Is Helicobacter Pylori-infectie een oorzaak of behandelingsfalen van bloedarmoede door ijzertekort bij kinderen in Bangladesh?

Wij stellen voor aanvullende studie:

1. Er wordt een prospectieve, dubbelblinde, placebogecontroleerde veldproef voorgesteld bij tweehonderdzestig kinderen van een peri-urbane gemeenschap in de buurt van Dhaka City.
2. De beoordeling van ijzerabsorptie voor en na anti-infectieuze therapie bij 20 kinderen met H. Pylori-infectie en bloedarmoede door ijzertekort

3. Veldproef

   1.1 Beschrijving van de onderzoekspopulatie Kinderen zullen worden gerekruteerd uit Nandipara, een peri-urbane gemeenschap op 11 kilometer ten noordoosten van de stad Dhaka. Deze gemeenschap heeft een bevolking van 3.500 in een gebied van ongeveer 2,5 vierkante mijl. Van de bewoners wordt 70% van de mannen geclassificeerd als dagloners, 20% zijn riksjatrekkers en 5% zijn timmerlieden of servicehouders. Vijftien procent van de vrouwen is dagloner en 85% is huisvrouw. De gemiddelde gezinsgrootte is 4,5 leden. De sloppenwijk heeft een gemeentelijke watervoorziening om te drinken en te koken en de meeste gezinnen wonen in slecht gebouwde huizen. De overgrote meerderheid van de huizen heeft lemen muren met droge bladeren van riet en daken van bamboe of tin. De bevolking jonger dan vijf jaar is ongeveer 700. De prevalentie van H. pylori-infectie bij minder dan vijf kinderen in deze gemeenschap is 50%.44 Sinds 1986 wordt er wekelijks een kliniek geleid door het International Centre for Diarree Diseases Research, Bangladesh (ICDDR,B) voor kleine ziektegevallen onder de bevolking.

   Alle kinderen in de gemeenschap zullen in eerste instantie worden gescreend op bloedarmoede door ijzertekort en H. pylori-infectie. Na uitleg van het onderzoek en de tests zal geïnformeerde toestemming worden verkregen van de ouders of wettelijke voogden. Demografische informatie, waaronder naam, geboortedatum, geslacht, gewicht, lengte, economische status van de ouders, aard van de voeding en eerdere medicatie in de afgelopen 1 maand, wordt geregistreerd.

   Screening op bloedarmoede door ijzertekort Capillaire bloedmonsters van 50 µl, verkregen via een vingerprik, zullen worden beoordeeld op de hemoglobineconcentratie (Hgb). Meting van de hemoglobineconcentratie is de meest bruikbare test bij het screenen van bloedarmoede door ijzertekort, omdat het direct de hoeveelheid van de meest voorkomende essentiële ijzerverbinding in het lichaam weergeeft. Kinderen met een hemoglobineconcentratie van minder dan 110 g/l worden als bloedarmoede beschouwd. Bij kinderen met een laag Hgb geïdentificeerd tijdens de eerste screening, zal de diagnose bloedarmoede door ijzertekort worden bevestigd door venapunctie Hgb, serumferritineconcentratie en serumtransferrinereceptorconcentratie. De hemoglobineconcentratie kan tijdelijk worden verlaagd als gevolg van een ontsteking of infectie en duidt in een dergelijke situatie niet op pathologische bloedarmoede. Van alle biochemische tests voor het beoordelen van de ijzerstatus is een lage SF de meest specifieke test voor ijzertekort. Het grootste nadeel van SF is dat het snel verhoogd wordt als reactie op een inflammatoire infectieziekte. Een groot voordeel van sTfR is dat sTfR, in tegenstelling tot SF, niet significant wordt beïnvloed door infectie of het ontstekingsproces. De sTfR-niveaus zijn echter verhoogd in situaties van verhoogde RBC-turnover, zoals hemolytische anemie, d.w.z. thalassemie, enz. Een uniforme afkapwaarde van >8,5 mg/l duidt op een verhoogde sTfR en dus op ijzertekort of hemolytische anemie.

