재발성 아프타성 구내염 환자의 프로바이오틱스 치료 전후의 타액 및 분변 미생물

연구 목적 이 연구의 목적은 재발성 아프타성 구내염(RAS) 환자의 타액 및 분변 마이크로바이옴을 특성화하고 그 결과를 일치하는 건강한 대조군의 결과와 비교하는 것입니다. 또 다른 목적은 전체 타액 및 대변의 미생물 군집에 대한 프로바이오틱스 치료의 효과와 RAS 발생의 심각도 및 횟수를 조사하는 것입니다. 또한, 국소 미생물군을 특성화하기 위해 프로바이오틱스로 치료하기 전후에 현재 아프타성 궤양으로부터 도말 표본을 채취할 것입니다.

RAS(소형 또는 주요형 아프타성 궤양) 환자의 전체 타액 및 대변에 있는 미생물은 연령 및 성별이 일치하는 대조군의 전체 타액 및 대변에 있는 미생물과 다르다고 가정합니다.

또한 프로바이오틱 치료는 점막 통증에 유익한 효과가 있고 RAS의 중증도와 발생 빈도를 감소시킨다는 가설도 있습니다. 또한 프로바이오틱스 치료는 RAS 환자의 전체 타액과 대변에 있는 미생물 군집에 영향을 미치는 것으로 추정됩니다.

배경 재발성 아프타성 구내염(RAS)은 구강 점막에 영향을 미치는 가장 흔한 궤양성 질환 중 하나입니다. 유병률은 5-25%로 다양합니다. 병인학은 알려지지 않았지만 여러 국소적, 전신적, 면역학적, 유전적, 알레르기적, 영양적, 미생물적 요인이 원인 물질로 제안되었습니다.

임상적으로 RAS는 수개월 또는 수일 간격으로 하나 또는 여러 개의 둥글고 얕고 통증이 있는 구강 궤양이 재발하는 것이 특징입니다.

RAS는 마이너, 메이저 및 헤르페티폼의 세 가지 유형으로 분류할 수 있습니다. 경미한 RAS는 사례의 약 80%를 차지합니다. 이 유형은 직경 약 5mm의 아프타성 궤양이 특징이며 종종 협측 및 순측 점막에 국한됩니다. 궤양은 흉터 없이 7-10일 이내에 치유됩니다. 주요 RAS는 환자의 10-15%에서 나타납니다. 궤양은 종종 직경 10~30mm의 분화구형이며 일반적으로 순측 점막, 연구개, 편도선 영역 및 구인두에 나타납니다. 치유 시간은 2주에서 6주까지 다양하며 반흔을 남길 수 있습니다. 이 궤양은 매우 고통스럽고 음식 섭취가 손상될 수 있습니다. 헤르페티폼 유형의 유병률은 5-10%입니다.

이 유형은 종종 입 바닥과 혀의 복부에 국한되며 여러 개의 작은 궤양이 모여 있는 것이 특징입니다.

병인학은 알려지지 않았지만, 점막 외상, 스트레스성 사건, 호르몬 변화, 금연, 다양한 식품 물질에 대한 알레르기, 비타민 및/또는 미네랄 결핍을 포함하여 많은 국소 및 전신 요인이 소인을 증가시키는 것으로 추정됩니다. RAS 발병 가능성은 부모가 모두 RAS인 경우 90%, 부모 중 한 사람이 RAS인 경우 20%로 유전적 소인이기도 합니다.

미생물 인자 다수의 미생물이 RAS의 발병기전과 관련된 것으로 제안되었다. 여기에는 구강 연쇄상구균, 특히 Streptococcus mitis가 포함되지만 구강 연쇄상구균과 구강 점막 항원 사이의 교차 반응은 비특이적이며 임상적으로 중요하지 않은 것으로 간주됩니다. 위염 및 십이지장 궤양과 관련된 Helicobacter pylori도 치석에서 볼 수 있으므로 RAS의 병인에도 관여하는 것으로 제시되지만, 항-H. pylori 혈청양성은 RAS 환자에서 증가된 것으로 밝혀지지 않았습니다. 사이토메갈로바이러스 및 엡스타인-바 바이러스와 같은 아프타성 궤양의 생검에서 다양한 바이러스가 발견되었습니다. 단순 포진, 수두 대상 포진 및 아데노 바이러스도 병인 발생에 역할을 하는 것으로 가정되었습니다. 그러나 아직까지 바이러스 감염과 RAS와의 인과관계를 밝히는 것은 불가능했으며, 2차 감염으로 인해 바이러스 DNA가 존재할 가능성도 있다.

