Je infekce Helicobacter Pylori příčinou nebo selháním léčby anémie z nedostatku železa u dětí v Bangladéši?

Navrhujeme doplňkové studium:

1. Navrhuje se prospektivní, dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná terénní studie u dvou set šedesáti dětí z příměstské komunity poblíž města Dhaka.
2. Hodnocení absorpce železa před a po antiinfekční léčbě u 20 dětí s infekcí H. pylori a anémií z nedostatku železa

3. Polní zkouška

   1.1 Popis studované populace Děti budou rekrutovány z Nandipara, příměstské komunity, která se nachází 7 mil severovýchodně od města Dhaka. Tato komunita má 3500 obyvatel na ploše přibližně 2,5 čtverečních mil. Mezi obyvateli je 70 % mužů klasifikováno jako nádeníci, 20 % jsou rikši a 5 % jsou tesaři nebo držitelé služeb. Patnáct procent žen jsou nádenice a 85 % ženy v domácnosti. Průměrná velikost rodiny je 4,5 člena. Slum má obecní vodovod na pití a vaření a většina rodin žije ve špatně postavených domech. Velká většina domů je z bláta obezděná suchým listím a bambusovými nebo plechovými střechami. Populace do pěti let je asi 700. Prevalence infekce H. pylori u méně než pěti dětí v této komunitě je 50 %.44 Mezinárodní centrum pro výzkum průjmových onemocnění v Bangladéši (ICDDR, B) provozuje týdenní kliniku pro méně závažné případy onemocnění v populaci od roku 1986.

   Všechny děti v komunitě budou zpočátku vyšetřeny na anémii z nedostatku železa a infekci H. pylori. Po vysvětlení studie a testů bude získán informovaný souhlas od rodičů nebo zákonných zástupců. Budou zaznamenány demografické informace včetně jména, data narození, pohlaví, hmotnosti, výšky, ekonomického stavu rodičů, povahy krmení a předchozí medikace za poslední 1 měsíc.

   Screening anémie z nedostatku železa 50 µl vzorků kapilární krve odebraných z prstu bude hodnoceno na koncentraci hemoglobinu (Hgb). Měření koncentrace hemoglobinu je nejužitečnějším testem při screeningu anémie z nedostatku železa, protože přímo odráží množství nejhojnější esenciální sloučeniny železa v těle. Děti s koncentrací hemoglobinu pod 110 g/l budou považovány za anemické. U dětí s nízkou hladinou Hgb zjištěnou při úvodním screeningu bude diagnóza anémie z nedostatku železa potvrzena venepunkcí Hgb, koncentrací feritinu v séru a koncentrací receptoru pro transferin v séru. Koncentrace hemoglobinu může být přechodně snížena v důsledku zánětu nebo infekce a v takové situaci to neznamená patologickou anémii. Nízká SF je ze všech biochemických testů pro hodnocení stavu železa nejspecifičtějším testem na nedostatek železa. Hlavní nevýhodou SF je to, že je snadno zvýšena v reakci na jakýkoli zánětlivý stav infekčního onemocnění. Jednou z hlavních výhod sTfR je, že na rozdíl od SF není sTfR významně ovlivněn infekcí nebo zánětlivým procesem. Hladiny sTfR jsou však zvýšené v situacích zvýšeného obratu červených krvinek, jako je hemolytická anémie, tj. talasémie atd. Jednotná hraniční hodnota > 8,5 mg/l ukazuje na zvýšený sTfR, a tudíž na nedostatek železa nebo hemolytickou anémii.

   Měření sérových transferinových receptorů se také stává slibným novým testem pro hodnocení stavu železa zejména v epidemiologickém hodnocení anémie. Sérový transferinový receptor, prováděný ve spojení s měřením sérového feritinu, slouží k rozlišení skutečného nedostatku železa od anémie od anémie chronických onemocnění nebo zánětlivých onemocnění, a proto nabízí hlavní výhodu při stanovení skutečné prevalence anémie z nedostatku železa v populačních studiích. . Kombinace nízkého hemoglobinu, nízkého sérového feritinu a zvýšeného sérového transferinového receptoru jsou diagnostické pro anémii z nedostatku železa. Diagnóza nedostatku železa bude stanovena, když budou splněna následující kritéria: transferinový receptor > 8,3 mg/l, koncentrace feritinu v séru

   Screening dětí infikovaných H. pylori Anemické děti budou vyšetřeny na infekci H. pylori pomocí močovinového dechového testu (UBT), který je zvažován mnoha referenčními diagnostickými testy na infekci H. pylori. Nedávno jsme zavedli test na ICDDR, B.44 Ve stručnosti jsou postupy následující.