   Meting van serumtransferrinereceptoren wordt ook een veelbelovende nieuwe test voor de evaluatie van de ijzerstatus, met name bij de epidemiologische beoordeling van bloedarmoede. Uitgevoerd in combinatie met serum-ferritinemetingen, dient de serum-transferrinereceptor om echt ijzertekort te onderscheiden van bloedarmoede van bloedarmoede bij chronische ziekten of ontstekingsziekten en biedt daarom een ​​groot voordeel bij het vaststellen van de werkelijke prevalentie van bloedarmoede door ijzertekort in populatiestudies . De combinatie van een laag hemoglobinegehalte, een laag serumferritinegehalte en een verhoogde serumtransferrinereceptor zijn kenmerkend voor bloedarmoede door ijzertekort. De diagnose ijzertekort wordt gesteld wanneer aan de volgende criteria wordt voldaan: transferrinereceptor > 8,3 mg/l, serumferritineconcentratie

   Screening van met H. Pylori geïnfecteerde kinderen De anemische kinderen zullen worden gescreend op H. Pylori-infectie met behulp van een ureum-ademtest (UBT), die wordt overwogen door veel van de diagnostische referentietests voor H. pylori-infectie. We hebben de test onlangs opgezet bij ICDDR,B.44 In het kort zijn de procedures als volgt.

   Ureum-ademtest Een ademmonster wordt verzameld voor basislijn 13 CO2 in een vacutainer na een vastenperiode van 2 uur. De kinderen mogen dan een volume van 100 ml volle melk consumeren. Tien minuten later wordt 40 mg 13C ureum (99% 13C, Tracer Technologies, Boston, Massachusetts) gegeven na oplossen in 25 ml water. Na toediening van het substraat worden na 30 min opnieuw ademmonsters in duplo genomen. Monsters worden verzameld via een tweeweg-pediatrisch masker met een bevestigde terugslagklep in een vacutainer en worden opgeslagen voor verzending naar de Universiteit van Alabama, om de 13C-concentratie van een respiratoire CO2-massaspectrometer te meten. De overschrijding van de basislijn wordt uitgedrukt in delen per duizend (delta 0/00). Een ademtest waarbij de overmaat boven een basislijn 5,00/00 na 30 minuten is, wordt als positief beschouwd voor H. pylori-infectie.

   1.2 Selectie van studiekinderen IJzergebreksanemie kinderen met een gewicht voor de leeftijd >60% van het National Center for Health Statistics (NCHS), zonder bewijs van deficiëntieziekten of systemische infectie en van wie de ouders geïnformeerde toestemming hebben gegeven, zullen in deze studie worden opgenomen.

   Uitsluitingscriteria De kinderen met de volgende problemen worden uitgesloten.

   • Acute infectie of schijnbaar ontstekingsproces
   • Tekenen van vitaminetekort
   • Ernstige bloedarmoede (hemoglobine
   • Ernstige ondervoeding (marasmus, marasmische kwasiorkar of kwasiorkar)
   • Aanwezigheid van haakwormen en/of Giardia lamblia (cyste of vegetatieve vorm) in ontlasting microscopisch onderzoek
   • Aanwezigheid van vet in een ontlasting microscopisch onderzoek
   • Aanwezigheid van occult bloed in een ontlasting zoals aangetoond door Guaiac-test
   • Geschiedenis van het nemen van antibiotica of medicijnen voor welke oorzaak dan ook in de voorgaande maand

   1.3 Werkwijze Er wordt een uitgebreide medische anamnese vastgelegd. Lichaamsgewicht en lengte worden gemeten bij deelname aan het onderzoek. Naakte gewichten worden verkregen tot op 10 g nauwkeurig met behulp van een weegschaal (Gebrüder Soehnle, Murrhardt, Duitsland) en het gemiddelde van drie opeenvolgende metingen wordt geregistreerd. Liggende lengte zal worden gemeten bij kinderen jonger dan twee jaar met behulp van een slideboard-infantometer (Harpenden, St. Albans, Engeland). Bij oudere kinderen moet de stahoogte worden bepaald met behulp van een lokaal geconstrueerd instrument waarbij een metalen meetlint wordt uitgeschoven tussen een voetplaat en hoofdstang waaraan een vloeistofniveau is bevestigd om een ​​horizontale positie te garanderen. Het gemiddelde van twee opeenvolgende hoogtemetingen tot op 0,1 cm nauwkeurig wordt geregistreerd als de waargenomen waarde. Metingen worden vergeleken met de normen volgens de gegevens van het National Center for Health Statistic en de voedingsstatus wordt beoordeeld met de Z-score. Percentage mediane equivalenten van standaarddeviatie-eenheden worden bepaald en gecategoriseerd volgens het schema van Waterlow.

