A Helicobacter Pylori fertőzés a vashiányos vérszegénység oka vagy kezelési sikertelensége gyermekeknél Bangladesben?

Kiegészítő vizsgálatot javasolunk:

1. Prospektív, kettős vak, placebo-kontrollos terepvizsgálatot javasolnak egy Dhaka város közelében lévő városkörnyéki közösség kétszázhatvan gyermekén.
2. A vas felszívódásának értékelése fertőzésellenes kezelés előtt és után 20 H. Pylori fertőzésben és vashiányos vérszegénységben szenvedő gyermeknél

3. Terep gyakorlat

   1.1 A vizsgált populáció leírása A gyerekeket Nandiparából, egy városkörnyéki közösségből toborozzák, amely Dhaka városától 7 mérföldre északkeletre található. Ennek a közösségnek 3500 lakosa van, körülbelül 2,5 négyzetmérföldes területen. A lakosok körében a férfiak 70%-a napszámos, 20%-a riksahúzó, 5%-a asztalos vagy szolgálatos. A nők 15 százaléka napszámos, 85 százaléka pedig háziasszony. Az átlagos családlétszám 4,5 fő. A nyomornegyedben van önkormányzati vízellátás az iváshoz és a főzéshez, és a legtöbb család rosszul épített házakban él. A házak nagy többsége sárfalú, nádfedeles száraz levelekkel és bambusz- vagy bádogtetővel. Az öt évnél fiatalabb népesség körülbelül 700 fő. A H. pylori fertőzés prevalenciája ebben a közösségben kevesebb mint öt gyermeknél 50%.44 A bangladesi Hasmenéses Betegségek Kutatóközpontja (ICDDR,B) 1986 óta heti klinikát működtet a lakosság kisebb megbetegedései miatt.

   Kezdetben minden gyermeket a közösségben szűrnek vashiányos vérszegénység és H. pylori fertőzés miatt. A vizsgálat és a tesztek ismertetése után a szülők vagy törvényes gyámok tájékozott beleegyezését kérik. A demográfiai adatok, beleértve a nevet, születési dátumot, nemet, súlyt, magasságot, a szülők gazdasági helyzetét, az etetés jellegét és az elmúlt 1 hónap korábbi gyógyszeres kezelését, rögzítésre kerülnek.

   Vashiányos vérszegénység szűrése 50 µl kapilláris vérmintákból, amelyeket ujjbegéssel vettünk, megvizsgáljuk a hemoglobin (Hgb) koncentrációját. A hemoglobinkoncentráció mérése a leghasznosabb teszt a vashiányos vérszegénység szűrésében, mivel közvetlenül tükrözi a szervezetben leggyakrabban előforduló esszenciális vasvegyület mennyiségét. A 110 g/l alatti hemoglobinkoncentrációjú gyermekek vérszegénynek minősülnek. A kezdeti szűrés során azonosított alacsony Hgb-vel rendelkező gyermekeknél a vashiányos vérszegénység diagnózisát a vénapunkciós Hgb, a szérum ferritin koncentrációja és a szérum transferrin receptor koncentrációja igazolja. A hemoglobinkoncentráció átmenetileg csökkenhet gyulladás vagy fertőzés miatt, és ilyen helyzetben nem utal kóros vérszegénységre. A vasállapot felmérésére szolgáló összes biokémiai teszt közül az alacsony SF a legspecifikusabb vashiányteszt. Az SF fő hátránya, hogy könnyen megemelkedik bármilyen fertőző gyulladásos állapot esetén. Az sTfR egyik fő előnye, hogy az SF-től eltérően az sTfR-t nem befolyásolja jelentősen a fertőzés vagy a gyulladásos folyamat. Az sTfR szintek azonban megemelkednek fokozott vörösvértest-forgalom esetén, mint például hemolitikus anémia, azaz talaszémia stb. A >8,5 mg/l egyenletes küszöbérték emelkedett sTfR-t, ezáltal vashiányt vagy hemolitikus anémiát jelez.

