowe. Średnia wielkość rodziny to 4,5 członka. Slumsy mają miejskie wodociągi do picia i gotowania, a większość rodzin mieszka w źle zbudowanych domach. Zdecydowana większość domów ma mury z gliny, strzechę z suchych liści i bambusowe lub blaszane dachy. Populacja w wieku poniżej pięciu lat wynosi około 700. Częstość występowania zakażenia H. pylori u mniej niż pięciorga dzieci w tej społeczności wynosi 50%.44 Od 1986 roku Międzynarodowe Centrum Badań Chorób Biegunkowych w Bangladeszu (ICDDR,B) prowadzi cotygodniową klinikę dla drobnych przypadków choroby w populacji.

   Wszystkie dzieci w społeczności zostaną początkowo przebadane pod kątem niedokrwistości z niedoboru żelaza i zakażenia H. pylori. Po wyjaśnieniu badania i testów uzyskana zostanie świadoma zgoda rodziców lub opiekunów prawnych. Rejestrowane będą informacje demograficzne, w tym imię i nazwisko, data urodzenia, płeć, waga, wzrost, status ekonomiczny rodziców, sposób karmienia i poprzednie leki w ciągu ostatniego miesiąca.

   Badanie przesiewowe w kierunku niedokrwistości z niedoboru żelaza 50 µl próbek krwi włośniczkowej pobranych z opuszki palca zostanie ocenione pod kątem stężenia hemoglobiny (Hgb). Pomiar stężenia hemoglobiny jest najbardziej użytecznym testem w wykrywaniu niedokrwistości z niedoboru żelaza, ponieważ bezpośrednio odzwierciedla ilość najbardziej rozpowszechnionego niezbędnego związku żelaza w organizmie. Dzieci ze stężeniem hemoglobiny poniżej 110 g/l będą uważane za anemiczne. U dzieci z niskim stężeniem Hgb wykrytym podczas wstępnego badania przesiewowego rozpoznanie niedokrwistości z niedoboru żelaza zostanie potwierdzone przez oznaczenie Hgb w krwiobiegu żylnym, stężenie ferrytyny w surowicy oraz stężenie receptora transferyny w surowicy. Stężenie hemoglobiny może być przejściowo obniżone z powodu stanu zapalnego lub infekcji iw takiej sytuacji nie wskazuje na anemię patologiczną. Spośród wszystkich testów biochemicznych służących do oceny poziomu żelaza niski SF jest najbardziej swoistym testem na niedobór żelaza. Główną wadą SF jest to, że łatwo wzrasta w odpowiedzi na jakikolwiek stan zapalny infektora. Jedną z głównych zalet sTfR jest to, że w przeciwieństwie do SF, sTfR nie podlega istotnemu wpływowi infekcji lub procesu zapalnego. Jednak poziomy sTfR są zwiększone w sytuacjach zwiększonego obrotu RBC, takich jak niedokrwistość hemolityczna, tj. Talasemia itp. Jednolita wartość odcięcia >8,5 mg/l wskazuje na podwyższony sTfR, a tym samym na niedobór żelaza lub niedokrwistość hemolityczną.

   Pomiar poziomu receptorów transferyny w surowicy staje się również obiecującym nowym testem do oceny poziomu żelaza, szczególnie w epidemiologicznej ocenie niedokrwistości. Wykonywany w połączeniu z pomiarami ferrytyny w surowicy, receptor transferyny w surowicy służy do odróżnienia prawdziwego niedoboru żelaza od niedokrwistości od niedokrwistości chorób przewlekłych lub chorób zapalnych, a zatem oferuje główną zaletę w ustaleniu rzeczywistej częstości występowania niedokrwistości z niedoboru żelaza w badaniach populacyjnych . Połączenie niskiego poziomu hemoglobiny, niskiego poziomu ferrytyny w surowicy i podwyższonego poziomu receptora transferyny w surowicy wskazuje na niedokrwistość z niedoboru żelaza. Rozpoznanie niedoboru żelaza zostanie postawione po spełnieniu następujących kryteriów: receptor transferyny > 8,3 mg/l, stężenie ferrytyny w surowicy

   Badania przesiewowe dzieci zakażonych H. pylori Dzieci z niedokrwistością zostaną przebadane w kierunku zakażenia H. pylori za pomocą mocznikowego testu oddechowego (UBT), który jest uważany przez wiele referencyjnych testów diagnostycznych w kierunku zakażenia H. pylori. Niedawno ustanowiliśmy test w ICDDR, B.44 W skrócie procedury są następujące.