   Alle kinderen worden lichamelijk onderzocht door een van de onderzoekers. De kinderen worden volgens randomisatie ingedeeld in een van de vier groepen:

   • Anti Hp groep
   • Fe groep
   • Anti-Hp-groep + Fe-groep
   • Placebo-groep

   Om de algehele prevalentie van resistentie tegen ijzertherapie bij kinderen met ijzertekort te vergelijken, zal er een vijfde groep zijn, bestaande uit kinderen met bloedarmoede door ijzertekort maar zonder H. pylori-infectie. Deze groep wordt behandeld met ijzertherapie.

   Anti-hp-therapie: claritromycine 15 mg/kg/dag verdeeld over twee doses gedurende 10 dagen plus omeprazol 20 mg enkele dosis gedurende 14 dagen. ,

   IJzertherapie: Een ijzerdosis van 3 mg/kg/dag (of ongeveer 30 mg/dag) in de vorm van ijzersulfaat, zoals aanbevolen door Dallman41, wordt 's ochtends een half uur voor het eten in een enkele dosis toegediend. De ijzertherapie wordt gedurende 90 dagen gegeven.

   Placebo Glucosestroop

   1.3.1 Suppletie De interventiesiroop(en) wordt/worden dagelijks in een enkele dosis 's morgens op een lege maag gegeven (een half uur voor het eten). De kinderen in de placebogroep krijgen dezelfde hoeveelheden glucosestroop. Alle therapieën worden bewaard in identieke donkerbruine containers en worden gevoed door een gezondheidswerker die niet op de hoogte wordt gehouden van de aard van het onderzoek en van de inhoud in de fles. Voedselinname van vierentwintig uur zal worden geregistreerd op een vooraf gecodeerd formulier door middel van een dieetherinnering.

   De kinderen worden gedurende drie maanden na het einde van de suppletie gevolgd. Aan het einde en 1 en 3 maanden na de suppletie wordt de ureumademtest herhaald. Veneus bloed (500 µl) zal worden afgenomen voor bepaling van serumferritine, transferrinereceptor en hemoglobineconcentratie aan het einde en na 1 en 3 maanden suppletie. Kinderen in de placebogroep krijgen aan het einde van de studieperiode een kuur van drie maanden ijzersuppletie onder toezicht.

   1.4 Berekening van de steekproefomvang De steekproefomvang wordt berekend op basis van (i) prevalentie van H. Pylori-infectie, (ii) prevalentie van non-respons op ijzertherapie.

   Berekening van de steekproefomvang op basis van de prevalentie van H. Pylori-infectie

   Gezien de prevalentie van H. Pylori-infectie 50% en bloedarmoede door ijzertekort 70%,44 verwachten we H. Pylori-gerelateerde anemie bij 50% van de zuigelingen en kinderen in deze gemeenschap. We verwachten een vermindering van de prevalentie van H. Pylori-gerelateerde bloedarmoede door ijzertekort na therapie met antibiotica plus ijzertherapieën met 25%. Om een ​​verschil van deze grootte op een niveau van 5% en een vermogen van 80% te detecteren, wordt de steekproefomvang als volgt berekend:

   N =[P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Waarbij P1= prevalentie van H. Pylori-gerelateerde anemie P2= prevalentie van H. Pylori-gerelateerde anemie na therapie

   =[50(50) +25(75)] * 8 / (25)2

   =56 in elke groep

   Op basis van een eerdere studie in deze gemeenschap verwachten we een uitval van ongeveer 15%. Met een (Akramuzzaman SM, persoonlijke mededeling) zal de benodigde steekproefomvang 65 kinderen in elke groep zijn en de totale steekproef van kinderen zal 260 zijn.

