Microbioma salival y fecal de pacientes con estomatitis aftosa recurrente antes y después del tratamiento con probióticos

Propósito del estudio El propósito de este estudio es caracterizar el microbioma salival y fecal en pacientes con estomatitis aftosa recurrente (RAS) y comparar los hallazgos con los de un grupo de control sano emparejado. Otro objetivo es investigar el efecto del tratamiento con probióticos en el microbioma de la saliva y las heces, así como la gravedad y el número de brotes de RAS. Además, se tomará un frotis de las úlceras aftosas presentes antes y después del tratamiento con probióticos para caracterizar la microbiota local.

Se supone que el microbioma de la saliva total y las heces de pacientes con RAS (úlceras aftosas de tipo mayor o menor) difiere del microbioma de la saliva total y las heces de personas de control de la misma edad y sexo.

También se plantea la hipótesis de que el tratamiento con probióticos tiene un efecto beneficioso sobre el dolor de las mucosas y reduce la gravedad de la EAR y la frecuencia de los brotes. Además, se supone que el tratamiento con probióticos tiene un efecto sobre el microbioma en la saliva total y las heces de pacientes con RAS.

Antecedentes La estomatitis aftosa recurrente (EAR) es una de las enfermedades ulcerativas más frecuentes que afectan a la mucosa oral. La prevalencia varía del 5 al 25%. La etiología sigue siendo desconocida, pero se han propuesto varios factores locales, sistémicos, inmunológicos, genéticos, alérgicos, nutricionales y microbianos como agentes causales.

Clínicamente, la EAR se caracteriza por episodios recurrentes de una o varias úlceras orales dolorosas, poco profundas y redondeadas a intervalos de algunos meses o días.

La RAS se puede clasificar en tres tipos diferentes: menor, mayor y herpetiforme. La RAS menor comprende alrededor del 80% de los casos. Este tipo se caracteriza por úlceras aftosas con un diámetro de unos 5 mm, a menudo localizadas en la mucosa bucal y labial. Las úlceras se curan en 7-10 días sin formación de cicatrices. Las RAS mayores aparecen en el 10-15% de los pacientes. Las úlceras son a menudo crateriformes con un diámetro de 10-30 mm y típicamente se presentan en la mucosa labial, el velo del paladar, la región amigdalina y la orofaringe. El tiempo de cicatrización puede variar de 2 a 6 semanas y dejando cicatriz. Estas úlceras son muy dolorosas y la ingesta de alimentos puede verse comprometida. La prevalencia del tipo herpetiforme es del 5-10%.

Este tipo a menudo se localiza en el piso de la boca y la parte ventral de la lengua, y se caracteriza por la agregación de múltiples úlceras pequeñas.

La etiología sigue siendo desconocida, pero se supone que una serie de factores locales y sistémicos aumentan la predisposición, incluidos los traumatismos de las mucosas, los eventos estresantes, los cambios hormonales, el abandono del hábito de fumar, la alergia a diversas sustancias alimenticias y la deficiencia de vitaminas y/o minerales. También es una predisposición genética ya que la posibilidad de desarrollar RAS es del 90% si ambos padres tienen RAS y del 20% si uno de los padres tiene RAS.

Factores microbianos Se ha sugerido una serie de microorganismos implicados en la etiopatogenia de la EAR. Estos incluyen estreptococos orales, especialmente Streptococcus mitis, pero la reacción cruzada entre los estreptococos orales y los antígenos de la mucosa oral es inespecífica y se considera clínicamente insignificante. Helicobacter pylori, que se asocia con gastritis y úlceras duodenales, también se puede ver en la placa dental y, por lo tanto, también se sugiere que está involucrado en la patogenia de la RAS, pero el anti-H. pylori no se ha encontrado aumentada la seropositividad en pacientes con RAS. Se han encontrado varios virus en biopsias de úlceras aftosas como el citomegalovirus y el virus de Epstein-Barr. También se ha supuesto que el herpes simple, la varicela zoster y el adenovirus desempeñan un papel en la etiopatogenia. Sin embargo, no ha sido posible demostrar una relación causal entre la infección por el virus y la RAS, y el ADN viral puede estar presente debido a una infección secundaria.

