Profil mikro RNA w płynie z pęcherzyków jajnikowych mężczyzn transpłciowych

Tło:

MikroRNA to małe cząsteczki RNA, które kontrolują ekspresję genów w komórce. mikroRNA znajdują się również w płynach ustrojowych w pęcherzykach zwanych egzosomami, które wchodzą w interakcje z błonami komórkowymi, uwalniając ich zawartość, odpowiadając w ten sposób za kontakt między komórkami.

Płyn pęcherzykowy jajnika zawiera różne substancje, w tym mikroRNA, które są wydzielane przez różne komórki pęcherzyka i odgrywają ważną rolę w rozwoju i dojrzewaniu komórki jajowej. Ostatnie badania wykazały, że mikroRNA znajdujące się w płynie pęcherzykowym odgrywają ważną rolę w dojrzewaniu komórki jajowej, zapłodnieniu, jakości zarodka i implantacji.

Transpłciowość to ogólny termin opisujący osoby, których tożsamość i/lub ekspresja płciowa nie jest zgodna z płcią przypisaną im przy urodzeniu. Mężczyzna transpłciowy to mężczyzna, któremu przy urodzeniu przypisano kobietę. Interwencje medyczne dla mężczyzn transpłciowych obejmują leczenie hormonalne (testosteronem), które może negatywnie wpływać na płodność, a zachowanie płodności jest opcją przezwyciężenia tego potencjalnego uszkodzenia. Opcje zachowania płodności dla transmężczyzn obejmują kriokonserwację oocytów i zarodków. Amerykańskie Towarzystwo Medycyny Rozrodu (ASRM) zaleca, aby: 1. Wszyscy pacjenci transpłciowi zostaną poinformowani o możliwościach zapłodnienia przed rozpoczęciem zmiany medycznej. 2. Osoby transpłciowe muszą zachować gamety (kriokonserwację) przed rozpoczęciem terapii hormonalnej. 3. Osoby transpłciowe, które już stosują terapię hormonalną przeciw płci, muszą przerwać terapię hormonalną na co najmniej 3 miesiące przed zachowaniem płodności. Celem obecnego badania jest porównanie profilu mikro RNA płynu pęcherzykowego pacjentów IVF narażonych na wysoki poziom testosteronu z pacjentami IVF z prawidłowym poziomem testosteronu i zbadanie możliwego związku między ekspozycją na testosteron a potencjałem płodności.

Cele szczegółowe:

1. Scharakteryzowanie profilu zewnątrzkomórkowych RNA w płynie pęcherzykowym pacjentów transpłciowych leczonych testosteronem.
2. Określenie związku profilu RNA płynu pęcherzykowego u tych pacjentek z liczbą i jakością oocytów, potencjałem zapłodnienia oraz jakością zarodków.

Plan badań

Lokalizacja badań:

Oddział IVF, Lis Maternity Hospital, Centrum Medyczne Tal Aviv Sourasky (TASMC) Oddział Medycyny Rozrodu, Oddział Medycyny Płodu Matki, Uniwersytet Kalifornijski, San Diego (UCSD)

Szacowany czas trwania: 5 lat

Wielkość badania: 40 pacjentów IVF: 10 transpłciowych mężczyzn po terapii testosteronem, 10 transpłciowych mężczyzn przed terapią testosteronem, 10 pacjentek z zespołem policystycznych jajników i wysokim endogennym poziomem testosteronu, 10 dawczyń komórek jajowych

Projekt i metody badań

1. Pacjenci zakwalifikowani do udziału w badaniu otrzymają szczegółowe wyjaśnienie przebiegu badania oraz podpiszą formularz zgody.
2. Pacjenci IVF włączeni do badania zostaną skierowani na wszystkie badania rutynowo wymagane przed zabiegiem IVF, w tym badania krwi na profil hormonalny i poziom testosteronu oraz USG na liczbę pęcherzyków antralnych (AFC). Poziomy testosteronu u pacjentów transpłciowych będą badane przed i po zakończeniu terapii testosteronem.
3. Pacjenci otrzymają protokół IVF, w tym terapię hormonalną, po której nastąpi pobranie oocytów.

4. Podczas pobierania komórek jajowych pobrane zostaną płyny pęcherzykowe z cykli IVF od 10 pacjentek transpłciowych narażonych na działanie testosteronu i 30 pacjentek z grupy kontrolnej nienarażonych na działanie testosteronu z zewnątrz (10 transpłciowych mężczyzn przed terapią testosteronem, 10 pacjentek z zespołem policystycznych jajników i wysokim endogennym poziomem testosteronu, 10 dawczynie komórek jajowych). Te biopłyny będą materiałami odrzuconymi uzyskanymi w trakcie klinicznych cykli IVF.

   Próbki płynu pęcherzykowego zostaną poddane nierozpoznanym próbkom z numerem bieżącym, zakodowanym, co eliminuje możliwość nawiązania kontaktu z konkretnym pacjentem.

5. Płyn pęcherzykowy zostanie poddany wirowaniu, a supernatant będzie utrzymywany w temperaturze -80 stopni w jednostce IVF, TASMC.
6. Płyn pęcherzykowy z klinicznych cykli IVF od włączonych osób transpłciowych i kontroli, wraz z informacjami o pacjencie, których nie można zidentyfikować, związanymi z każdą próbką płynu pęcherzykowego i płynu z hodowli zarodka, w tym wiek pacjenta, BMI, stosowanie testosteronu, przyczyna leczenia IVF, liczba oocytów, liczba zapłodnionych oocytów i jakość zarodków, zostaną przeniesione z grupy Amira w TASMC do grupy Laurenta w UCSD.
7. Na UCSD pozakomórkowy RNA zostanie wyizolowany z próbek płynu pęcherzykowego przy użyciu metod Norgen i The ExoRNeasy (po czym nastąpi walidacja qRT-PCR) i poddany analizie sekwencjonowania RNA przy użyciu zestawów do przygotowania biblioteki wielu małych RNAseq NEBNext.
8. Uzyskane dane RNAseq zostaną przeanalizowane w celu zidentyfikowania zmian w ekspresji mikroRNA związanych ze zmiennymi klinicznymi, w tym przyczyną IVF, leczeniem testosteronem i jakością zarodka.

Kroki 1-6, 8 zostaną wykonane w TASMC. Kroki 7-8 zostaną wykonane w UCSD.

Kryteria przyjęcia:

* Pacjenci w wieku 18 lat i starsi

Kryteria wyłączenia:

• Pacjenci w wieku poniżej 18 lat
• Pacjenci, którzy nie reagowali na terapię hormonalną i przerywali cykl IVF.