   Berekening op basis van de prevalentie van non-responders op ijzertherapie

   Observatie van een lopend onderzoek met een oraal ijzersuppletieprogramma bij anemische patiënten dat wordt uitgevoerd in Dinajpur (een noordelijk district van Bangladesh) suggereert dat 70% van de ijzersuppletiegroep niet reageert (S. Rahman, persoonlijke mededeling). De prevalentie van H. Pylori-infectie in de voorgestelde onderzoekspopulatie is ongeveer 50%,35 en we verwachten dat na orale ijzersuppletie de non-responders 40% minder zullen zijn bij de H. pylori-negatieve groep, in vergelijking met de H. pylori-positieve groep. . Om een ​​verschil van deze grootte op een niveau van 5% en een vermogen van 80% te detecteren, wordt de steekproefomvang als volgt berekend:

   N = [P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Waarbij P1= prevalentie van anemie na ijzersuppletie bij met H. pylori geïnfecteerde kinderen P2= prevalentie van anemie na ijzersuppletie bij niet met H. pylori geïnfecteerde kinderen

   • [(70)(30) +(42)(58)] * 8 / (35)2 =46 in elke groep

   Met een uitvalpercentage van 15% zal het aantal kinderen in elke groep 53 zijn, d.w.z. een totale steekproef van 212 kinderen.

   We zullen de grotere steekproefomvang nemen, d.w.z. 260 kinderen voor dit onderzoek.

   1.5 Randomisatie Er zal een master-randomisatiekaart worden opgesteld door een goed opgeleide persoon die niet bij het onderzoek betrokken is, gebruikmakend van willekeurige gepermuteerde bloknummers met een grootte van drie. Flessen met anti-Hp-therapie, ijzertherapie of placebo zien er identiek uit en worden gerangschikt in de volgorde die overeenkomt met de randomisatietabel en worden serieel genummerd. Het serienummer van de flessen komt overeen met het serienummer van de patiënten die in het onderzoek zijn opgenomen. Aangezien één groep kinderen tegelijkertijd anti-Hp-therapie en ijzertherapie zou krijgen, zullen er twee flessen (fles A of B) zijn voor elke groep kinderen om de studie dubbelblind te maken. Voor kinderen die behoren tot anti-Hp plus IJzertherapie, zal er één fles zijn met anti-Hp-therapie of en de andere met ijzertherapie. Kinderen die alleen ijzertherapie of anti-Hp-therapie volgen, krijgen één flesje met het medicijn en het andere flesje glucosestroop. Aangezien de duur van de anti-Hp-therapie 14 dagen is, krijgen de kinderen die tot deze groep behoren de rest van de maand glucosestroop om de duur van de therapie in de vier groepen gelijk te houden.

   1.6 Laboratoriumtest De Hb-concentratie wordt bepaald met de cyaanmethemoglobinemethode, serumferritine wordt bepaald met een radio-immunometrische test. Serumtransferrinereceptor zal worden gemeten met een enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA). De ontlasting zal worden getest op de aanwezigheid van occult bloed door de guaiac-reactie (Occultotest, Ames Co., Elkhart, Inc.,. VERENIGDE STATEN VAN AMERIKA). Serum pepsinogeen en gastrine zullen worden gemeten met een radio-immunoassay.

   1.7 Terugtrekking uit het onderzoek - De niet-naleving van de proefpersoon, ofwel omdat hij het studiegebied verlaat voor een andere plaats voor het einde van het onderzoek of

   - omdat het kind ongepland moet worden behandeld voor een ernstige tussentijdse infectie.

   Behandeling van ontwenning tijdens analyse Resultaten van alle gerandomiseerde kinderen zullen worden meegenomen in de analyse van het onderzoek. Gegevens van de teruggetrokken patiënten worden opgenomen tot het moment van terugtrekking. Er zal ook een aanvullende analyse worden gemaakt waarbij dergelijke patiënten worden uitgesloten

   1.8 Uitkomstvariabelen

   Belangrijk

   - De incidentie van H. Pylori-infectie na de therapie.

   - Stijging van serumhemoglobine, serumferritineconcentratie of verlaging van het niveau van serumtransferrinereceptoren.

