Toistuvan aftisen stomatiittipotilaiden syljen ja ulosteen mikrobiomi ennen ja jälkeen probioottihoidon

Tutkimuksen tarkoitus Tämän tutkimuksen tarkoituksena on karakterisoida syljen ja ulosteen mikrobiomia potilailla, joilla on uusiutuva aftinen stomatiitti (RAS) ja verrata löydöksiä vastaavan terveen kontrolliryhmän tuloksiin. Tarkoituksena on myös tutkia probioottihoidon vaikutusta koko syljen ja ulosteen mikrobiomiin sekä RAS-epidemioiden vakavuutta ja määrää. Lisäksi nykyisistä aftisista haavaumista otetaan sively ennen probioottihoitoa ja sen jälkeen paikallisen mikrobiston karakterisoimiseksi.

Oletetaan, että RAS-potilaiden koko syljen ja ulosteiden mikrobiomi eroaa koko syljen ja ulosteiden mikrobiomista ikä- ja sukupuoliyhteiskuntaa sairastavilla verrokkihenkilöillä.

Lisäksi oletetaan, että probioottihoidolla on myönteinen vaikutus limakalvokipuun ja se vähentää RAS:n vakavuutta ja taudinpurkausten esiintymistiheyttä. Lisäksi oletetaan, että probioottihoidolla on vaikutusta RAS-potilaiden koko syljen ja ulosteiden mikrobiomiin.

Tausta Recurrent aphthous stomatitis (RAS) on yksi yleisimmistä suun limakalvoon vaikuttavista haavaisista sairauksista. Esiintyvyys vaihtelee 5-25%. Etiologia on edelleen tuntematon, mutta useita paikallisia, systeemisiä, immunologisia, geneettisiä, allergisia, ravitsemus- ja mikrobitekijöitä on ehdotettu aiheuttajiksi.

Kliinisesti RAS:lle on tyypillistä yhden tai useamman pyöristyneen, matalan, kivuliaan suuhaavan toistuva kohtaus muutaman kuukauden tai päivän välein.

RAS voidaan luokitella kolmeen eri tyyppiin: minor, major ja herpetiform. Vähäinen RAS on noin 80 % tapauksista. Tälle tyypille on tunnusomaista aftiset haavaumat, joiden halkaisija on noin 5 mm ja jotka sijaitsevat usein posken ja häpyen limakalvolla. Haavat paranevat 7-10 päivässä ilman arpia. Vakavia RAS-oireita esiintyy 10-15 %:lla potilaista. Haavaumat ovat usein kraterimaisia, halkaisijaltaan 10-30 mm, ja ne esiintyvät tyypillisesti häpyhuulen limakalvolla, pehmeällä kitalaessa, nielurisa-alueella ja suunielun alueella. Paranemisaika voi vaihdella 2 - 6 viikkoa ja jättää cicatrixin. Nämä haavaumat ovat erittäin tuskallisia ja ruoan saanti voi olla vaarassa. Herpetiform-tyypin esiintyvyys on 5-10%.

Tämä tyyppi sijaitsee usein suun pohjassa ja kielen vatsaosassa, ja sille on ominaista useiden pienten haavaumien kasautuminen.

Etiologia on edelleen tuntematon, mutta useiden paikallisten ja systeemisten tekijöiden oletetaan lisäävän alttiutta, mukaan lukien limakalvovammat, stressitapahtumat, hormonaaliset muutokset, tupakoinnin lopettaminen, allergia erilaisille ruoka-aineille sekä vitamiinien ja/tai kivennäisaineiden puutos. Se on myös geneettinen alttius, sillä mahdollisuus saada RAS on 90 %, jos molemmilla vanhemmilla on RAS ja 20 %, jos toisella vanhemmista on RAS.

Mikrobitekijät Useiden mikro-organismien on ehdotettu osallistuvan RAS:n etiopatogeneesiin. Näitä ovat oraaliset streptokokit, erityisesti Streptococcus mitis, mutta oraalisten streptokokkien ja suun limakalvoantigeenien välinen ristireaktio on epäspesifinen ja sitä pidetään kliinisesti merkityksettömänä. Helicobacter pylori, joka liittyy gastriittiin ja pohjukaissuolihaavaan, voidaan nähdä myös plakissa, ja sen vuoksi sen oletetaan myös osallistuvan RAS:n patogeneesiin, mutta anti-H. pylorin seropositiivisuuden ei ole havaittu lisääntyneen RAS-potilailla. Erilaisia ​​viruksia on löydetty biopsioista aftisista haavaumista, kuten sytomegalovirus ja Epstein-Barr-virus. Herpes simplexin, varicella zosterin ja adenoviruksen on myös oletettu osallistuvan etiopatogeneesiin. Syy-yhteyttä virusinfektion ja RAS:n välillä ei kuitenkaan ole voitu osoittaa, ja virus-DNA voi olla läsnä sekundaarisen infektion vuoksi.

Uudet tekniikat parantavat kykyämme tehdä syvällisempiä analyyseja RAS-potilaiden mikrobiotosta. Tämän tutkimusprotokollan parissa työskennellessä on julkaistu yksi RAS-potilaiden mikrobiomia koskeva tutkimus, joka osoittaa Bacteroides-lajien lisääntyneen osuuden RAS-potilaiden suun limakalvossa terveisiin verrokkeihin verrattuna. Siten, kuten aiemmat tutkimukset ovat myös ehdottaneet, suun mikrobiotalla näyttää olevan roolia RAS:n kehittymisessä sekä RAS:n jatkumisessa.

