Het speeksel- en fecale microbioom van recidiverende afteuze stomatitispatiënten voor en na behandeling met probiotica

Doel van het onderzoek Het doel van dit onderzoek is het karakteriseren van het speeksel- en fecale microbioom bij patiënten met recidiverende afteuze stomatitis (RAS) en het vergelijken van de bevindingen met die van een gezonde controlegroep. Een ander doel is om het effect van behandeling met probiotica op het microbioom in speeksel en ontlasting te onderzoeken, evenals de ernst en het aantal RAS-uitbraken. Bovendien zal voor en na behandeling met probiotica een uitstrijkje worden genomen van aanwezige aften om de lokale microbiota te karakteriseren.

Aangenomen wordt dat het microbioom in volledig speeksel en ontlasting van patiënten met RAS (kleine of grote aften) verschilt van het microbioom in volledig speeksel en ontlasting van leeftijds- en geslachtsafhankelijke controlepersonen.

Er wordt ook verondersteld dat probiotische behandeling een gunstig effect heeft op de slijmvliespijn en de ernst van RAS en de frequentie van uitbraken vermindert. Verder wordt aangenomen dat behandeling met probiotica effect heeft op het microbioom in speeksel en ontlasting van patiënten met RAS.

Achtergrond Terugkerende afteuze stomatitis (RAS) is een van de meest voorkomende ulceratieve aandoeningen die het mondslijmvlies aantasten. De prevalentie varieert van 5-25%. De etiologie blijft onbekend, maar verschillende lokale, systemische, immunologische, genetische, allergische, nutritionele en microbiële factoren zijn voorgesteld als veroorzakers.

Klinisch wordt RAS gekenmerkt door terugkerende periodes van een of meer afgeronde, ondiepe, pijnlijke zweren in de mond met tussenpozen van enkele maanden of dagen.

RAS kan worden ingedeeld in drie verschillende typen: minor, major en herpetiform. Minor RAS omvat ongeveer 80% van de gevallen. Dit type wordt gekenmerkt door aften met een diameter van ongeveer 5 mm, vaak gelokaliseerd in de buccale en labiale mucosa. De zweren genezen binnen 7-10 dagen zonder littekenvorming. Ernstige RAS komt voor bij 10-15% van de patiënten. De zweren zijn vaak kratervormig met een diameter van 10-30 mm en zijn meestal aanwezig op het labiale slijmvlies, het zachte gehemelte, het amandelgebied en de orofarynx. De genezingstijd kan variëren van 2 tot 6 weken en cicatrix verlaten. Deze zweren zijn erg pijnlijk en de voedselinname kan in het gedrang komen. De prevalentie van het herpetiforme type is 5-10%.

Dit type is vaak gelokaliseerd in de mondbodem en het ventrale deel van de tong, en wordt gekenmerkt door de opeenhoping van meerdere kleine zweren.

De etiologie blijft onbekend, maar er wordt aangenomen dat een aantal lokale en systemische factoren de aanleg verhogen, waaronder mucosaal trauma, stressvolle gebeurtenissen, hormonale veranderingen, stoppen met roken, allergie voor verschillende voedingsmiddelen en vitamine- en/of mineraaltekort. Het is ook een genetische aanleg, aangezien de mogelijkheid om RAS te ontwikkelen 90% is als beide ouders RAS hebben en 20% als een van de ouders RAS heeft.

Microbiële factoren Er is gesuggereerd dat een aantal micro-organismen betrokken zijn bij de etiopathogenese van RAS. Deze omvatten orale streptokokken, vooral Streptococcus mitis, maar de kruisreactie tussen orale streptokokken en orale mucosale antigenen is niet specifiek en wordt als klinisch onbeduidend beschouwd. Helicobacter pylori, dat geassocieerd is met gastritis en ulcera van de twaalfvingerige darm, kan ook worden gezien in tandplak en wordt daarom ook verondersteld betrokken te zijn bij de pathogenese van RAS, maar de anti-H. pylori-seropositiviteit is niet verhoogd gevonden bij patiënten met RAS. Er zijn verschillende vira gevonden in biopsieën van aften zoals het cytomegalovirus en het Epstein-Barr-virus. Herpes simplex, varicella zoster en adenovirus zijn ook verondersteld een rol te spelen in de etiopathogenese. Het is echter niet mogelijk geweest om een ​​causaal verband aan te tonen tussen virusinfectie en RAS, en viraal DNA kan aanwezig zijn als gevolg van een secundaire infectie.

Nieuwe technologieën verbeteren ons vermogen om meer diepgaande analyses te maken van de microbiota bij patiënten met RAS. Tijdens het werken aan dit studieprotocol is er één studie over het microbioom bij patiënten met RAS gepubliceerd die een verhoogd aandeel Bacteroides-soorten in het mondslijmvlies van patiënten met RAS aantoont in vergelijking met gezonde controles. Dus, zoals eerdere studies ook suggereren, lijkt de orale microbiota een rol te spelen bij de ontwikkeling van RAS en bij de voortzetting van RAS.

