プロバイオティクスによる治療前後の再発性アフタ性口内炎患者の唾液および糞便マイクロバイオーム

研究の目的 この研究の目的は、再発性アフタ性口内炎 (RAS) 患者の唾液および糞便マイクロバイオームを特徴付け、その結果を対応する健康な対照群の結果と比較することです。 別の目的は、唾液全体と糞便中のマイクロバイオームに対するプロバイオティクスによる治療の効果、および RAS 発生の重症度と数を調査することです。 さらに、局所微生物叢を特徴付けるために、プロバイオティクスによる治療の前後に現在のアフタ性潰瘍から塗抹標本が採取されます。

RAS（マイナーまたはメジャータイプのアフタ性潰瘍）患者の唾液全体および糞便中のマイクロバイオームは、年齢および性別が一致した対照者の唾液全体および糞便中のマイクロバイオームとは異なると考えられています。

また、プロバイオティクス治療が粘膜の痛みに有益な効果をもたらし、RAS の重症度とアウトブレイクの頻度を低下させるという仮説も立てられています。 さらに、プロバイオティクスによる治療は、RAS 患者の唾液全体と糞便中のマイクロバイオームに影響を与えると考えられています。

背景 再発性アフタ性口内炎 (RAS) は、口腔粘膜に影響を与える最も一般的な潰瘍性疾患の 1 つです。 有病率は 5 ～ 25% です。 病因は不明のままですが、いくつかの局所的、全身的、免疫学的、遺伝的、アレルギー的、栄養的、および微生物学的要因が原因物質として提案されています。

臨床的に、RAS は、数ヶ月または数日の間隔で 1 つまたはいくつかの丸みを帯びた浅い痛みを伴う口腔潰瘍の再発発作を特徴としています。

RAS は、マイナー、メジャー、ヘルペティフォームの 3 つのタイプに分類できます。 マイナー RAS は、症例の約 80% を占めます。 このタイプは、直径約 5 mm のアフタ性潰瘍が特徴で、頬や唇の粘膜に限局することがよくあります。 潰瘍は、瘢痕を形成することなく 7 ～ 10 日以内に治癒します。 主要な RAS は患者の 10 ～ 15% に現れます。 潰瘍は、多くの場合、直径 10 ～ 30 mm のクレーター状であり、通常、口唇粘膜、軟口蓋、扁桃領域、および中咽頭に存在します。 治癒時間は 2 ～ 6 週間で、瘢痕が残ります。 これらの潰瘍は非常に痛みを伴い、食物摂取が損なわれる可能性があります。 ヘルペス型の有病率は 5 ～ 10% です。

口底や舌腹に局在することが多く、小さな潰瘍が多数集まっているのが特徴です。

病因は不明のままですが、粘膜の外傷、ストレスの多い出来事、ホルモンの変化、禁煙、さまざまな食物物質に対するアレルギー、ビタミンおよび/またはミネラルの欠乏など、多くの局所的および全身的な要因が素因を増加させると考えられています. RAS を発症する可能性は、両親が両方とも RAS を持っている場合は 90% であり、両親の 1 人が RAS を持っている場合は 20% であるため、遺伝的素因でもあります。

微生物因子 RAS の病因には多くの微生物が関与していることが示唆されています。 これらには、口腔連鎖球菌、特に連鎖球菌ミティスが含まれますが、口腔連鎖球菌と口腔粘膜抗原との間の交差反応は非特異的であり、臨床的に重要ではないと考えられています. 胃炎および十二指腸潰瘍に関連するヘリコバクター ピロリも歯垢に見られる可能性があり、したがって RAS の病因に関与することも示唆されていますが、抗 H. ピロリ菌陽性は、RAS 患者では増加していません。 サイトメガロウイルスやエプスタイン-バーウイルスなど、アフタ性潰瘍の生検でさまざまなウイルスが発見されています。 単純ヘルペス、水痘帯状疱疹、およびアデノウイルスもまた、病因において役割を果たすと考えられてきた. しかし、ウイルス感染とRASとの因果関係を示すことはできておらず、二次感染によりウイルスDNAが存在している可能性があります。