   Mocznikowy test oddechowy Po 2-godzinnym okresie postu zostanie pobrana próbka oddechu dla linii podstawowej 13 CO2 w próżniomierzu. Wtedy dzieci będą mogły spożyć 100 ml pełnego mleka. Dziesięć minut później zostanie podane 40 mg mocznika 13 C (99% 13 C, Tracer Technologies, Boston, Massachusetts) po rozpuszczeniu w 25 ml wody. Po podaniu substratu próbki oddechu zostaną ponownie pobrane w dwóch powtórzeniach po 30 min. Próbki zostaną pobrane przez dwudrożną maskę pediatryczną z dołączonym zaworem zwrotnym do pojemnika próżniowego i będą przechowywane do wysyłki do University of Alabama w celu zmierzenia stężenia 13C za pomocą spektrometru masowego CO2 w układzie oddechowym. Nadwyżka w stosunku do linii bazowej zostanie wyrażona w częściach na tysiąc (delta 0/00). Test oddechowy, w którym przekroczenie linii podstawowej wynosi 5,00/00 po 30 minutach, zostanie uznany za dodatni w kierunku zakażenia H. pylori.

   1.2 Selekcja dzieci do badania Dzieci z niedokrwistością z niedoboru żelaza, o masie ciała >60% według Narodowego Centrum Statystyk Zdrowia (NCHS), bez objawów chorób niedoboru lub infekcji ogólnoustrojowej, których rodzice wyrażą świadomą zgodę, zostaną włączone do tego badania.

   Kryteria wykluczenia Dzieci z następującymi problemami zostaną wykluczone.

   • Ostra infekcja lub widoczny proces zapalny
   • Oznaki niedoboru witamin
   • Ciężka niedokrwistość (hemoglobina
   • Ciężkie niedożywienie ( marasmus , marasmic kwasiorkar lub kwasiorkar )
   • Obecność tęgoryjców i/lub Giardia lamblia (torbieli lub formy wegetatywnej) w badaniu mikroskopowym kału
   • Obecność tłuszczu w badaniu mikroskopowym kału
   • Obecność krwi utajonej w stolcu wykazano testem Guaiac
   • Historia przyjmowania antybiotyków lub jakichkolwiek leków z jakiejkolwiek przyczyny w poprzednim miesiącu

   1.3 Procedura Zostanie zarejestrowana szczegółowa historia medyczna. Masa ciała i wzrost zostaną zmierzone po włączeniu do badania. Nagie masy zostaną uzyskane z dokładnością do 10 g przy użyciu wagi wagowej (Gebrüder Soehnle, Murrhardt, Niemcy) i odnotowana zostanie średnia z trzech kolejnych pomiarów. Długość w pozycji leżącej będzie mierzona u dzieci w wieku poniżej dwóch lat za pomocą infantometru typu slideboard (Harpenden, St. Albans, Anglia). W przypadku starszych dzieci wysokość stania należy określić za pomocą lokalnie skonstruowanego przyrządu, w którym metalowa taśma miernicza jest rozciągnięta między podstawą a zagłówkiem, który ma przymocowany poziom płynu, aby zapewnić pozycję poziomą. Średnia z dwóch kolejnych pomiarów wysokości z dokładnością do 0,1 cm jest zapisywana jako obserwowana wartość. Pomiary porównuje się z normami wynikającymi z danych Narodowego Centrum Zdrowia i stanem odżywienia ocenianym za pomocą Z-score. , Procent median równoważników jednostek odchylenia standardowego zostanie określony i skategoryzowany zgodnie ze schematem Waterlowa.