In deze studie zullen we het microbioom karakteriseren in volledig speeksel, feces en de aften van patiënten met RAS (met actieve laesies) en analyseren hoe het verschilt van het microbioom van gezonde proefpersonen. Deze karakterisering kan essentieel zijn voor ons begrip van de pathogenese van RAS en kan bijdragen aan de ontwikkeling van nieuwe strategieën voor het behandelen van deze patiënten.

Immunopathologische factoren Verschillende onderzoeken geven aan dat de pathogenese van RAS een aantal celgemedieerde mechanismen omvat, maar de exacte immunopathogenese is nog steeds niet opgehelderd. Fagocytische en cytotoxische T-lymfocyten kunnen een rol spelen bij de vernietiging van het orale epitheel en de aanwezigheid van deze immuuncellen wordt gereguleerd en in stand gehouden door lokale afgifte van cytokinen. Patiënten met uitbraak van RAS hebben een verhoogde aanwezigheid van gamma-delta T-cellen in het bloed in vergelijking met gezonde controlepersonen en patiënten zonder actieve RAS. Bovendien hebben patiënten met RAS een verhoogde aanwezigheid van Tumor Necrosis Factor (TNF)-alfa in vergelijking met degenen die geen RAS hebben, maar ook andere pro-inflammatoire cytokines zoals interleukine-2 en -6 spelen waarschijnlijk een rol bij de pathogenese van RAS. . Ten slotte zijn er aftenachtige zweren gevonden die verband houden met een aantal inflammatoire darmaandoeningen zoals colitis ulcerosa en de ziekte van Crohn en coeliakie, evenals cyclische neutropenie, HIV-infectie en immunoglobuline A (IgA)-deficiëntie. Dienovereenkomstig kan een immuuncomponent betrokken zijn bij RAS die bijdraagt ​​aan een verandering in de darmmicrobiota of vice versa. In deze studie karakteriseren we de microbiota in speeksel en feces van patiënten met RAS voor, tijdens en na behandeling met probiotica.

Het onderzoeksontwerp en de methoden Het project omvat een cross-sectionele studie die het microbioom onderzoekt in volledig speeksel en ontlasting van 20 patiënten met RAS en 20 gezonde controlepersonen. Het project omvat ook een dubbelblinde, gerandomiseerde, placebogecontroleerde interventie met probiotica (Lactobacillus reuteri-bevattende zuigtabletten 2 tabletten per dag gedurende 3 maanden) of placebo. Het speeksel- en fecale microbioom bij RAS-patiënten wordt vergeleken voor en na de behandeling.

De patiënten met RAS worden gerekruteerd onder patiënten die zijn doorverwezen naar de Oral Medicine Clinic, Faculteit Gezondheid en Medische Wetenschappen, Universiteit van Kopenhagen. De 20 gezonde controles worden geworven via www.forsoegsperson.dk

Methoden zijn onder meer:

• Interview opnieuw. begin van RAS, orale symptomen (beoordeeld door middel van een visueel analoge schaal), comorbiditeit, medicatie-inname, rook- en alcoholgewoonten, gewoonten op het gebied van mondhygiëne.
• Verzameling van door paraffine gestimuleerd kauwspeeksel.
• Mondeling onderzoek inclusief evaluatie van aften (Ulcer Severity Score), registratie van tandheelkundige status en parodontale status.
• Een uitstrijkje van een van de aften.
• Een ontlastingsmonster zal door de proefpersonen zelf thuis worden verzameld na grondige instructie en worden behandeld volgens de handleiding van het Statens Serum Institut. Van het monster wordt 250 mg verzameld en bewaard in een vriezer bij -80°C tot verdere verwerking en analyse.
• Een bloedtest inclusief hemoglobine (HgB), C-reactief proteïne (CRP), ijzer, cobalamine, foliumzuur, transferrine, ferritine en vitamine D-spiegels.

Extractie van bacterieel DNA uit speeksel-, feces- en uitstrijkmonsters (respectievelijk bij baseline, 7 dagen en 90 dagen interventie met probiotica of placebo) zal worden uitgevoerd in het laboratorium van de afdeling Tandheelkunde, Universiteit van Kopenhagen, met behulp van eerder vastgestelde procedures gebaseerd op instructies van het Human Microbiome Project.

Metagenomische analyses op geëxtraheerd bacterieel DNA uit speeksel-, uitstrijk- en ontlastingsmonsters worden gemaakt door het Beijing Genomics Institute. Illumina 16S rDNA-sequencing maakt bepaling van bacteriële taxonomie en fylogenetische diversiteit mogelijk.