   Dechový test s močovinou Vzorek dechu bude odebrán pro základní linii 13 CO2 ve vakuovačce po 2 hodinách nalačno. Objem 100 ml plnotučného mléka pak bude dětem umožněno zkonzumovat. O deset minut později se po rozpuštění ve 25 ml vody podá 40 mg 13C močoviny (99% 13C, Tracer Technologies, Boston, Massachusetts). Po podání substrátu budou vzorky dechu opět odebírány v duplikátech po 30 minutách. Vzorky budou odebírány přes dvoucestnou pediatrickou masku s připojeným zpětným ventilem do vakuového kontejneru a budou uloženy pro odeslání na University of Alabama, aby se změřila koncentrace 13C na respiračním hmotnostním spektrometru CO2. Přebytek nad základní linií bude vyjádřen jako ppm (delta 0/00). Dechový test, ve kterém je překročení základní linie 5,00/00 po 30 minutách, bude považován za pozitivní na infekci H. pylori.

   1.2 Výběr studovaných dětí Do této studie budou zařazeny děti anemické z nedostatku železa s hmotností vyšší než 60 % podle National Center for Health Statistics (NCHS), bez známek onemocnění z nedostatku nebo systémové infekce a jejichž rodiče dají informovaný souhlas.

   Kritéria vyloučení Děti s následujícími problémy budou vyloučeny.

   • Akutní infekce nebo zjevný zánětlivý proces
   • Příznaky nedostatku vitamínů
   • Těžká anémie (hemoglobin
   • Těžká podvýživa (marasmus, marasmický kwasiorkar nebo kwasiorkar)
   • Přítomnost háčkovitých červů a/nebo Giardia lamblia (cysta nebo vegetativní forma) při mikroskopickém vyšetření stolice
   • Přítomnost tuku v mikroskopickém vyšetření stolice
   • Přítomnost okultní krve ve stolici prokázaná Guaiacovým testem
   • Anamnéza užívání antibiotik nebo jakýchkoli léků z jakékoli příčiny v předchozím měsíci

   1.3 Postup Bude zaznamenána podrobná anamnéza. Tělesná hmotnost a výška budou měřeny při zařazení do studie. Nahé závaží se získá s přesností na 10 g pomocí vyvažovací váhy (Gebrüder Soehnle, Murrhardt, Německo) a zaznamená se průměr ze tří po sobě jdoucích měření. Délka vleže bude měřena u dětí mladších dvou let pomocí posuvného infantometru (Harpenden, St. Albans, Anglie). U starších dětí je třeba výšku stání určit pomocí místně zkonstruovaného přístroje, ve kterém je kovová páska protažena mezi podnožkou a hlavovou tyčí, která má připevněnou hladinu kapaliny pro zajištění vodorovné polohy. Jako pozorovaná hodnota se zaznamená průměr dvou po sobě jdoucích měření výšky s přesností na 0,1 cm. Měření jsou porovnávána se standardy podle údajů Národního centra pro zdravotnickou statistiku a nutriční stav hodnocený Z-skóre. , Procento středních ekvivalentů jednotek standardní odchylky bude určeno a kategorizováno podle schématu Waterlow.

   Všechny děti budou podrobeny fyzickému vyšetření jedním z vyšetřovatelů. Děti budou rozděleny do jedné ze čtyř skupin podle náhodného výběru:

   • Skupina Anti Hp
   • Skupina Fe
   • Skupina Anti -Hp + skupina Fe
   • Placebo skupina

   Aby bylo možné porovnat celkovou prevalenci rezistence na léčbu železem u dětí s nedostatkem železa, bude zde pátá skupina zahrnující děti s anémií z nedostatku železa, ale bez infekce H. pylori. Tato skupina bude léčena terapií železem.