   Wszystkie dzieci zostaną poddane badaniu fizykalnemu przez jednego z badaczy. Dzieci zostaną przydzielone do jednej z czterech grup zgodnie z randomizacją:

   • Grupa anty Hp
   • Grupa Fe
   • Grupa anty-Hp + grupa Fe
   • Grupa placebo

   W celu porównania ogólnej częstości występowania oporności na leczenie żelazem wśród dzieci z niedoborem żelaza, będzie piąta grupa obejmująca dzieci z niedokrwistością z niedoboru żelaza, ale bez zakażenia H. pylori. Ta grupa będzie leczona terapią żelazem.

   Terapia anty-Hp: klarytromycyna 15 mg/kg/dobę w dwóch dawkach podzielonych przez 10 dni plus omeprazol 20 mg pojedyncza dawka przez 14 dni. ,

   Terapia żelazem: Dawka żelaza 3 mg/kg/dzień (lub około 30 mg/dzień) w postaci siarczanu żelazawego, zgodnie z zaleceniami Dallmana41, będzie podawana w pojedynczej dawce rano na pół godziny przed posiłkiem. Terapia żelazem będzie prowadzona przez 90 dni.

   Placebo Syrop glukozowy

   1.3.1 Suplementacja Syrop(y) interwencyjny będzie podawany codziennie w pojedynczej dawce rano na pusty żołądek (pół godziny przed posiłkiem). Dzieci z grupy placebo otrzymają taką samą ilość syropu glukozowego. Wszystkie terapie będą przechowywane w identycznych ciemnobrązowych pojemnikach i będą karmione przez pracownika służby zdrowia, który będzie nieświadomy charakteru badania i zawartości butelki. Dwudziestoczterogodzinne spożycie żywności zostanie zapisane we wcześniej zakodowanym formularzu przez przywołanie diety.

   Dzieci będą obserwowane przez trzy miesiące po zakończeniu suplementacji. Mocznikowy test oddechowy zostanie powtórzony pod koniec oraz po 1 i 3 miesiącach od suplementacji. Krew żylna (500 µl) zostanie pobrana w celu oznaczenia stężenia ferrytyny w surowicy, receptora transferyny oraz hemoglobiny pod koniec oraz po 1 i 3 miesiącach suplementacji. Dzieci z grupy placebo otrzymają trzymiesięczny cykl nadzorowanej suplementacji żelaza pod koniec okresu badania.

   1.4 Obliczanie wielkości próby Wielkość próby oblicza się na podstawie (i) częstości występowania zakażenia H. Pylori, (ii) częstości występowania braku odpowiedzi na leczenie żelazem.

   Obliczenie wielkości próby na podstawie rozpowszechnienia zakażenia H. pylori

   Biorąc pod uwagę częstość występowania zakażenia H. pylori wynoszącą 50% i niedokrwistości z niedoboru żelaza 70%,44 przewidujemy niedokrwistość związaną z zakażeniem H. pylori u 50% niemowląt i dzieci w tej społeczności. Oczekujemy zmniejszenia częstości występowania niedokrwistości związanej z niedoborem żelaza wywołanej przez H. Pylori po terapii antybiotykiem i żelazem o 25%. Aby wykryć różnicę tej wielkości na poziomie 5% i mocy 80%, wielkość próbki oblicza się w następujący sposób:

   N =[P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Gdzie P1 = częstość występowania niedokrwistości związanej z zakażeniem H. pylori P2 = częstość występowania niedokrwistości związanej z zakażeniem H. pylori po leczeniu

   =[50(50) +25(75)] * 8 / (25)2

   = 56 w każdej grupie

   Na podstawie poprzedniego badania w tej społeczności przewidujemy, że wskaźnik rezygnacji wyniesie około 15%. W przypadku a (Akramuzzaman SM, komunikacja osobista) wymagana wielkość próby wyniesie 65 dzieci w każdej grupie, a całkowita próba dzieci wyniesie 260.