   A szérum transferrin receptorok mérése ígéretes új tesztté is válik a vasstátusz értékelésében, különösen a vérszegénység epidemiológiai felmérésében. A szérum ferritin méréssel együtt végzett szérumtranszferrin receptor arra szolgál, hogy megkülönböztesse a valódi vashiányt a vérszegénységtől a krónikus betegségek vagy gyulladásos betegségek vérszegénységétől, és ezért nagy előnyt jelent a vashiányos vérszegénység valódi prevalenciájának megállapításában populációs vizsgálatokban. . Az alacsony hemoglobin, az alacsony szérum ferritin és az emelkedett szérum transzferrin receptor kombinációja a vashiányos vérszegénység diagnosztikája. A vashiány diagnózisa a következő kritériumok teljesülése esetén történik: transzferrin receptor > 8,3 mg/l, szérum ferritin koncentráció

   H. Pylori fertőzött gyermekek szűrése A vérszegény gyermekeket H. Pylori fertőzésre szűrik karbamid kilégzési teszt (UBT) segítségével, amelyet a H. pylori fertőzés számos referenciadiagnosztikai tesztje figyelembe vesz. Nemrég létrehoztuk a tesztet az ICDDR B.44-ben Az eljárások röviden a következők.

   Karbamid légzési teszt Kilégzési mintát veszünk a 13-as CO2 alapvonalhoz egy vakutainerben 2 órás éheztetés után. Ezután a gyermekek 100 ml teljes tejet fogyaszthatnak el. Tíz perccel később 40 mg 13 C-karbamidot (99% 13C, Tracer Technologies, Boston, Massachusetts) adnak be 25 ml vízben való feloldás után. A szubsztrát beadása után 30 perc elteltével a levegőmintákat ismételten gyűjtik. A mintákat kétirányú gyermekmaszkon keresztül, egy visszacsapó szeleppel egy vákuátorba gyűjtik, és az Alabamai Egyetemre történő szállítás céljából tárolják, hogy megmérjék a légzési CO2 tömegspektrométer 13C-koncentrációját. Az alapvonal feletti többlet ezrelékben kerül kifejezésre (delta 0/00). Az a kilégzési teszt, amelyben az alapvonal feletti többlet 30 percnél 5,00/00, H. pylori fertőzésre nézve pozitívnak minősül.

   1.2 A vizsgálatba bevont gyermekek kiválasztása Azok a vashiányos anaemiás gyermekek, akik életkora meghaladja az Országos Egészségügyi Statisztikai Központ (NCHS) 60%-át, és akiknek nincs bizonyítéka hiánybetegségre vagy szisztémás fertőzésre, és akiknek szülei tájékozott beleegyezését adják, ebbe a vizsgálatba vonják be.

   Kizárási kritériumok Az alábbi problémákkal küzdő gyermekek kizárásra kerülnek.

   • Akut fertőzés vagy látszólagos gyulladásos folyamat
   • A vitaminhiány jelei
   • Súlyos vérszegénység (hemoglobin
   • Súlyos alultápláltság (marasmus, marasmic kwasiorkar vagy kwasiorkar)
   • Horogférgek és/vagy Giardia lamblia (ciszta vagy vegetatív forma) jelenléte székletmikroszkópos vizsgálatban
   • Zsír jelenléte a széklet mikroszkópos vizsgálatában
   • Okkult vér jelenléte a székletben, amint azt a Guaiac teszt kimutatta
   • Antibiotikumok vagy bármilyen kábítószer-szedett bármilyen okból az előző hónapban

   1.3 Eljárás A részletes kórelőzményt rögzítjük. A vizsgálatba való beiratkozáskor megmérik a testsúlyt és a magasságot. A meztelen súlyokat 10 grammos pontossággal kell meghatározni egy mérlegmérleg segítségével (Gebrüder Soehnle, Murrhardt, Németország), és három egymást követő mérés átlagát rögzítik. A fekvőtámasz hosszát két évnél fiatalabb gyermekeknél csúszódeszkás csecsemőmérővel mérik (Harpenden, St. Albans, Anglia). Idősebb gyermekeknél az állásmagasságot egy helyben gyártott műszerrel kell meghatározni, amelyben egy fém mérőszalag van kihúzva a talplemez és a fejrúd közé, amelyhez folyadékszinttel van felszerelve a vízszintes helyzet biztosítása érdekében. Két egymást követő magasságmérés átlagát 0,1 cm pontossággal rögzítjük megfigyelt értékként. A méréseket az Országos Egészségügyi Statisztikai Központ adatai és a Z-pontszámmal értékelt tápláltsági állapot szerinti szabványokhoz hasonlítják. , A szórás mértékegységeinek medián ekvivalenseinek százalékát a Waterlow-féle séma szerint kell meghatározni és kategorizálni.