   Anti Hp terapie: Klaritromycin 15 mg/kg/den ve dvou rozdělených dávkách po dobu 10 dnů plus omeprazol 20 mg v jedné dávce po dobu 14 dnů. ,

   Léčba železem: Dávka železa 3 mg/kg/den (nebo asi 30 mg/den) ve formě síranu železnatého, jak doporučuje Dallman41, bude podávána v jedné dávce ráno půl hodiny před jídlem. Léčba železem bude podávána po dobu 90 dnů.

   Placebo glukózový sirup

   1.3.1 Suplementace Intervenční sirup(y) budou podávány denně v jedné dávce ráno nalačno (půl hodiny před jídlem). Děti ve skupině s placebem dostanou stejné množství glukózového sirupu. Všechny terapie budou uchovávány v identických tmavě hnědých nádobách a budou podávány zdravotnickým pracovníkem, který nebude vědět o povaze studie a obsahu uvnitř lahvičky. Dvacet čtyři hodin příjmu potravy bude zaznamenáno na předem zakódovaném formuláři pomocí diety.

   Děti budou sledovány tři měsíce po ukončení suplementace. Močovinový dechový test bude opakován na konci a za 1 a 3 měsíce po suplementaci. Na konci a po 1 a 3 měsících suplementace bude odebrána venózní krev (500 µl) pro stanovení sérového feritinu, transferinového receptoru a koncentrace hemoglobinu. Děti ve skupině s placebem dostanou na konci období studie tříměsíční kúru suplementace železem pod dohledem.

   1.4 Výpočet velikosti vzorku Velikost vzorku se vypočítá na základě (i) ​​prevalence infekce H. pylori, (ii) prevalence neodpovědi na léčbu železem.

   Výpočet velikosti vzorku na základě prevalence infekce H. pylori

   Vzhledem k prevalenci infekce H. pylori 50 % a anémii z nedostatku železa 70 %,44 předpokládáme anémii související s H. pylori u 50 % kojenců a dětí v této komunitě. Očekáváme snížení prevalence anémie z nedostatku železa související s H. pylori po léčbě antibiotiky a terapií železa o 25 %. Pro detekci rozdílu této velikosti při 5% úrovni a při 80% výkonu se velikost vzorku vypočítá takto:

   N =[P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Kde P1= prevalence anémie související s H. pylori P2= prevalence anémie související s H. pylori po terapii

   =[50(50) +25(75)]* 8 / (25)2

   = 56 v každé skupině

   Na základě předchozí studie v této komunitě očekáváme míru opuštění přibližně 15 %. S (Akramuzzaman SM, osobní komunikace) bude potřebná velikost vzorku 65 dětí v každé skupině a celkový vzorek dětí bude 260.

   Výpočet založený na prevalenci non-respondérů na léčbu železem

   Pozorování z probíhající studie s programem perorálního doplňování železa u anemických pacientů, který se provádí v Dinajpuru (severní oblast Bangladéše), naznačuje, že 70 % skupiny užívající železo nereaguje (S. Rahman, osobní sdělení). Prevalence infekce H. pylori v navrhované studijní populaci je přibližně 50 %,35 a očekáváme, že po perorální suplementaci železa bude nereagujících pacientů o 40 % méně mezi H. pylori negativní skupinou ve srovnání s H. pylori pozitivní skupinou . Pro detekci rozdílu této velikosti při 5% úrovni a při 80% výkonu se velikost vzorku vypočítá takto:

   N = [P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Kde P1= prevalence anémie po suplementaci železa u dětí infikovaných H. pylori P2= prevalence anémie po suplementaci železa u neinfikovaných dětí H. pylori

   • [(70)(30) +(42)(58)] * 8 / (35)2 = 46 v každé skupině

   Při 15% neúčasti bude počet dětí 53 v každé skupině, tj. celkový vzorek 212 dětí.

   Pro tuto studii vezmeme větší vzorek, tj. 260 dětí.