   Obliczenia oparte na częstości występowania osób niereagujących na terapię żelazem

   Obserwacje z trwającego badania z programem doustnej suplementacji żelaza u pacjentów z niedokrwistością, prowadzonego w Dinajpur (północny dystrykt Bangladeszu) sugerują, że 70% grupy suplementowanej żelazem nie reaguje (S. Rahman, komunikacja osobista). Częstość występowania zakażenia H. pylori w proponowanej badanej populacji wynosi około 50%,35 i spodziewamy się, że po doustnej suplementacji żelaza liczba osób niereagujących na leczenie będzie o 40% mniejsza w grupie H. pylori-ujemnej w porównaniu z grupą H. pylori-dodatnią . Aby wykryć różnicę tej wielkości na poziomie 5% i mocy 80%, wielkość próbki oblicza się w następujący sposób:

   N = [P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Gdzie P1 = częstość występowania niedokrwistości po suplementacji żelaza u dzieci zakażonych H. pylori P2 = częstość występowania niedokrwistości po suplementacji żelaza u dzieci niezakażonych H. pylori

   • [(70)(30) +(42)(58)] * 8 / (35)2 =46 w każdej grupie

   Przy współczynniku rezygnacji wynoszącym 15% liczba dzieci w każdej grupie wyniesie 53, co daje całkowitą próbę 212 dzieci.

   Do tego badania weźmiemy większą próbę, tj. 260 dzieci.

   1.5 Randomizacja Główny wykres randomizacji zostanie przygotowany przez odpowiednio przeszkoloną osobę niezwiązaną z badaniem przy użyciu losowych permutowanych numerów bloków o rozmiarze trzy. Butelki zawierające terapię anty-Hp, terapię żelazem lub placebo będą miały identyczny wygląd i zostaną ułożone w kolejności odpowiadającej karcie randomizacji i będą numerowane seryjnie. Numer seryjny butelek będzie odpowiadał numerowi seryjnemu pacjentów włączonych do badania. Ponieważ jedna grupa dzieci otrzymywałaby jednocześnie terapię anty-Hp i terapię żelazem, dla każdej grupy dzieci będą dwie butelki (butelki A lub B), aby badanie było podwójnie ślepe. Dla dzieci objętych terapią anty-Hp plus żelazo będzie jedna butelka zawierająca terapię anty-Hp lub druga zawierająca terapię żelazem. Dzieci objęte wyłącznie terapią żelazem lub terapią anty-Hp otrzymają jedną buteleczkę zawierającą lek, a drugą syrop glukozowy. Ponieważ czas trwania terapii anty-Hp wynosi 14 dni, dzieci z tej grupy będą otrzymywać syrop glukozowy przez resztę miesiąca, aby wyrównać czas trwania terapii w czterech grupach.

   1.6 Badanie laboratoryjne Stężenie Hb zostanie oznaczone metodą cyjanomethemoglobiny, ferrytyna w surowicy zostanie oznaczona metodą radioimmunometryczną. Receptor transferyny w surowicy będzie mierzony za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA). Stolec zostanie zbadany na obecność krwi utajonej za pomocą reakcji gwajakowej (Occultotest, Ames Co., Elkhart, Inc.,. USA). Pepsynogen w surowicy i gastryna zostaną zmierzone za pomocą testu radioimmunologicznego.

   1.7 Wycofanie się z badania - Niezgodność badanego, albo z powodu opuszczenia obszaru badań w inne miejsce przed zakończeniem badania, albo

   - ponieważ dziecko wymaga nieplanowego leczenia z powodu poważnej infekcji przejściowej.

   Leczenie zespołu abstynencyjnego podczas analizy Wyniki wszystkich randomizowanych dzieci zostaną uwzględnione w analizie badania. Dane dotyczące wycofanych pacjentów zostaną uwzględnione do czasu wycofania. Zostanie również przeprowadzona dodatkowa analiza, w której tacy pacjenci zostaną wykluczeni

   1.8 Zmienne wyniku

   Poważny

   - Częstość występowania zakażenia H. pylori po terapii.

   - Zwiększenie stężenia hemoglobiny w surowicy, stężenia ferrytyny w surowicy lub zmniejszenie poziomu receptorów transferyny w surowicy.