   Minden gyermeket az egyik nyomozó fizikális vizsgálatnak vet alá. A gyerekeket a véletlenszerű besorolás szerint a négy csoport egyikébe kell besorolni:

   • Anti Hp csoport
   • Fe csoport
   • Anti-Hp csoport + Fe csoport
   • Placebo csoport

   A vashiányos gyermekek körében tapasztalható vasterápiával szembeni rezisztencia általános prevalenciájának összehasonlítása érdekében az ötödik csoport a vashiányos vérszegénységben szenvedő, de H. pylori fertőzés nélküli gyermekekből áll. Ezt a csoportot vasterápiával kezelik.

   Anti-Hp terápia: 15 mg/ttkg/nap klaritromicin két részre osztva 10 napig plusz 20 mg omeprazol egyszeri adagban 14 napig. ,

   Vasterápia: A Dallman által javasolt 3 mg/kg/nap (vagy körülbelül 30 mg/nap) vas-adag vas(II)-szulfát formájában egyetlen adagban kerül beadásra reggel, étkezés előtt fél órával. A vaskezelést 90 napig adják.

   Placebo glükóz szirup

   1.3.1 Kiegészítés Az intervenciós szirupo(ka)t naponta egyetlen adagban, reggel éhgyomorra kell beadni (étkezés előtt fél órával). A placebo-csoportba tartozó gyerekek ugyanannyi glükózszirupot kapnak. Az összes terápiát azonos sötétbarna tartályokban tárolják, és egy egészségügyi dolgozó táplálja, aki nem ismeri a vizsgálat természetét és a palackban lévő tartalmat. A húsz négyórás táplálékfelvételt egy előre kódolt űrlapon rögzítik az étrend visszahívása.

   A gyermekeket a kiegészítés befejezése után három hónapig követik. A karbamid kilégzési tesztet a kiegészítés végén, valamint 1 és 3 hónap múlva meg kell ismételni. Vénás vért (500 µl) veszünk a szérum ferritin, transzferrin receptor és hemoglobin koncentráció meghatározásához a kiegészítés végén és 1 és 3 hónapos kezelés után. A placebo-csoportba tartozó gyermekek három hónapos, felügyelt vaspótlást kapnak a vizsgálati időszak végén.

   1.4 A minta méretének kiszámítása A minta méretét az (i) H. Pylori fertőzés prevalenciája, (ii) a vasterápiára adott válasz hiányának gyakorisága alapján számítják ki.

   A mintanagyság számítása a H. Pylori fertőzés prevalenciája alapján

   Figyelembe véve a H. Pylori fertőzés 50%-os és a vashiányos vérszegénység 70%-os prevalenciáját44, ebben a közösségben a csecsemők és gyermekek 50%-ánál H. Pylori-val összefüggő anaemia várható. Arra számítunk, hogy a H. Pylori-val összefüggő vashiányos vérszegénység prevalenciája 25%-kal csökken az antibiotikum plusz vasterápia után. Az ilyen nagyságrendű különbség kimutatásához 5%-os szinten és 80%-os teljesítmény mellett a minta méretét a következőképpen számítják ki:

   N = [P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Ahol P1 = H. Pylori eredetű anémia prevalenciája P2 = H. Pylori eredetű anémia prevalenciája terápia után

   =[50(50) +25(75)] * 8 / (25)2

   =56 minden csoportban

   Egy korábbi, ebben a közösségben végzett vizsgálat alapján körülbelül 15%-os lemorzsolódásra számítunk. Egy (Akramuzzaman SM, személyes kommunikáció) esetén a szükséges mintanagyság minden csoportban 65 gyermek, a teljes gyermekminta pedig 260 lesz.