   1.5 Randomizace Hlavní randomizační tabulku připraví vhodně vyškolená osoba, která není spojena se studií, pomocí náhodných permutovaných čísel bloků o velikosti tři. Lahve obsahující anti-Hp terapii, terapii železem nebo placebo budou mít identický vzhled a budou uspořádány v pořadí, které odpovídá randomizační tabulce, a budou sériově očíslovány. Sériové číslo lahviček bude odpovídat sériovému číslu pacientů zařazených do studie. Protože jedna skupina dětí by dostávala anti-Hp terapii a terapii železem současně, budou pro každou skupinu dětí dvě lahvičky (lahve A nebo B), aby byla studie dvojitě zaslepená. Pro děti z anti-Hp plus terapie železem bude k dispozici jedna lahvička s anti-Hp terapií nebo druhá s terapií železem. Děti, které se účastní samotné terapie železem nebo anti-Hp terapie, dostanou jednu lahvičku obsahující lék, zatímco druhá bude obsahovat glukózový sirup. Vzhledem k tomu, že délka anti-Hp terapie je 14 dní, bude dětem z této skupiny po zbytek měsíce podáván glukózový sirup, aby byla délka terapie u všech čtyř skupin stejná.

   1.6 Laboratorní test Koncentrace Hb bude stanovena kyanmethemoglobinovou metodou, sérový feritin bude stanoven radioimunometrickým stanovením. Sérový transferinový receptor bude měřen enzymatickým imunosorbentním testem (ELISA). Stolice bude testována na přítomnost okultní krve guajakovou reakcí (Occultotest, Ames Co., Elkhart, Inc.,. USA). Sérový pepsinogen a gastrin budou měřeny radioimunoanalýzou.

   1.7 Odstoupení od studia - Nesplnění předmětu, ať už proto, že před ukončením studia opustí studijní prostor na jiné místo, popř.

   - protože dítě vyžaduje neplánovanou léčbu závažné dočasné infekce.

   Léčba abstinenčních příznaků během analýzy Výsledky všech randomizovaných dětí budou zahrnuty do analýzy studie. Údaje o odebraných pacientech budou zahrnuty až do doby odebrání. Bude také provedena doplňková analýza, ve které budou tito pacienti vyloučeni

   1.8 Proměnné výsledku

   Hlavní, důležitý

   - Výskyt infekce H. pylori po léčbě.

   - Vzestup sérového hemoglobinu, sérové ​​koncentrace feritinu nebo snížení hladiny sérových transferinových receptorů.

   - Počet dětí v každé skupině s IDA, jak je primárně definováno před intervencí a po ní

   Méně důležitý

   - Změna antropometrických indexů

2. Studie absorpce železa Do studie absorpce železa bude vybráno dalších dvacet dětí s pozitivním dechovým testem na močovinu a anémií z nedostatku železa. Rodičům bude vysvětlen účel studie a všechny postupy související se studií absorpce železa a budou získány souhlasy. Před zahájením studie absorpce železa bude všem dětem podávána komerční výživa s kravským mlékem s upravenou syrovátkou s 8 mg Fe/l (Nidina 1; Nestlé, Paříž, Francie) po dobu nejméně tří týdnů. Po 21 dnech umělé výživy budou přijati do Metabolického oddělení klinického výzkumu a servisního centra.

Inkorporace značeného železa (radiostabilního) do erytrocytů byla úspěšně použita ke zkoumání absorpce ze střeva. Způsob inkorporace erytrocytů zahrnuje orální podávání izotopu železa s následným měřením poměru izotopů železa v erytrocytech ve zvoleném čase po podání. Budeme se řídit technikou měření absorpce železa u dětí technikou dvojitého stabilního izotopu, kterou nedávno vyvinuli Kastenmayer et al.

2.1 Metoda studie absorpce železa

Příprava značených roztoků síranu železitého Obohacený 57Fe a 58Fe-oxid železitý (Fe2O3) bude zakoupen od Oak ridge National Laboratory (Oak Ridge, TN, USA). Izotopové složení železa v přípravku 58Fe (jak poskytl Oak ridge National Laboratories) jsou (mg): (hmotnostní %) 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,6)57 Fe (3,47) a 58Fe (60,28). Izotopové složení železa v 57Fe (hmotnostní %) jsou; 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,60), 57Fe (3,47) a 58Fe (60,28).

Oxid železitý se rozpustí v koncentrované H2SO4 probubláváním oxidu uhelnatého roztokem za tepla po dobu přibližně čtyř hodin. Roztok pak bude snížen průchodem čištěného dusíku po dobu několika minut. Objem se poté upraví pomocí odlehčené vody. Dvouml alikvot výsledných roztoků 57 FeSO4 a 58 FeSO4 se převede do neprůhledných ampulí. Každá ampule bude propláchnuta dusíkem a uzavřena. Ampule budou obsahovat buď 200 µg/ml celkového železa (jako síran železnatý) a 150 µg/ml 57Fe nebo 700 µg/ml celkového železa (jako síran železnatý) a 420 µg/ml 58Fe. Alikvot z jednotlivé ampule se použije k přípravě pracovních roztoků s přídavkem 57Fe a 58Fe.