   - Liczba dzieci w każdej grupie z IDA, jak określono pierwotnie przed i po interwencji

   Drobny

   - Zmiana wskaźników antropometrycznych

2. Badanie absorpcji żelaza Dwadzieścioro dodatkowych dzieci z dodatnim testem oddechowym na obecność mocznika i niedokrwistością z niedoboru żelaza zostanie wybranych do badania absorpcji żelaza. Cel badania i wszystkie procedury związane z badaniem wchłaniania żelaza zostaną wyjaśnione rodzicom i uzyskana zgoda. Przed rozpoczęciem badania wchłaniania żelaza, wszystkie dzieci otrzymają dostępną w handlu mieszankę mleka krowiego z dodatkiem serwatki, zawierającą 8 mg Fe/l (Nidina 1; Nestle, Paryż, Francja) przez okres co najmniej trzech tygodni. Po 21 dniach karmienia mieszanką zostaną przyjęci na Oddział Metaboliczny Centrum Badań i Usług Klinicznych.

Włączenie znakowanego żelaza (radiostabilnego) do erytrocytów zostało z powodzeniem wykorzystane do zbadania wchłaniania z jelita. Metoda włączania erytrocytów obejmuje doustne podanie izotopu żelaza, a następnie pomiar stosunku izotopów żelaza w erytrocytach w wybranym czasie po podaniu. Będziemy śledzić technikę pomiaru wchłaniania żelaza u dzieci za pomocą techniki podwójnego stabilnego izotopu, opracowanej niedawno przez Kastenmayera i in.

2.1 Metoda badania wchłaniania żelaza

Przygotowanie znakowanych roztworów siarczanu żelaza Wzbogacony 57Fe i 58Fe-tlenek żelaza (Fe2O3) zostanie zakupiony w Oak Ridge National Laboratory (Oak Ridge, TN, USA). Skład izotopowy żelaza w preparacie 58Fe (podany przez Oak ridge National Laboratories) to (mg): (wag.%) 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,6)57 Fe (3,47) i 58 Fe (60,28). Składy izotopowe żelaza w 57Fe (% wag.) to; 54Fe(0,65), 56Fe(35,60), 57Fe (3,47) i 58Fe (60,28).

Tlenek żelazowy zostanie rozpuszczony w stężonym H2SO4 przez przepuszczanie przez roztwór tlenku węgla przez około cztery godziny. Roztwór zostanie następnie obniżony poprzez przepuszczanie przez niego oczyszczonego azotu przez kilka minut. Objętość zostanie następnie dostosowana przy użyciu wody o obniżonej wartości znamionowej. Dwie ml podwielokrotności otrzymanych roztworów 57 FeSO4 i 58 FeSO4 zostaną przeniesione do nieprzezroczystych ampułek. Każda ampułka zostanie przedmuchana azotem i uszczelniona. Ampułki będą zawierać 200 µg/ml całkowitego żelaza (jako siarczan żelazawy) i 150 µg/ml 57Fe lub 700 µg/ml całkowitego żelaza (jako siarczan żelazawy) i 420 µg/ml 58Fe. Porcja z pojedynczej ampułki zostanie wykorzystana do przygotowania roztworów roboczych wzbogaconych 57Fe i 58Fe.

Stabilność i bezpieczeństwo pozajelitowych roztworów 57 Fe Przed i.v. Po podaniu niemowlętom roztwór 57FeSO4 zostanie przetestowany pod kątem pirogenności, sterylności i stabilności. Badanie lizatu amebocytów limulusa (LAL) i powtórzona hodowla pod kątem wzrostu bakterii i grzybów w celu potwierdzenia, że ​​roztwory 57FeSO4 są wolne od pirogenów i sterylne w stężeniach, które mają być użyte w badaniu. Zawartość składników odżywczych w roztworach do podawania pozajelitowego została wcześniej opisana. Całkowita zawartość żelaza w roztworze odżywczym 57FeSO4 zostanie określona metodą absorpcyjnej spektrometrii atomowej przed i po filtracji (filtry 0,22 µ) oraz w czasie w temperaturze pokojowej.

