Profilo del micro RNA nel liquido del follicolo ovarico di uomini transgender

Sfondo:

I microRNA sono piccole molecole di RNA che controllano l'espressione genica nella cellula. i micro RNA si trovano anche nei fluidi corporei in vescicole conosciute come esosomi che interagiscono con le membrane cellulari, ne rilasciano il contenuto, responsabili quindi del contatto cellula-cellula.

Il fluido del follicolo ovarico contiene varie sostanze, tra cui i micro RNA, che vengono secreti dalle varie cellule del follicolo e svolgono un ruolo importante nello sviluppo e nella maturazione dell'ovocita. Studi recenti hanno scoperto che i micro RNA presenti nel fluido follicolare svolgono un ruolo importante nella maturazione dell'ovocita, nella fecondazione, nella qualità dell'embrione e nell'impianto.

Transgenderismo è un termine generico che descrive le persone la cui identità e/o espressione di genere non è in linea con il sesso assegnato alla nascita. Un uomo transgender è un uomo a cui è stata assegnata una femmina alla nascita. Gli interventi medici per gli uomini transgender includono il trattamento ormonale (testosterone) che può influire negativamente sulla fertilità e la conservazione della fertilità è un'opzione per superare questo potenziale danno. Le opzioni di conservazione della fertilità per i transessuali includono la crioconservazione di ovociti ed embrioni. L'American Society for Reproductive Medicine (ASRM) raccomanda che: 1. Tutti i pazienti transgender saranno consigliati in merito alle opzioni di fertilità prima di iniziare la transizione medica. 2. I transgender devono conservare i gameti (crioconservazione) prima di iniziare la terapia ormonale. 3. I transgender che stanno già utilizzando il trattamento ormonale incrociato devono interrompere il trattamento ormonale per almeno 3 mesi prima della conservazione della fertilità. Lo scopo del presente studio è confrontare il profilo del micro RNA del fluido follicolare di pazienti con FIV esposti a livelli elevati di testosterone con pazienti con FIV con livelli di testosterone normali ed esaminare la possibile associazione tra esposizione al testosterone e potenziale di fertilità.

Obiettivi specifici:

1. Caratterizzare il profilo degli RNA extracellulari nel fluido follicolare di pazienti transgender trattati con testosterone.
2. Determinare l'associazione del profilo dell'RNA del fluido follicolare in questi pazienti con il numero e la qualità degli ovociti, il potenziale di fecondazione e la qualità degli embrioni.

Piano di ricerca

Luogo di ricerca:

Unità IVF, Lis Maternity Hospital, The Tal Aviv Sourasky Medical Center (TASMC) Dipartimento di medicina della riproduzione, Divisione di medicina materno-fetale, Università della California, San Diego (UCSD)

Durata prevista: 5 anni

Dimensione dello studio: 40 pazienti IVF: 10 uomini transgender dopo la terapia con testosterone, 10 uomini transgender prima della terapia con testosterone, 10 pazienti con sindrome dell'ovaio policistico e alti livelli di testosterone endogeno, 10 donatrici di ovuli

Disegno e metodi della ricerca

1. I pazienti che intendono partecipare allo studio riceveranno una spiegazione dettagliata dello studio e firmeranno un modulo di consenso.
2. I pazienti con fecondazione in vitro inclusi nello studio verranno sottoposti a tutti i test di routine richiesti prima della procedura di fecondazione in vitro, inclusi esami del sangue per il profilo ormonale e i livelli di testosterone e l'ecografia per la conta dei follicoli antrali (AFC). I livelli di testosterone nei pazienti transgender saranno testati prima e dopo l'interruzione della terapia con testosterone.
3. I pazienti riceveranno un protocollo di fecondazione in vitro che include la terapia ormonale che sarà seguita dal prelievo degli ovociti.

4. Durante il prelievo degli ovociti, i fluidi follicolari saranno raccolti dai cicli di fecondazione in vitro di 10 pazienti transgender esposte a testosterone e 30 pazienti di controllo non esposte a testosterone esterno (10 uomini transgender prima della terapia con testosterone, 10 pazienti con sindrome dell'ovaio policistico e alti livelli di testosterone endogeno, 10 donatori di ovuli). Questi biofluidi saranno materiali di scarto ottenuti durante il corso dei cicli clinici di fecondazione in vitro.

   I prelievi del liquido follicolare saranno sottoposti a prelievi non riconosciuti con un numero progressivo, codificato, eliminando così ogni possibilità di stabilire un contatto con il particolare paziente.

5. Il fluido follicolare sarà sottoposto a centrifugazione e il surnatante sarà mantenuto a -80 gradi nell'unità di fecondazione in vitro, TASMC.
6. Fluido follicolare da cicli clinici di fecondazione in vitro da soggetti e controlli transgender arruolati, insieme a informazioni sul paziente non identificabili associate a ciascun campione di liquido follicolare e fluido di coltura embrionale, tra cui età del paziente, indice di massa corporea, uso di testosterone, causa del trattamento di fecondazione in vitro, numero di ovociti, numero di ovociti fecondati e la qualità degli embrioni, saranno trasferiti dal gruppo Amir presso TASMC al gruppo Laurent presso UCSD.
7. All'UCSD, l'RNA extracellulare sarà isolato dai campioni di liquido follicolare utilizzando i metodi The Norgen e The ExoRNeasy (seguiti dalla convalida qRT-PCR) e sottoposto all'analisi del sequenziamento dell'RNA utilizzando i kit di preparazione della libreria NEBNext multiple small RNAseq.
8. I dati RNAseq risultanti saranno analizzati per identificare i cambiamenti nell'espressione del micro RNA associati a variabili cliniche, inclusa la causa della fecondazione in vitro, il trattamento con testosterone e la qualità dell'embrione.

I passaggi 1-6, 8 verranno eseguiti in TASMC. I passaggi 7-8 verranno eseguiti in UCSD.

Criterio di inclusione:

* Pazienti di età pari o superiore a 18 anni

Criteri di esclusione:

• Pazienti sotto i 18 anni
• I pazienti che non hanno risposto alla terapia ormonale e il ciclo di fecondazione in vitro è stato interrotto.