   - Het aantal kinderen in elke groep met IDA zoals primair gedefinieerd voor en na de interventie

   Minderjarige

   - Verandering van antropometrische indexen

2. Onderzoek naar ijzeropname Twintig extra kinderen met een positieve Ureum-ademtest en bloedarmoede door ijzertekort worden geselecteerd voor het onderzoek naar ijzeropname. Het doel van het onderzoek en alle procedures met betrekking tot het onderzoek naar ijzerabsorptie zullen aan de ouders worden uitgelegd en er zal toestemming worden verkregen. Alvorens met het ijzerabsorptieonderzoek te beginnen, krijgen alle kinderen gedurende ten minste drie weken een in de handel verkrijgbare wei-aangepaste koemelkvoeding met 8 mg Fe/l (Nidina 1; Nestlé, Parijs, Frankrijk). Na 21 dagen formulevoeding worden ze opgenomen in de Metabolic Ward of Clinical Research and Service Center.

Erytrocytopname van gelabeld ijzer (radiostabiel) is met succes gebruikt om de absorptie vanuit de darm te onderzoeken. , De erytrocytopnamemethode omvat orale toediening van een isotoop van ijzer, gevolgd door meting van de isotopenverhouding van ijzer in erytrocyten op een geselecteerd tijdstip na toediening. We zullen de techniek volgen voor het meten van ijzerabsorptie bij kinderen door middel van een dubbele stabiele isotooptechniek, recentelijk ontwikkeld door Kastenmayer et al.

2.1 Methode voor onderzoek naar ijzerabsorptie

Bereiding van gelabelde ijzersulfaatoplossingen Verrijkt 57Fe en 58Fe-ijzeroxide (Fe2O3) zullen worden gekocht bij Oak Ridge National Laboratory (Oak Ridge, TN, VS). De isotopensamenstellingen van ijzer in het 58Fe-preparaat (zoals verstrekt door Oak Ridge National Laboratories) zijn (mg): (gewicht%) 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,6)57 Fe (3,47) en 58 Fe (60,28). De isotopensamenstellingen van ijzer in het 57Fe (gewicht%) zijn; 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,60), 57Fe (3,47) en 58Fe (60,28).

IJzeroxide wordt opgelost in geconcentreerd H2SO4 door gedurende ongeveer vier uur koolmonoxide door de oplossing te laten borrelen. De oplossing wordt vervolgens gedegradeerd door er gedurende enkele minuten gezuiverde stikstof doorheen te leiden. Het volume wordt dan aangepast met gedeclasseerd water. Een aliquot van 2 ml van de resulterende 57 FeSO4- en 58 FeSO4-oplossingen wordt overgebracht in ondoorzichtige ampullen. Elke ampul wordt gespoeld met stikstof en verzegeld. Ampullen bevatten ofwel 200 µg/ml totaal ijzer (als ferrosulfaat) en 150 µg/ml 57Fe of 700 µg/ml totaal ijzer (als ferrosulfaat) en 420 µg/ml 58Fe. Een aliquot van een individuele ampul zal worden gebruikt om 57Fe en 58Fe-verrijkte werkoplossingen te bereiden.

Stabiliteit en veiligheid van parenterale 57 Fe-oplossingen Voorafgaand aan i.v. toediening aan de zuigelingen zal de 57FeSO4-oplossing worden getest op pyrogeniciteit, steriliteit en stabiliteit. Limulus amoebocyte lysate (LAL) testen en herhaald kweken voor bacterie- en schimmelgroei om te bevestigen dat de 57FeSO4-oplossingen pyrogeenvrij en steriel zijn bij de concentraties die in het onderzoek moeten worden gebruikt. Het voedingsgehalte van de parenterale oplossingen is eerder beschreven. Het totale ijzergehalte van de 57FeSO4 -voedingsoplossing zal worden bepaald door middel van atoomabsorptiespectrometrie voor en na filtratie (0,22 µ filters), en in de tijd bij kamertemperatuur.