   A számítás a vasterápiára nem reagálók gyakoriságán alapul

   Egy folyamatban lévő, Dinajpurban (Bangladesh északi körzetében) végzett, orális vaspótlási programmal végzett, vérszegény betegeken végzett vizsgálat azt sugallja, hogy a vaspótló csoport 70%-a nem reagál (S. Rahman, személyes kommunikáció). A javasolt vizsgálati populációban a H. Pylori fertőzés prevalenciája megközelítőleg 50%,35 és arra számítunk, hogy orális vaspótlás után a nem reagálók száma 40%-kal lesz kevesebb a H. pylori negatív csoportban, mint a H. pylori pozitív csoportban . Az ilyen nagyságrendű különbség kimutatásához 5%-os szinten és 80%-os teljesítmény mellett a minta méretét a következőképpen számítják ki:

   N = [P1(100-P1) +P2(100-P2)]*8/(P1-P2)2

   Ahol P1 = anémia prevalenciája vaspótlás után H. pylori-val fertőzött gyermekeknél P2 = anémia előfordulása vaspótlás után H. pylori-val nem fertőzött gyermekeknél

   • [(70) (30) + (42) (58)] * 8 / (35) 2 = 46 minden csoportban

   15%-os lemorzsolódás mellett a gyerekek száma 53 lesz minden csoportban, azaz a teljes minta 212 gyerek.

   Ehhez a vizsgálathoz a nagyobb mintát, azaz 260 gyermeket vesszük.

   1.5 Véletlenszerűsítés Egy megfelelően képzett személy, aki nem kapcsolódik a vizsgálathoz, elkészíti a véletlenszerű permutált blokkszámokat, amelyek három nagyságúak. Az anti-Hp terápiát, vasterápiát vagy placebót tartalmazó palackok megjelenésükben megegyeznek, és a véletlen besorolási táblázatnak megfelelő sorrendben vannak elrendezve, és sorozatszámmal látják el őket. A palackok sorozatszáma megegyezik a vizsgálatba bevont betegek sorozatszámával. Mivel a gyermekek egy csoportja egyszerre kapna anti-Hp terápiát és vasterápiát, minden gyermekcsoport számára két palack (A vagy B palack) lesz, hogy a vizsgálat kettős vak legyen. Az anti-Hp plus Iron terápiába tartozó gyermekek számára az egyik palackban anti-Hp terápia, illetve a másik vasterápia található. Azok a gyermekek, akik csak vasterápiában vagy anti-Hp terápiában részesülnek, az egyik palackban a gyógyszert, míg a másikban glükózszirupot kapnak. Mivel az anti-Hp terápia időtartama 14 nap, ezért az ebbe a csoportba tartozó gyermekeket a hónap hátralévő részében glükózsziruppal látják el, hogy a kezelés időtartama a négy csoport között egyenlő legyen.

   1.6 Laboratóriumi vizsgálat A Hb koncentrációt ciánmethemoglobin módszerrel, a szérum ferritint radioimmunometrikus assay-vel határozzuk meg. A szérum transzferrin receptort enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA) mérik. A székletet guajaak reakcióval vizsgálják rejtett vér jelenlétére (Occultotest, Ames Co., Elkhart, Inc.,. USA). A szérum pepszinogén és gasztrin mérése radioimmunoassay segítségével történik.

   1.7 Tanulmányból való kilépés - A tantárgy nem megfelelősége, vagy azért, mert a vizsgálat befejezése előtt elhagyja a tanulmányi területet, vagy

   - mert a gyermek nem tervezett kezelést igényel súlyos átmeneti fertőzés miatt.

   Elvonás kezelése az elemzés során A vizsgálat elemzésébe az összes randomizált gyermek eredményeit bele kell foglalni. A kivont betegek adatai a visszavonás időpontjáig szerepelnek. Kiegészítő elemzést is végeznek, amelyben az ilyen betegeket kizárják

   1.8 Eredményváltozók

   Jelentősebb

   - H. Pylori fertőzés előfordulása a terápia után.

