Mikro-RNA-profiili transsukupuolisten miesten munasarjan follikkelia nesteessä

Tausta:

MikroRNA:t ovat pieniä RNA-molekyylejä, jotka säätelevät geeniekspressiota solussa. mikro-RNA:ita löytyy myös kehon nesteistä vesikkeleissä, jotka tunnetaan nimellä eksosomeja, jotka ovat vuorovaikutuksessa solukalvojen kanssa, vapauttavat niiden sisällön ja ovat siten vastuussa solujen välisestä kosketuksesta.

Munasarjan follikkelien neste sisältää erilaisia ​​aineita, mukaan lukien mikro-RNA:ita, joita eri follikkelisolut erittävät ja joilla on tärkeä rooli munasolun kehityksessä ja kypsymisessä. Viimeaikaiset tutkimukset ovat havainneet, että follikkelianesteestä löydetyillä mikro-RNA:illa on tärkeä rooli munasolun kypsymisessä, hedelmöityksessä, alkion laadussa ja implantaatiossa.

Transsukupuolisuus on kattotermi, joka kuvaa ihmisiä, joiden sukupuoli-identiteetti ja/tai ilmaisu ei ole linjassa heidän syntymässään määritellyn sukupuolen kanssa. Transsukupuolinen mies on mies, joka määritettiin naiseksi syntyessään. Transsukupuolisten miesten lääketieteellisiin toimenpiteisiin kuuluu hormonaalinen (testosteroni) hoito, joka voi vaikuttaa negatiivisesti hedelmällisyyteen, ja hedelmällisyyden säilyttäminen on vaihtoehto tämän mahdollisen vahingon voittamiseksi. Transmiesten hedelmällisyyden säilyttämisvaihtoehtoja ovat munasolujen ja alkioiden kylmäsäilytys. American Society for Reproductive Medicine (ASRM) suosittelee, että: 1. Kaikkia transsukupuolisia potilaita neuvotaan hedelmällisyysvaihtoehdoista ennen lääketieteellisen siirtymän aloittamista. 2. Transsukupuolisten on säilytettävä sukusolut (kryosäilytys) ennen hormonihoidon aloittamista. 3. Transsukupuolisten, jotka jo käyttävät sukupuolihormonihoitoa, on lopetettava hormonihoito vähintään 3 kuukaudeksi ennen hedelmällisyyden säilyttämistä. Tämän tutkimuksen tavoitteena on verrata korkeille testosteronitasoille altistuneiden IVF-potilaiden follikkelinesteen mikro-RNA-profiilia normaaleilla testosteronitasoilla oleviin IVF-potilaisiin ja tutkia mahdollista yhteyttä testosteronialtistuksen ja hedelmällisyyspotentiaalin välillä.

Erityiset tavoitteet:

1. Luonnehditaan solunulkoisten RNA:iden profiilia testosteronilla hoidettujen transsukupuolisten potilaiden follikkelianesteessä.
2. Määrittää näiden potilaiden follikkelianesteen RNA-profiilin yhteys munasolujen määrään ja laatuun, hedelmöityspotentiaaliin ja alkioiden laatuun.

Tutkimussuunnitelma

Tutkimuspaikka:

IVF-yksikkö, Lisin äitiyssairaala, Tal Aviv Sourasky Medical Center (TASMC) lisääntymislääketieteen osasto, äitien sikiön lääketieteen osasto, Kalifornian yliopisto, San Diego (UCSD)

Arvioitu kesto: 5 vuotta

Tutkimuskoko: 40 IVF-potilasta: 10 transsukupuolista miestä testosteronihoidon jälkeen, 10 transsukupuolista miestä ennen testosteronihoitoa, 10 potilasta, joilla on munasarjojen monirakkulatauti ja korkea endogeeninen testosteronitaso, 10 munasolun luovuttajaa

Tutkimuksen suunnittelu ja menetelmät

1. Potilaat, jotka aiotaan osallistua tutkimukseen, saavat yksityiskohtaisen selvityksen tutkimuksesta ja allekirjoittavat suostumuslomakkeen.
2. Tutkimukseen osallistuvat IVF-potilaat ohjataan kaikkiin rutiininomaisesti vaadittaviin kokeisiin ennen IVF-toimenpidettä, mukaan lukien verikokeet hormonaalisen profiilin ja testosteronitasojen määrittämiseksi sekä ultraääni antural follicle count (AFC). Testosteronitasot transsukupuolisilla potilailla testataan ennen testosteronihoidon lopettamista ja sen jälkeen.
3. Potilaat saavat IVF-protokollan, joka sisältää hormonihoidon, jota seuraa munasolun haku.

4. Munasolujen talteenoton aikana follikulaariset nesteet kerätään IVF-jaksoista 10 transsukupuolisesta potilaasta, jotka ovat altistuneet testosteronille ja 30 verrokkipotilaalle, jotka eivät ole altistuneet ulkoiselle testosteronille (10 transsukupuolista miestä ennen testosteronihoitoa, 10 potilasta, joilla on munasarjojen monirakkulatauti ja korkeat endogeeniset testosteronitasot, 10 munasolun luovuttajat). Nämä bionesteet ovat kliinisten IVF-jaksojen aikana saatuja hylättyjä materiaaleja.

   Follikulaarisen nesteen näytteet altistetaan tunnistamattomille näytteille, joiden juokseva numero on koodattu, mikä eliminoi mahdollisen kontaktin muodostamisen tietyn potilaan kanssa.

5. Follikulaarinen neste sentrifugoidaan ja supernatantti pidetään -80 asteessa IVF-yksikössä, TASMC.
6. Follikulaarinen neste kliinisistä IVF-sykleistä ilmoittautuneilta transsukupuolisista koehenkilöistä ja verrokkeista sekä tunnistamattomat potilastiedot, jotka liittyvät kuhunkin follikulaarinen neste- ja alkioviljelynestenäytteeseen, mukaan lukien potilaan ikä, BMI, testosteronin käyttö, IVF-hoidon syy, munasolujen määrä, hedelmöittyneiden munasolujen määrä ja alkioiden laatu, siirretään TASMC:n Amir-ryhmästä UCSD:n Laurent-ryhmään.
7. UCSD:ssä solunulkoinen RNA eristetään follikkelin nestenäytteistä käyttämällä The Norgen- ja The ExoRNeasy-menetelmiä (jota seurasi qRT-PCR-validointi) ja sille suoritetaan RNA-sekvensointianalyysi käyttämällä NEBNextin useita pieniä RNAseq-kirjaston valmistussarjoja.
8. Tuloksena saadut RNAseq-tiedot analysoidaan kliinisiin muuttujiin liittyvien muutosten tunnistamiseksi mikro-RNA:n ilmentymisessä, mukaan lukien IVF:n syy, testosteronihoito ja alkion laatu.

Vaiheet 1-6, 8 suoritetaan TASMC:ssä. Vaiheet 7-8 suoritetaan UCSD:ssä.

Sisällyttämiskriteerit:

* 18-vuotiaat ja sitä vanhemmat potilaat

Poissulkemiskriteerit:

• Alle 18-vuotiaat potilaat
• Potilaat, jotka eivät reagoineet hormonihoitoon ja IVF-sykliin, keskeytettiin.