2.2 Studieopzet van onderzoek naar ijzerabsorptie Zuigelingen die deelnemen aan het onderzoek krijgen een combinatie van parenterale en enterale voeding. De 57FeSO4-oplossing wordt parenteraal toegediend, terwijl de 58FeSO4 via de enterale weg wordt toegediend. De opname van 57Fe en 58Fe in erytrocyten wordt vervolgens gemeten aan de hand van bloedmonsters die twee weken na de eerste infusies zijn genomen. Het percentage van de i.v. toegediende dosis dat aanwezig is in de circulerende erytrocyten zal worden gebruikt als referentie voor het percentage geabsorbeerd ijzer (uit de oraal toegediende dosis) dat aanwezig is in de circulerende erytrocyten. Het "gecorrigeerde" percentage erytrocyten 58Fe en 57Fe opname (58 Fe inc-cor/57Fe inc-cor) zal wiskundig worden berekend zoals hieronder beschreven.

Voorafgaand aan intraveneuze toediening aan de kinderen, 0,7-0,8 ml van de 57FeSO4-oplossing (0,2 mg/ml) wordt met behulp van steriele technieken toegevoegd aan een burytrol die 30 ml van de voedingsoplossing bevat die wordt gebruikt voor parenterale voeding. Het ijzer-voedingsstofmengsel, dat voorheen veilig werd gebruikt, wordt met behulp van een infuuspomp langzaam in een perifere ader van de kinderen geïnfundeerd gedurende een periode van 12-24 uur.

Kort na de start van de parenterale infusie van de 57FeSO4-oplossing wordt de enterale 58FeSO4 aan de kinderen gegeven. Gedurende deze tijd zal de parenterale infusie van 57FeSO4 worden voortgezet. Nadat is gecontroleerd of de nasogastrische voedingssonde correct in de maag is geplaatst, wordt de sonde opgezogen om de maaginhoud te controleren. Als de maag leeg is, wordt 1,5 ml van de 58 FeSO4 rechtstreeks via een injectiespuit in de voedingssonde gebracht. De buis wordt vervolgens gespoeld met 0,5 ml steriel water. De dosering van parenteraal 57FeSO4 is 0,15 mg/kg (57Fe-verrijkte ijzersulfaatoplossing), wat 0,12 mg/kg 57Fe zou opleveren. De dosering van enteraal zal 1,5 mg/kg zijn (58Fe-verrijkte ijzersulfaatoplossing), wat 0,8 mg/kg 58Fe zal opleveren. De kinderen zullen gedurende 10 dagen worden ontslagen met therapie voor Helicobacter pylori-infectie (klaritromycine plus omeprazol).

Na een maand therapie worden de moeders verzocht hun kinderen naar het CRSC te brengen. Er zal een herhaald UBT- en ijzerabsorptieonderzoek worden uitgevoerd.

2.3 Bloedafname Bloedafname vindt plaats vóór toediening van de stabiele isotopen (baseline) en in beide gevallen 14 dagen later. De grootte van het bloedmonster zal 200-300 µl hoger zijn per monster.

2.4 Berekening van ijzeropname door erytrocyten De toegediende hoeveelheid 58Fe en 57Fe (mg) opgenomen in erytrocyten op gespecificeerd tijdstip 't' na toediening van de dosis gelabeld ijzer zal worden berekend op een manier die vergelijkbaar is met die gebruikt door Zlotkin et al 1995.

58 Fe inc. =Rt58/54 -Ro58/54 xFe omtrek x 0,00322 Ro58/54

57Feinc =R157/54-Ro57/54 x Fe omtrek x 0,0218 Ro57/54

In deze vergelijking worden 58 Feinc en 57Feinc uitgedrukt in mg. R158/54, R157/54 en R057/54 zijn de isotopenverhoudingen uitgedrukt op gewichtsbasis voor 58Fe/54Fe en 57Fe/54Fe, die zullen worden bepaald op verteerd bloedmonsters op tijdstip "t" na dosering en bij een basislijn (vóór 58Fe en pre 57Fe doses) respectievelijk; Fe circ is de hoeveelheid circulerend ijzer. Fe circ op het tijdstip "t"; 0,0032 en 0,0218 zijn de natuurlijke abundanties (gewichtsfracties) van 58 Fe en 57 Fe. De hoeveelheid totaal circulerend ijzer, Fe circ, uitgedrukt in mg, wordt geschat als

Fe circ. = BV x Hb X 3,47

Waarbij BV het bloedvolume in liters is, verondersteld 0,085 l/kg lichaamsgewicht te zijn; Hb is de hemoglobineconcentratie in g/l; 3,47 is de concentratie ijzer in Hb (mg/g).