   - A szérum hemoglobin, a szérum ferritin koncentráció emelkedése vagy a szérum transzferrin receptorok szintjének csökkenése.

   - Az elsődlegesen meghatározott IDA-s gyermekek száma minden csoportban a beavatkozás előtt és után

   Kisebb

   - Az antropometriai indexek változása

2. Vasabszorpciós vizsgálat A vasabszorpciós vizsgálatba további húsz olyan gyermeket választanak ki, akiknek pozitív karbamid-légzési tesztje és vashiányos vérszegénysége van. A vizsgálat célját és a vasfelszívódási vizsgálattal kapcsolatos összes eljárást elmagyarázzák a szülőknek, és be kell szerezni a hozzájárulásukat. A vasfelszívódási vizsgálat megkezdése előtt minden gyermek 8 mg Fe/l-es tejsavó-módosított tehéntej-tápszert kap (Nidina 1; Nestle, Párizs, Franciaország) legalább három hétig. 21 napos tápszeres táplálás után bekerülnek a Klinikai Kutatási és Szolgáltató Központ Metabolikus Osztályába.

A jelzett vas (rádióstabil) eritrocita beépülését sikeresen alkalmazták a bélből történő felszívódás vizsgálatára. , Az eritrocita beépülési módszer magában foglalja a vas izotópjának orális beadását, majd a vas izotóp arányának mérését az eritrocitákban a beadást követő kiválasztott időpontban. Követni fogjuk a gyermekek vasfelszívódásának mérésére szolgáló technikát egy kettős stabil izotópos technikával, amelyet Kastenmayer és munkatársai nemrégiben fejlesztettek ki.

2.1 A vasfelszívódás vizsgálatának módszere

Jelzett vas-szulfát oldatok készítése A dúsított 57Fe és 58Fe-vas-oxid (Fe2O3) az Oak ridge National Laboratorytól (Oak Ridge, TN, USA) kerül bevásárlásra. Az 58Fe készítményben lévő vas izotóp-összetétele (az Oak ridge National Laboratories által biztosított) (mg): (tömeg%) 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,6)57 Fe (3,47) és 58 Fe (60,28). A vas izotóp-összetétele az 57Fe-ben (tömeg%): 54 Fe (0,65), 56 Fe (35,60), 57Fe (3,47) és 58Fe (60,28).

A vas-oxidot tömény H2SO4-ben oldják fel úgy, hogy szén-monoxidot buborékoltatnak át az oldaton hő felett körülbelül négy órán keresztül. Az oldatot ezután tisztított nitrogén átengedésével csökkentjük néhány percig. Ezután a hangerőt csökkentett vízzel kell beállítani. A kapott 57 FeSO4 és 58 FeSO4 oldat két ml-es aliquot részét átlátszatlan ampullákba töltjük. Minden ampullát nitrogénnel át kell öblíteni és le kell zárni. Az ampullák 200 µg/ml összes vasat (vas-szulfát formájában) és 150 µg/ml 57Fe-t vagy 700 µg/ml összes vasat (vas-szulfát formájában) és 420 µg/ml 58Fe-t tartalmaznak. Egyedi ampullából származó alikvot részt 57Fe és 58Fe tüskés munkaoldatok készítésére használnak fel.

Parenterális 57 Fe oldatok stabilitása és biztonságossága I.v. előtt. a csecsemőknek történő beadáskor az 57FeSO4-oldatot pirogenitás, sterilitás és stabilitás szempontjából teszteljük. Limulus amoebocyte lizátum (LAL) tesztelése és ismételt tenyésztés a baktériumok és gombák növekedésére annak igazolására, hogy az 57FeSO4 oldatok pirogénmentesek és sterilek a vizsgálatban használt koncentrációkban. A parenterális oldatok tápanyagtartalmát korábban leírtuk. Az 57FeSO4-tápanyag-oldat teljes vastartalmát atomabszorpciós spektrometriával kell meghatározni szűrés előtt és után (0,22 µ-os szűrők), valamint idővel szobahőmérsékleten.