Las nuevas tecnologías mejoran nuestra capacidad para realizar análisis más profundos de la microbiota en pacientes con EAR. Mientras se trabajaba en este protocolo de estudio, se publicó un estudio sobre el microbioma en pacientes con RAS que muestra una mayor proporción de especies de Bacteroides en la mucosa oral de pacientes con RAS en comparación con controles sanos. Por lo tanto, como también sugieren estudios previos, la microbiota oral parece desempeñar un papel en el desarrollo de RAS, así como en la perpetuación de RAS.

En este estudio caracterizaremos el microbioma en saliva total, heces y úlceras aftosas de pacientes con RAS (con lesiones activas) y analizaremos en qué se diferencia del microbioma de sujetos sanos. Esta caracterización podría ser esencial para comprender la patogenia de la RAS y contribuir al desarrollo de nuevas estrategias para el manejo de estos pacientes.

Factores inmunopatológicos Varios estudios indican que la patogénesis de la RAS incluye una serie de mecanismos mediados por células, pero la inmunopatogénesis exacta aún no está aclarada. Los linfocitos T fagocíticos y citotóxicos pueden desempeñar un papel en la destrucción del epitelio oral y la presencia de estas células inmunitarias está regulada y mantenida por la liberación local de citoquinas. Los pacientes con un brote de RAS tienen una mayor presencia de células T gamma-delta en la sangre en comparación con las personas de control sanas y los pacientes sin RAS activo. Además, los pacientes con RAS tienen una mayor presencia de factor de necrosis tumoral (TNF)-alfa en comparación con aquellos que no tienen RAS, pero también es probable que otras citocinas proinflamatorias como la interleucina-2 y -6 desempeñen un papel en la patogénesis de RAS. . Finalmente, las úlceras aftosas se han encontrado asociadas a una serie de enfermedades inflamatorias del intestino, como la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn y la enfermedad celíaca, así como a la neutropenia cíclica, la infección por VIH y la deficiencia de inmunoglobulina A (IgA). En consecuencia, un componente inmune puede estar involucrado en RAS que contribuya a un cambio en la microbiota intestinal o viceversa. En este estudio caracterizaremos la microbiota en saliva y heces de pacientes con EAR antes, durante y después del tratamiento con probióticos.

El diseño y los métodos del estudio El proyecto comprende un estudio transversal que investiga el microbioma en la saliva y las heces de 20 pacientes con RAS y 20 personas de control sanas. El proyecto también incluye una intervención aleatoria doble ciego controlada por placebo con probióticos (pastillas que contienen Lactobacillus reuteri, 2 tabletas diarias durante 3 meses) o placebo. El microbioma salival y fecal en pacientes con RAS se compara antes y después del tratamiento.

Los pacientes con RAS se reclutan entre los pacientes remitidos a la Clínica de Medicina Oral de la Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud de la Universidad de Copenhague. Los 20 controles sanos se reclutan a través de www.forsoegsperson.dk

Los métodos incluyen:

• Entrevista re. aparición de EAR, síntomas bucales (valorados mediante una escala analógica visual), comorbilidad, ingesta de medicamentos, hábito tabáquico y alcohólico, hábitos de higiene bucal.
• Recolección de saliva entera masticada estimulada con parafina.
• Examen oral que incluye evaluación de úlceras aftosas (Ulcer Severity Score), registro del estado dental y estado periodontal.
• Un frotis de una de las úlceras aftosas.
• Una muestra fecal será recolectada por los propios sujetos en sus hogares después de una instrucción exhaustiva y manipulada de acuerdo con el manual del Statens Serum Institut. De la muestra se recogen 250 mg y se mantienen en un congelador mantenido a -80°C hasta su posterior procesamiento y análisis.
• Un análisis de sangre que incluya niveles de hemoglobina (HgB), proteína C reactiva (PCR), hierro, cobalamina, folato, transferrina, ferritina y vitamina D.

La extracción de ADN bacteriano de muestras de saliva, heces y frotis (al inicio del estudio, 7 días y 90 días de intervención con probióticos o placebo, respectivamente) se llevará a cabo en el laboratorio del Departamento de Odontología de la Universidad de Copenhague, utilizando métodos previamente establecidos. procedimientos basados ​​en las instrucciones del Proyecto Microbioma Humano.

El Instituto de Genómica de Beijing realiza análisis metagenómicos del ADN bacteriano extraído de saliva, frotis y muestras fecales. La secuenciación Illumina 16S rDNA permite determinar la taxonomía bacteriana y la diversidad filogenética.