De hoeveelheid toegediend 58Fe of 57Fe opgenomen in erytrocyten, % Fe incl., wordt uitgedrukt als een percentage van de toegediende doses 58Fe of 57Fe. Feinc.

• 58 Fe incl. = 58 Fe incl. x 100 of Fe incl
• 57 Fe incl. = 57 Fe incl. x 100 57 Fe incl

Het gecorrigeerde percentage erytrocyten voor analyse van de stabiele isotopenverhoudingen in erytrocyten zal worden berekend aan de hand van het percentage erytrocytenopname van i.v. geïnfundeerd 57 Fe.

• 58Fe incl. cor = % 58Fe incl. X 100.
• 57 Feinc

Massaspectrometrische analyse Voorbereiding van bloedmonsters voor massaspectrometrische analyse en bereiding van verrijkte standaarden zal worden gevolgd volgens de procedures beschreven door Kastenmayer et al. Monsters van gehepariniseerd volbloed worden gedurende 20-30 minuten op een hete plaat op laag vuur bevochtigd met geconcentreerd HNO3 in een verhouding van 1:3 (bloed: zuur) (vol/vol). Gedigesteerde oplossingen zullen worden aangepast met gedeïoniseerd water om een ​​ijzerconcentratie van 10 µg/ml te verkrijgen. Standaarden met isotopenverrijking voor een instrumentkalibratie worden op dezelfde manier voorbereid als met de onbekende monsters. Isotopenverhoudingen voor 58Fe/54Fe en 57Fe/54Fe in bloed voor en na gelijktijdige enterale (58Fe) en parenterale (57Fe) toediening van isotopen zullen worden bepaald door een computergestuurde thermische ionisatie massaspectrometer met behulp van een Elan Model 250 ICP/MS-systeem, (SCIEX, Inc., Thornhill, Ontario, Canada), bedreven in de isotopenverhoudingsmodus, zoals gevolgd door Zlotkin et al. in de afdeling Pediatrische en voedingswetenschap, Universiteit van Tronoto, Canada.

Intubatietest Een standaard intubatietest zoals eerder beschreven14 zal worden uitgevoerd bij deze subgroep van kinderen na afronding van het onderzoek naar ijzerabsorptie. In het kort, aangezien de zachte maagsonde (18G) in het meest afhankelijke deel van de maag wordt geplaatst. Bij kinderen die in de linker liggende positie liggen, worden maagzuurmonsters afgenomen met behulp van handmatige afzuiging. De positie van de sonde wordt bevestigd door auscultatie, aspiratie van maagsap en bijna volledig herstel van het in de sonde geïnjecteerde water. Monsters van maagsap worden de eerste 10 minuten na intubatie weggegooid. Daarna worden monsters verzameld en gedurende 90 minuten bewaard in een aliquot van 15 minuten. Na 90 minuten verzamelen (basaal monster) wordt pentagastrine (peptavlon, ICI) subcutaan geïnjecteerd in een dosis van 0,6 ug/kg. Het monster na pentagastrine-stimulatie gedurende 60 minuten wordt "gestimuleerd monster" genoemd. Het volume van de maagsecretie in elk van de verzamelingen van 15 minuten wordt geregistreerd en uitgedrukt in milliliter per uur. De zuurconcentraties in elk zullen worden gemeten door titratie van 1 ml maagsap met 0,01 N natriumhydroxide tot pH 7,4, met behulp van een geautomatiseerde titrator (Metrohm, Herisau, Zwitserland). De totale zuurproductie werd voor elke pint berekend door het volume maagsap en de zuurconcentratie te vermenigvuldigen. Basale (BAO) en gestimuleerde zuurproductie (SAO) werden berekend op basis van respectievelijk 2 monsters verzameld voor basislijnmeting en de 4 monsters verzameld na toediening van pentagastrine, en werden uitgedrukt als mmol/uur.