2.2 A vasabszorpciós vizsgálat vizsgálati terve A vizsgálatba bevont csecsemők parenterális és enterális táplálék kombinációját kapják. Az 57FeSO4 oldatot parenterálisan, míg az 58FeSO4-et enterálisan adják be. Az 57Fe és 58Fe eritrociták beépülését ezután a kezdeti infúziók után két héttel vett vérmintákból mérik. Az intravénásan beadott dózisnak a keringő eritrocitákban jelenlévő százalékát használjuk referenciaként a keringő eritrocitákban jelenlévő abszorbeált vas százalékos arányához (az orálisan beadott dózisból). A vörösvértest 58Fe és 57Fe beépülésének „korrigált” százalékát (58 Fe inc-cor/57Fe inc-cor) az alábbiakban leírtak szerint matematikailag számítjuk ki.

A gyermekek iv. beadása előtt 0,7-0,8 Az 57FeSO4-oldat (0,2 mg/ml) ml-ét steril technikák alkalmazásával a parenterális tápláláshoz használt, 30 ml tápoldatot tartalmazó burytrolhoz adjuk. A korábban biztonságosan használt vas-tápanyag keveréket egy infúziós pumpa segítségével lassan, 12-24 órán keresztül a gyermekek perifériás vénájába infundáljuk.

Az 57FeSO4 oldat parenterális infúziójának megkezdése után nem sokkal az enterális 58FeSO4-et adják a gyerekeknek. Ez idő alatt az 57FeSO4 parenterális infúzióját folytatják. Miután meggyőződött arról, hogy a nasogastric etetőszonda megfelelően helyezkedik el a gyomorban, a szondát felszívják a gyomortartalom ellenőrzésére. Ha a gyomor üres, 1,5 ml 58 FeSO4-et közvetlenül egy fecskendőn keresztül juttatnak be az etetőcsőbe. Ezután a csövet 0,5 ml steril vízzel átöblítjük. A parenterális 57FeSO4 dózisa 0,15 mg/kg (57Fe-vel dúsított vas-szulfát oldat), ami 0,12 mg/kg 57Fe-t biztosítana. Az enterális adagolása 1,5 mg/kg (58Fe-val dúsított vas-szulfát oldat), amely 0,8 mg/kg 58Fe-t biztosít. A gyermekeket a Helicobacter pylori fertőzés (klaritromicin és omeprazol) 10 napos terápiája mellett bocsátják el.

Egy hónapos terápia után az anyákat felkérik, hogy hozzák gyermekeiket a CRSC-be. Ismételt UBT- és vasabszorpciós vizsgálatot kell végezni.

2.3 Vérmintavétel Vérmintát vesznek a stabil izotópok (alapvonal) beadása előtt és mindkét alkalommal 14 nappal később. A vérminta mérete mintánként 200-300 µl lesz.

2.4 A vörösvértestek vasbeépülésének kiszámítása Az eritrocitákba beadott 58Fe és 57Fe (mg) mennyiségét a jelzett vas adagjának beadása után meghatározott „t” időpontban a Zlotkin és munkatársai által 1995-ben használthoz hasonló módon számítjuk ki.

58 Fe inc. =Rt58/54 -Ro58/54 xFe kör x 0,00322 Ro58/54

57 Feinc = R157/54-Ro57/54 x Fe kör x 0,0218 Ro57/54

Ebben az egyenletben az 58 Feinc és az 57 Feinc mg-ban lesz kifejezve. Az R158/54, R157/54 és R057/54 az 58Fe/54Fe és 57Fe/54Fe izotóparányai, amelyeket emésztett vérmintákon határoznak meg az adagolás utáni "t" időpontban és az alapvonalon (58Fe előtt). és 57Fe előtti dózisok) rendre; Fe circ a keringő vas mennyisége. Fe circ "t" időpontban; A 0,0032 és 0,0218 az 58 Fe és az 57 Fe természetes mennyisége (tömeghányad). A keringő összes vas mennyisége, Fe cirkó, mg-ban kifejezve, a következőképpen lesz megbecsülve

Fe cirk. =BV x Hb x 3,47

ahol BV a vér térfogata literben, feltételezve, hogy 0,085 l/testtömeg-kg; Hb a hemoglobin koncentrációja g/l-ben; 3,47 a vas koncentrációja Hb-ben (mg/g).