2.2 Projekt badania wchłaniania żelaza Niemowlęta włączone do badania otrzymają kombinację żywienia pozajelitowego i dojelitowego. Roztwór 57FeSO4 będzie podawany pozajelitowo, natomiast 58FeSO4 drogą dojelitową. Włączenie 57Fe i 58Fe do erytrocytów będzie następnie mierzone z próbek krwi pobranych dwa tygodnie po początkowych infuzjach. Procent dawki podanej dożylnie w krążących erytrocytach będzie używany jako odniesienie dla procentu wchłoniętego żelaza (z dawki podanej doustnie) obecnego w krążących erytrocytach. „Poprawione” procentowe wbudowanie 58Fe i 57Fe w erytrocyty (58 Fe inc-cor/57Fe inc-cor) zostanie obliczone matematycznie, jak opisano poniżej.

Przed podaniem dożylnym dzieciom 0,7-0,8 ml roztworu 57FeSO4 (0,2 mg/ml) zostanie dodane do burytrolu zawierającego 30 ml roztworu odżywczego stosowanego do żywienia pozajelitowego, przy użyciu sterylnych technik. Mieszanka żelaza i składników odżywczych, która była wcześniej bezpiecznie stosowana, będzie powoli wlewana do żyły obwodowej dzieci przez okres 12-24 godzin za pomocą pompy infuzyjnej.

Wkrótce po rozpoczęciu pozajelitowego wlewu roztworu 57FeSO4 dzieciom zostanie podany dojelitowo 58FeSO4. W tym czasie kontynuowany będzie pozajelitowy wlew 57FeSO4. Po sprawdzeniu, czy sonda nosowo-żołądkowa jest prawidłowo umieszczona w żołądku, sonda zostanie zaaspirowana w celu sprawdzenia zawartości żołądka. Jeśli żołądek jest pusty, 1,5 ml 58 FeSO4 zostanie podane bezpośrednio przez strzykawkę do zgłębnika. Probówka zostanie następnie przepłukana 0,5 ml sterylnej wody. Dawka pozajelitowego 57FeSO4 wyniesie 0,15 mg/kg (roztwór siarczanu żelazawy wzbogacony w 57Fe), co zapewni 0,12 mg/kg 57Fe. Dawka dojelitowa wyniesie 1,5 mg/kg (roztwór siarczanu żelazawy wzbogacony w 58Fe), co zapewni 0,8 mg/kg 58Fe. Dzieci zostaną wypisane ze szpitala z terapią zakażenia Helicobacter pylori (klarytromycyna plus omeprazol) przez 10 dni.

Po miesiącu terapii matki zostaną poproszone o przyprowadzenie dzieci do CRSC. Zostanie przeprowadzone powtórne badanie UBT i wchłaniania żelaza.

2.3 Pobieranie krwi Próbki krwi zostaną pobrane przed podaniem stabilnych izotopów (linia wyjściowa) i 14 dni później w obu przypadkach. Wielkość próbki krwi będzie wynosić 200-300 µl na próbkę.

2.4 Obliczanie włączenia żelaza do erytrocytów Ilość podanego 58Fe i 57Fe (mg) wchłoniętego do erytrocytów w określonym czasie „t” po podaniu dawki znakowanego żelaza zostanie obliczona w sposób podobny do zastosowanego przez Zlotkina i wsp. 1995.

58 Fe Inc. =Rt58/54 -Ro58/54 xFe obieg x 0,00322 Ro58/54

57 Feinc = R157/54-Ro57/54 x obwód Fe x 0,0218 Ro57/54

W tym równaniu 58 Feinc i 57 Feinc będzie wyrażone w mg. R158/54, R157/54 i R057/54 to stosunki izotopów wyrażone wagowo dla 58Fe/54Fe i 57Fe/54Fe, które zostaną określone na strawionych próbkach krwi w czasie „t” po podaniu dawki i na linii podstawowej (przed 58Fe i dawki pre 57Fe); Fe circ to ilość krążącego żelaza. Fe circ w czasie „t”; 0,0032 i 0,0218 to naturalne obfitości (ułamki wagowe) 58 Fe i 57 Fe. Ilość całkowitego krążącego żelaza, Fe circ, wyrażona w mg, zostanie oszacowana jako

Fe obieg. = BV x Hb X 3,47

gdzie BV to objętość krwi w litrach, przyjęta jako 0,085 l/kg masy ciała; Hb to stężenie hemoglobiny w g/l; 3,47 to stężenie żelaza w Hb (mg/g).