Stabilita a bezpečnost parenterálních roztoků 57 Fe Před i.v. podání kojencům bude roztok 57FeSO4 testován na pyrogenitu, sterilitu a stabilitu. Testování lyzátu amoebocytů Limulus (LAL) a opakovaná kultivace na růst bakterií a plísní, aby se potvrdilo, že roztoky 57FeSO4 jsou apyrogenní a sterilní v koncentracích, které se mají ve studii použít. Obsah živin v parenterálních roztocích byl popsán dříve. Celkový obsah železa v živném roztoku 57FeSO4 bude stanoven atomovou absorpční spektrometrií před a po filtraci (0,22 µ filtry) a v průběhu času při pokojové teplotě.

2.2 Návrh studie studie absorpce železa Kojenci zařazení do studie budou dostávat kombinaci parenterální a enterální výživy. Roztok 57FeSO4 bude podáván parenterálně, zatímco roztok 58FeSO4 bude podáván enterální cestou. Inkorporace 57Fe a 58Fe do erytrocytů bude poté měřena ze vzorků krve odebraných dva týdny po počátečních infuzích. Procento intravenózně podané dávky přítomné v cirkulujících erytrocytech bude použito jako reference pro procento absorbovaného železa (z perorálně podané dávky) přítomného v cirkulujících erytrocytech. "Opravené" procento začlenění 58Fe a 57Fe do erytrocytů (58Fe inc-cor/ 57Fe inc-cor) bude vypočteno matematicky, jak je popsáno níže.

Před iv podáním dětem 0,7-0,8 ml roztoku 57FeSO4 (0,2 mg/ml) bude přidáno do burytrolu obsahujícího 30 ml živného roztoku používaného pro parenterální výživu za použití sterilních technik. Směs železa a živin, která byla dříve bezpečně používána, bude dětem podávána pomalu do periferní žíly po dobu 12-24 hodin pomocí infuzní pumpy.

Brzy po zahájení parenterální infuze roztoku 57FeSO4 bude dětem podán enterální 58FeSO4. Během této doby bude pokračovat parenterální infuze 57FeSO4. Po kontrole, zda je nazogastrická sonda pro vyživování správně umístěna v žaludku, se sonda odsaje, aby se zkontroloval obsah žaludku. Pokud je žaludek prázdný, 1,5 ml 58 FeSO4 bude podáno přímo injekční stříkačkou do přívodní trubice. Zkumavka se poté propláchne 0,5 ml sterilní vody. Dávka parenterálního 57FeSO4 bude 0,15 mg/kg (roztok síranu železnatého obohacený 57Fe), což by poskytlo 0,12 mg/kg 57Fe. Dávka enteralu bude 1,5 mg/kg (roztok síranu železnatého obohacený 58Fe), což poskytne 0,8 mg/kg 58Fe. Děti budou propuštěny s terapií infekce Helicobacter pylori (Klarithromycin plus omeprazol) po dobu 10 dnů.

Po měsíci terapie budou matky požádány, aby přivedly své děti do CRSC. Bude provedena opakovaná studie UBT a absorpce železa.

2.3 Odběr krve Vzorky krve budou odebrány před podáním stabilních izotopů (základní hodnota) a v obou případech o 14 dní později. Velikost vzorku krve bude 200-300 µl na vzorek.

2.4 Výpočet inkorporace železa v erytrocytech Množství podaného 58Fe a 57Fe (mg) inkorporovaného do erytrocytů v určeném čase 't' po podání dávky značeného železa bude vypočítáno podobným způsobem, jaký používá Zlotkin et al 1995.