A beadott 58Fe vagy 57Fe vörösvértestekbe beépült mennyisége, % Fe inc, az 58Fe vagy 57Fe beadott dózisának százalékában lesz kifejezve. Feinc.

• 58 Fe inc = 58 Fe inc x 100 vagy Fe inc
• 57 Fe ink. = 57 Fe ink. x 100 57 Fe inc

Az eritrociták stabil izotóparányának elemzéséhez szükséges korrigált vörösvértest-százalékot az iv. beadott 57 Fe vörösvértest-beépülésének százalékos arányával számítjuk ki.

• 58Fe inc-cor = % 58Fe inc-cor = % 58Fe inc-cor.
• 57 Feinc

Tömegspektrometriás elemzés A vérminták tömegspektrometriás analízishez való előkészítését és a dúsított standardok elkészítését a Kastenmayer és munkatársai által leírt eljárások szerint kell követni. A heparinizált teljes vérminták 1:3 (vér:sav) (térfogat/térf.) arányú koncentrált HNO3-mal nedvesen hamvasodnak főzőlapon, alacsony lángon 20-30 percig. Az emésztett oldatokat ionmentesített vízzel úgy állítjuk be, hogy a vaskoncentráció 10 µg/ml legyen. Az izotóp-tüskés standardokat a műszer kalibrálásához ugyanúgy kell elkészíteni, mint az ismeretlen minták esetében. Az 58Fe/54Fe és az 57Fe/54Fe izotóparányát a vérben az izotópok egyidejű enterális (58Fe) és parenterális (57Fe) beadása előtt és után számítógép-vezérelt termikus ionizációs tömegspektrométerrel határozzák meg, Elan Model 250 ICP/MS rendszert használva, (SCIEX, Inc., Thornhill, Ontario, Kanada), az izotóp arány módban működött, amit Zlotkin et al. a Kanadai Tronoto Egyetem Gyermekgyógyászati ​​és Táplálkozástudományi Tanszékén.

Intubációs teszt A korábban leírt standard intubációs tesztet14 a gyermekek ezen alcsoportjában a vasabszorpciós vizsgálat befejezése után kell elvégezni. Röviden, mivel a lágy gyomorszonda (18G) a gyomor leginkább függő részébe kerül. A bal oldali fekvő helyzetben lévő gyermekektől gyomorsavmintát veszünk kézi szívással. A szonda helyzetét auszkultáció, gyomornedv leszívása és a szondába fecskendezett víz majdnem teljes visszanyerése igazolja. A gyomornedv-mintákat az intubálás utáni első 10 percben el kell dobni. Ezt követően a mintákat gyűjtik és 15 perces aliquot részekben 90 percig tárolják. 90 perces gyűjtés után (alapminta) a pentagasztrint (peptavlon, ICI) szubkután injektálják 0,6 ug/kg dózisban. A 60 perces pentagasztrin stimulációt követő mintát "stimulált mintának" nevezzük. A gyomorszekréció térfogatát a 15 perces gyűjtések mindegyikében rögzítjük, és milliliter per óra egységben fejezzük ki. A savkoncentrációt mindegyikben 1 ml gyomornedv 0,01 N nátrium-hidroxid-oldattal pH 7,4-re történő titrálásával mérjük, automata titrátor (Metrohm, Herisau, Svájc) segítségével. A teljes savtermelést minden egyes fél literre úgy számítjuk ki, hogy megszorozzuk a gyomornedv térfogatát és a savkoncentrációt. A bazális (BAO) és a stimulált savkibocsátást (SAO) az alapvonal méréshez 2, illetve a pentagasztrin beadása után gyűjtött 4 minta alapján számítottuk ki, és mMol/h-ban fejeztük ki.