Tässä tutkimuksessa karakterisoidaan RAS-potilaiden (aktiivisten leesioiden) kokonaissyljen, ulosteiden ja aftisten haavaumien mikrobiomia ja analysoidaan kuinka se eroaa terveiden koehenkilöiden mikrobiomista. Tämä luonnehdinta voi olla olennainen RAS:n patogeneesin ymmärtämiselle ja edistää uusien strategioiden kehittämistä näiden potilaiden hoitamiseksi.

Immunopatologiset tekijät Useat tutkimukset osoittavat, että RAS:n patogeneesi sisältää useita soluvälitteisiä mekanismeja, mutta tarkkaa immunopatogeneesiä ei ole vielä selvitetty. Fagosyyttiset ja sytotoksiset T-lymfosyytit voivat osallistua suun epiteelin tuhoutumiseen, ja näiden immuunisolujen läsnäoloa säätelee ja ylläpitää sytokiinien paikallinen vapautuminen. Potilailla, joilla on RAS-epidemia, veressä on enemmän gamma-delta-T-soluja verrattuna terveisiin kontrollihenkilöihin ja potilaisiin, joilla ei ole aktiivista RAS-soluja. Lisäksi potilailla, joilla on RAS, on lisääntynyt tuumorinekroositekijä (TNF)-alfa verrattuna potilaisiin, joilla ei ole RAS, mutta myös muilla proinflammatorisilla sytokiineilla, kuten interleukiini-2 ja -6, on todennäköisesti osansa RAS:n patogeneesissä. . Lopuksi, aftisen kaltaisten haavaumien on havaittu liittyvän useisiin tulehduksellisiin suolistosairauksiin, kuten haavaiseen paksusuolitulehdukseen ja Crohnin tautiin ja keliakiaan, sekä sykliseen neutropeniaan, HIV-infektioon ja immunoglobuliini A:n (IgA) puutteeseen. Vastaavasti RAS:ssa voi olla mukana immuunikomponentti, joka myötävaikuttaa muutokseen suolen mikrobiotassa tai päinvastoin. Tässä tutkimuksessa karakterisoidaan RAS-potilaiden syljen ja ulosteiden mikrobiota ennen probioottihoitoa, sen aikana ja sen jälkeen.

Tutkimuksen suunnittelu ja menetelmät Hanke koostuu poikkileikkaustutkimuksesta, jossa tutkitaan mikrobiomia koko syljen ja ulosteiden 20 RAS-potilaalta ja 20 terveeltä kontrollihenkilöltä. Projekti sisältää myös kaksoissokkoutetun satunnaistetun lumekontrolloidun intervention probiooteilla (Lactobacillus reuteria sisältävät imeskelytabletit 2 tablettia päivässä 3 kuukauden ajan) tai lumelääkettä. RAS-potilaiden syljen ja ulosteen mikrobiomia verrataan ennen ja jälkeen hoidon.

RAS-potilaat rekrytoidaan Kööpenhaminan yliopiston terveys- ja lääketieteellisen tiedekunnan suun lääketieteen klinikalle. 20 tervettä kontrollia rekrytoidaan www.forsoegsperson.dk:n kautta

Menetelmiin kuuluvat:

• Haastattelu re. RAS:n puhkeaminen, suun oireet (arvioitu visuaalisella analogia-asteikolla), komorbiditeetti, lääkkeiden käyttö, tupakointi- ja alkoholitottumukset, suuhygieniatavat.
• Kokoelma pureskeltavaa parafiinistimuloitua kokonaista sylkeä.
• Suututkimus, mukaan lukien aftisten haavaumien arviointi (Ulcer Severity Score), hampaiden ja parodontaalisen tilan rekisteröinti.
• Levy yhdestä aftisesta haavasta.
• Tutkittavat ottavat itse ulostenäytteen kotoaan perusteellisen ohjeistuksen jälkeen, ja ne käsitellään Statens Serum Institutin ohjeiden mukaisesti. Näytteestä kerätään 250 mg ja säilytetään pakastimessa -80°C:ssa jatkokäsittelyyn ja analysointiin asti.
• Verikoe, joka sisältää hemoglobiinin (HgB), C-reaktiivisen proteiinin (CRP), raudan, kobalamiinin, folaatin, transferriinin, ferritiinin ja D-vitamiinitasot.

Bakteeri-DNA:n uuttaminen sylki-, uloste- ja sivelynäytteistä (perustilanteessa, 7 päivän ja 90 päivän interventio probiootilla tai lumelääkeaineella, vastaavasti) suoritetaan Kööpenhaminan yliopiston hammaslääketieteen laitoksen laboratoriossa käyttämällä aiemmin vahvistettuja Human Microbiome Projectin ohjeiden mukaan.

Pekingin genomiikkainstituutti tekee metagenomiset analyysit sylki-, sively- ja ulostenäytteistä uutetulle bakteeri-DNA:lle. Illumina 16S rDNA-sekvensointi mahdollistaa bakteerien taksonomian ja fylogeneettisen monimuotoisuuden määrittämisen.