Ilość podanego 58Fe lub 57Fe wcielonego do erytrocytów, % Fe inc, będzie wyrażona jako procent podanych dawek 58Fe lub 57Fe. Feinc.

• 58 Fe inc = 58 Fe inc x 100 lub Fe inc
• 57 Fe inc = 57 Fe inc x 100 57 Fe inc

Skorygowany procent erytrocytów do analizy stosunku stabilnych izotopów w erytrocytach zostanie obliczony przy użyciu procentu włączenia 57Fe do erytrocytów we wlewie dożylnym.

• 58Fe inc-cor = % 58Fe inc X 100.
• 57 Feinc

Analiza spektrometrii mas Przygotowanie próbek krwi do analizy spektrometrii mas i przygotowanie wzbogaconych wzorców będzie przebiegać zgodnie z procedurami opisanymi przez Kastenmayer i in. Próbki heparynizowanej krwi pełnej należy zwilżyć stężonym HNO3 w stosunku 1:3 (krew: kwas) (obj./obj.) na gorącej płycie na małym ogniu przez 20-30 min. Strawione roztwory zostaną dostosowane wodą dejonizowaną, aby uzyskać stężenie żelaza 10 µg/ml. Wzorce wzbogacone izotopami do kalibracji przyrządu zostaną przygotowane w taki sam sposób, jak w przypadku nieznanych próbek. Stosunki izotopowe dla 58Fe/54Fe i 57Fe/54Fe we krwi przed i po równoczesnym dojelitowym (58Fe) i pozajelitowym (57Fe) podaniu izotopów zostaną określone za pomocą sterowanego komputerowo termiczno-jonizacyjnego spektrometru mas z wykorzystaniem systemu Elan Model 250 ICP/MS, (SCIEX, Inc., Thornhill, Ontario, Kanada), działał w trybie stosunku izotopów, a następnie Zlotkin i in. na Wydziale Pediatrii i Nauk o Żywieniu Uniwersytetu Tronoto w Kanadzie.

Test intubacyjny Standardowy test intubacyjny opisany wcześniej14 zostanie przeprowadzony w tej podgrupie dzieci po zakończeniu badania wchłaniania żelaza. W skrócie, jako miękka sonda żołądkowa (18G) zostanie umieszczona w najbardziej zależnej części żołądka. Próbki kwasu żołądkowego będą pobierane od dzieci leżących w pozycji leżącej na lewej stronie za pomocą ręcznego odsysania. Położenie rurki zostanie potwierdzone przez osłuchiwanie, aspirację soku żołądkowego i prawie całkowite odzyskanie wody wstrzykniętej do rurki. Próbki soku żołądkowego będą usuwane w ciągu pierwszych 10 minut po intubacji. Następnie próbki będą zbierane i przechowywane w 15-minutowych podwielokrotnościach przez 90 minut. Po 90 minutach pobierania (próbka podstawowa), pentagastryna (peptavlon, ICI) zostanie wstrzyknięta podskórnie w dawce 0,6 ug/kg. Próbka po stymulacji pentagastryną przez 60 min będzie określana jako „próbka stymulowana”. Objętość wydzieliny żołądkowej w każdym z 15-minutowych pobrań będzie rejestrowana i wyrażana w mililitrach na godzinę. Stężenia kwasu w każdym z nich będą mierzone przez miareczkowanie 1 ml soku żołądkowego 0,01 N wodorotlenkiem sodu do pH 7,4, przy użyciu automatycznego titratora (Metrohm, Herisau, Szwajcaria). Całkowitą produkcję kwasu obliczano dla każdego półkwarty czasu przez pomnożenie objętości soku żołądkowego i stężenia kwasu. Bazową (BAO) i stymulowaną produkcję kwasu (SAO) obliczono na podstawie odpowiednio 2 próbek pobranych do pomiaru linii podstawowej i 4 próbek pobranych po podaniu pentagastryny i wyrażono jako mmol/h.