58 Fe vč. =Rt58/54 -Ro58/54 xFe okruh x 0,00322 Ro58/54

57 Feinc = R157/54-Ro57/54 x Fe circ x 0,0218 Ro57/54

V této rovnici bude 58 Feinc a 57Feinc vyjádřeno v mg. R158/54, R157/54 a R057/54 jsou poměry izotopů vyjádřené na základě hmotnosti pro 58Fe/54Fe a 57Fe/54Fe, které budou stanoveny ve vzorcích natrávené krve v čase „t“ po dávkování a na výchozí hodnotě (před 58Fe a před dávkami 57Fe); Fe circ je množství cirkulujícího železa. Fe circ v čase "t"; 0,0032 a 0,0218 jsou přirozené abundance (hmotnostní zlomky) 58 Fe a 57 Fe. Množství celkového cirkulujícího železa, Fe circ, vyjádřené v mg, bude odhadnuto jako

Fe circ. = BV x Hb X 3,47

Kde BV je objem krve v litrech, předpokládá se, že je 0,085 l/kg tělesné hmotnosti; Hb je koncentrace hemoglobinu vg/l; 3,47 je koncentrace železa v Hb (mg/g).

Množství podaného 58Fe nebo 57Fe inkorporovaného do erytrocytů, % Fe inc, bude vyjádřeno jako procento podaných dávek 58Fe nebo 57Fe. Feinc.

• 58 Fe inc = 58 Fe inc x 100 nebo Fe inc
• 57 Fe inc = 57 Fe inc x 100 57 Fe inc

Korigované procento erytrocytů pro analýzu stabilních poměrů izotopů v erytrocytech bude vypočteno pomocí procenta inkorporace erytrocytů i.v infundovaného 57Fe.

• 58Fe inc-cor = % 58Fe inc X 100.
• 57 Feinc

Hmotnostní spektrometrická analýza Příprava vzorků krve pro hmotnostní spektrometrickou analýzu a příprava obohacených standardů bude následovat podle postupů popsaných Kastenmayerem et al. Vzorky heparinizované plné krve budou vlhké popelem s koncentrovanou HNO3 v poměru 1:3 (krev:kyselina) (obj./obj.) na plotně na mírném ohni po dobu 20-30 minut. Natrávené roztoky se upraví deionizovanou vodou, aby se dosáhlo koncentrace železa 10 ug/ml. Izotopově obohacené standardy pro kalibraci přístroje budou připraveny stejným způsobem jako u neznámých vzorků. Poměry izotopů pro 58Fe/54Fe a 57Fe/54Fe v krvi před a po současném enterálním (58Fe) a parenterálním (57Fe) podání izotopů budou stanoveny počítačem řízeným tepelně ionizačním hmotnostním spektrometrem za použití systému Elan Model 250 ICP/MS, (SCIEX, Inc., Thornhill, Ontario, Kanada), provozované v režimu izotopového poměru, jak následuje Zlotkin et al. na katedře pediatrické a nutriční vědy, University of Tronoto, Kanada.

Intubační test Po dokončení studie absorpce železa bude u této podskupiny dětí proveden standardní intubační test, jak je popsáno výše14. Stručně řečeno, měkká žaludeční sonda (18G) bude umístěna v nejvíce závislé části žaludku. Vzorky žaludeční kyseliny budou odebrány dětem ležícím v poloze na levé straně pomocí ručního odsávání. Poloha sondy bude potvrzena poslechem, aspirací žaludeční šťávy a téměř úplným obnovením vody vstříknuté do sondy. Vzorky žaludeční šťávy budou zlikvidovány během prvních 10 minut po intubaci. Poté budou vzorky odebrány a uloženy v 15minutovém alikvotu po dobu 90 minut. Po 90 minutách odběru (bazální vzorek) bude subkutánně podán pentagastrin (peptavlon, ICI) v dávce 0,6 ug/kg. Vzorek po stimulaci pentagastrinem po dobu 60 minut bude označován jako "stimulovaný vzorek". Objem žaludeční sekrece v každém z 15minutových odběrů bude zaznamenán a vyjádřen v mililitrech za hodinu. Koncentrace kyseliny v každé z nich budou měřeny titrací 1 ml žaludeční šťávy 0,01N hydroxidem sodným na pH 7,4 za použití automatického titrátoru (Metrohm, Herisau, Švýcarsko). Celkový výdej kyseliny byl vypočten pro každý pint vynásobením objemu žaludeční šťávy a koncentrace kyseliny. Bazální (BAO) a stimulovaný výdej kyseliny (SAO) byly vypočteny na základě 2 vzorků odebraných pro základní měření a 4 vzorků odebraných po podání pentagastrinu, v daném pořadí, a byly vyjádřeny jako mMol/h.