新しい技術により、RAS 患者の微生物叢をより詳細に分析する能力が向上します。 この研究プロトコルに取り組んでいる間、RAS 患者のマイクロバイオームに関する 1 つの研究が公開されており、健康な対照と比較して RAS 患者の口腔粘膜におけるバクテロイデス種の割合が増加していることを示しています。 したがって、以前の研究でも示唆されているように、口腔微生物叢は RAS の発生と RAS の永続化において役割を果たしているようです。

この研究では、全唾液、糞便、および RAS (活動性病変を伴う) 患者のアフタ性潰瘍のマイクロバイオームを特徴付け、それが健康な被験者のマイクロバイオームとどのように異なるかを分析します。 この特徴付けは、RASの病因を理解するために不可欠であり、これらの患者を管理するための新しい戦略の開発に貢献する可能性があります.

免疫病理学的要因 いくつかの研究は、RAS の病因には多数の細胞媒介メカニズムが含まれることを示していますが、正確な免疫病因はまだ明らかにされていません。 貪食性および細胞傷害性 T リンパ球は、口腔上皮の破壊に関与している可能性があり、これらの免疫細胞の存在は、サイトカインの局所放出によって調節および維持されます。 RAS が発生した患者は、健康な対照者やアクティブな RAS のない患者と比較して、血中のガンマデルタ T 細胞の存在が増加しています。 さらに、RAS の患者は、RAS のない患者と比較して腫瘍壊死因子 (TNF)-α の存在が増加していますが、インターロイキン-2 や -6 などの他の炎症誘発性サイトカインも RAS の病因に関与している可能性があります。 . 最後に、アフタ様潰瘍は、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病、周期性好中球減少症、HIV 感染、免疫グロブリン A (IgA) 欠乏症などの多くの炎症性腸疾患に関連していることがわかっています。 したがって、免疫成分は、腸内微生物叢の変化に寄与するRASに関与している可能性があり、逆もまた同様です。 この研究では、プロバイオティクスによる治療前、治療中、治療後の RAS 患者の唾液および糞便中の微生物叢を特徴付けます。

研究のデザインと方法 このプロジェクトは、20 人の RAS 患者と 20 人の健康な対照者の唾液と糞便全体のマイクロバイオームを調査する横断研究で構成されています。 このプロジェクトには、プロバイオティクス（Lactobacillus reuteri を含むトローチを 1 日 2 錠、3 か月間）またはプラセボによる二重盲検無作為化プラセボ対照介入も含まれています。 RAS 患者の唾液と糞便のマイクロバイオームは、治療の前後で比較されます。

RAS 患者は、コペンハーゲン大学保健医療科学部の口腔医学クリニックに紹介された患者の中から募集されます。 20 人の健常対照者は、www.forsoegsperson.dk から募集されます。

方法は次のとおりです。

• インタビュー再。 RASの発症、口腔症状（視覚的アナログスケールによって評価）、併存疾患、投薬摂取、喫煙およびアルコール習慣、口腔衛生習慣。
• 咀嚼パラフィン刺激全唾液の採取。
• アフタ性潰瘍（潰瘍重症度スコア）の評価、歯の状態および歯周状態の登録を含む口腔検査。
• アフタ性潰瘍の 1 つからの塗抹標本。
• 糞便サンプルは、徹底した指導の後、被験者自身が自宅で収集し、Statens Serum Institut のマニュアルに従って処理します。 サンプルから 250 mg を収集し、さらに処理および分析するまで、-80 °C に保たれた冷凍庫に保管します。
• ヘモグロビン (HgB)、C 反応性タンパク質 (CRP)、鉄、コバラミン、葉酸、トランスフェリン、フェリチン、ビタミン D のレベルを含む血液検査。

唾液、糞便および塗抹標本からの細菌 DNA の抽出 (ベースラインで、それぞれプロバイオティクスまたはプラセボによる介入の 7 日間および 90 日間) は、以前に確立された方法を使用して、コペンハーゲン大学歯学部の研究室で実施されます。 Human Microbiome Project の指示に基づく手順。

唾液、塗抹標本、糞便サンプルから抽出された細菌 DNA のメタゲノム解析は、Beijing Genomics Institute によって行われています。 イルミナ 16S rDNA シーケンシングにより、細菌の分類と系統発生の多様性を決定できます。