새로운 기술은 RAS 환자의 미생물군을 보다 심층적으로 분석할 수 있는 능력을 향상시킵니다. 이 연구 프로토콜에서 작업하는 동안 RAS 환자의 미생물에 대한 한 연구가 건강한 대조군에 비해 RAS 환자의 구강 점막에서 Bacteroides 종의 증가된 비율을 보여주는 것으로 발표되었습니다. 따라서, 이전 연구에서도 제안한 바와 같이 구강 미생물총은 RAS의 지속뿐만 아니라 RAS의 발달에 역할을 하는 것으로 보입니다.

이 연구에서 우리는 활성 병변이 있는 RAS 환자의 전체 타액, 대변 및 아프타성 궤양에 있는 마이크로바이옴을 특성화하고 이것이 건강한 피험자의 마이크로바이옴과 어떻게 다른지 분석할 것입니다. 이 특성화는 RAS의 병인을 이해하는 데 필수적일 수 있으며 이러한 환자를 관리하기 위한 새로운 전략 개발에 기여할 수 있습니다.

면역 병리학적 요인 여러 연구에서 RAS의 발병 기전에는 많은 세포 매개 기전이 포함되어 있지만 정확한 면역 병리 기전은 아직 명확하지 않습니다. 식세포 및 세포독성 T-림프구는 구강 상피의 파괴에서 역할을 할 수 있으며 이러한 면역 세포의 존재는 사이토카인의 국소 방출에 의해 조절되고 유지됩니다. RAS 발병 환자는 건강한 대조군 및 활성 RAS가 없는 환자에 비해 혈액 내 감마-델타 T 세포의 존재가 증가합니다. 또한, RAS 환자는 RAS가 없는 환자에 비해 종양 괴사 인자(TNF)-알파의 존재가 증가하지만 인터루킨-2 및 -6과 같은 다른 전염증성 사이토카인도 RAS의 발병에 역할을 할 가능성이 있습니다. . 마지막으로, 아프타성 궤양은 궤양성 대장염, 크론병, 셀리악병, 순환성 호중구감소증, HIV 감염 및 면역글로불린 A(IgA) 결핍과 같은 다수의 염증성 장 질환과 관련이 있는 것으로 밝혀졌습니다. 따라서 장내 미생물총의 변화에 ​​기여하는 RAS에 면역 성분이 관여하거나 그 반대일 수 있습니다. 이 연구에서 우리는 프로바이오틱스로 치료하기 전, 도중 및 후에 RAS 환자의 타액과 대변에 있는 미생물군을 특성화할 것입니다.

연구 설계 및 방법 이 프로젝트는 RAS 환자 20명과 건강한 대조군 20명의 전체 타액과 대변에서 미생물 군집을 조사하는 단면 연구로 구성됩니다. 이 프로젝트에는 프로바이오틱스(Lactobacillus reuteri 함유 사탕 2정을 3개월 동안 매일) 또는 위약을 사용한 이중 맹검 무작위 위약 통제 개입도 포함됩니다. RAS 환자의 타액 및 분변 마이크로바이옴은 치료 전후에 비교됩니다.

RAS 환자는 코펜하겐 대학교 보건의학부 구강 의학 클리닉에 의뢰된 환자 중에서 모집됩니다. www.forsoegsperson.dk를 통해 20명의 건강한 대조군을 모집합니다.

방법에는 다음이 포함됩니다.

• 인터뷰 재. RAS 발병, 구강 증상(시각적 아날로그 척도로 평가), 동반 질환, 약물 섭취, 흡연 및 음주 습관, 구강 위생 습관.
• 씹는 파라핀 자극 전체 타액의 수집.
• 아프타성 궤양 평가(Ulcer Severity Score), 치아 상태 및 치주 상태 등록을 포함한 구강 검사.
• aphthous 궤양 중 하나에서 나온 번짐.
• 배설물 샘플은 철저한 교육 후 피험자가 집에서 직접 수집하고 Statens Serum Institut의 매뉴얼에 따라 처리합니다. 샘플에서 250mg을 수집하여 추가 처리 및 분석까지 -80°C로 유지되는 냉동고에 보관합니다.
• 헤모글로빈(HgB), C 반응성 단백질(CRP), 철, 코발라민, 엽산, 트랜스페린, 페리틴 및 비타민 D 수치를 포함한 혈액 검사.

타액, 대변 및 스미어 샘플에서 박테리아 DNA 추출(기준선에서, 프로바이오틱스 또는 위약 개입의 각각 7일 및 90일)은 코펜하겐 대학 치과학과의 실험실에서 이전에 확립된 Human Microbiome Project의 지침에 따른 절차.

베이징 유전체학 연구소(Beijing Genomics Institute)는 타액, 얼룩 및 대변 샘플에서 추출한 박테리아 DNA에 대한 메타게놈 분석을 수행합니다. Illumina 16S rDNA 시퀀싱을 통해 박테리아 분류 및 계통 발생적 다양성을 결정할 수 있습니다.