Perfil de micro ARN en el líquido del folículo ovárico de hombres transgénero

Fondo:

Los microARN son pequeñas moléculas de ARN que controlan la expresión génica en la célula. Los micro ARN también se encuentran en los fluidos corporales en vesículas conocidas como exosomas que interactúan con las membranas celulares, liberan su contenido y, por lo tanto, son responsables del contacto entre células.

El líquido del folículo ovárico contiene varias sustancias, incluidos los micro ARN, que son secretados por las diversas células del folículo y desempeñan un papel importante en el desarrollo y la maduración del ovocito. Estudios recientes han encontrado que los micro ARN que se encuentran en el líquido del folículo juegan un papel importante en la maduración del ovocito, la fertilización, la calidad del embrión y la implantación.

Transgenerismo es un término general que describe a las personas cuya identidad y/o expresión de género no se alinea con el sexo asignado al nacer. Un hombre transgénero es un hombre al que se le asignó una mujer al nacer. Las intervenciones médicas para hombres transgénero incluyen tratamientos hormonales (testosterona) que pueden afectar negativamente la fertilidad, y la preservación de la fertilidad es una opción para superar este daño potencial. Las opciones de preservación de la fertilidad para hombres trans incluyen la criopreservación de ovocitos y embriones. La Sociedad Americana de Medicina Reproductiva (ASRM) recomienda que: 1. Todos los pacientes transgénero recibirán asesoramiento sobre las opciones de fertilidad antes de iniciar la transición médica. 2. Las personas transgénero deben conservar los gametos (criopreservación) antes de iniciar la terapia hormonal. 3. Las personas transgénero que ya están usando un tratamiento hormonal cruzado deben suspender el tratamiento hormonal durante al menos 3 meses antes de la preservación de la fertilidad. El objetivo del estudio actual es comparar el perfil de micro ARN del líquido folicular de pacientes con FIV expuestos a niveles altos de testosterona con pacientes con FIV con niveles normales de testosterona y examinar la posible asociación entre la exposición a la testosterona y el potencial de fertilidad.

Objetivos específicos:

1. Caracterizar el perfil de los ARN extracelulares en el líquido folicular de pacientes transgénero tratados con testosterona.
2. Determinar la asociación del perfil de ARN del líquido folicular en estas pacientes con el número y la calidad del ovocito, el potencial de fecundación y la calidad de los embriones.

Plan de investigación

Ubicación de la investigación:

Unidad de FIV, Hospital de Maternidad Lis, Centro Médico Tal Aviv Sourasky (TASMC) Departamento de Medicina Reproductiva, División de Medicina Materno Fetal, Universidad de California, San Diego (UCSD)

Duración estimada: 5 años

Tamaño del estudio: 40 pacientes de FIV: 10 hombres transgénero después de la terapia con testosterona, 10 hombres transgénero antes de la terapia con testosterona, 10 pacientes con síndrome de ovario poliquístico y niveles altos de testosterona endógena, 10 donantes de óvulos

Diseño y métodos de investigación

1. Los pacientes que tengan la intención de participar en el estudio recibirán una explicación detallada del estudio y firmarán un formulario de consentimiento.
2. Los pacientes de FIV incluidos en el estudio serán remitidos a todas las pruebas requeridas de forma rutinaria antes del procedimiento de FIV, incluidos análisis de sangre para el perfil hormonal y los niveles de testosterona, y ultrasonido para el recuento de folículos antrales (AFC). Los niveles de testosterona en pacientes transgénero se evaluarán antes y después de suspender la terapia con testosterona.
3. Los pacientes recibirán un protocolo de FIV que incluye terapia hormonal, seguido de la recuperación de ovocitos.

4. Durante la recuperación de ovocitos, se recolectarán fluidos foliculares de ciclos de FIV de 10 pacientes transgénero expuestas a testosterona y 30 pacientes de control no expuestas a testosterona externa (10 hombres transgénero antes de la terapia con testosterona, 10 pacientes con síndrome de ovario poliquístico y niveles altos de testosterona endógena, 10 donantes de óvulos). Estos biofluidos serán materiales desechados obtenidos durante el transcurso de los ciclos clínicos de FIV.

   Las muestras del líquido folicular serán sometidas a muestras no reconocidas con un número correlativo, codificado, eliminando así cualquier posibilidad de establecer contacto con el paciente en particular.

5. El líquido folicular se centrifugará y el sobrenadante se mantendrá a -80 grados en la unidad de FIV, TASMC.
6. Líquido folicular de ciclos clínicos de FIV de sujetos transgénero inscritos y controles, junto con información no identificable del paciente asociada con cada muestra de líquido folicular y cultivo de embriones, incluida la edad del paciente, el IMC, el uso de testosterona, la causa del tratamiento de FIV, el número de ovocitos, número de ovocitos fertilizados y la calidad de los embriones, serán transferidos del grupo Amir en TASMC al grupo Laurent en UCSD.
7. En la UCSD, el ARN extracelular se aislará de las muestras de fluidos foliculares utilizando los métodos The Norgen y The ExoRNeasy (seguido de la validación de qRT-PCR) y se someterá a análisis de secuenciación de ARN utilizando kits de preparación de bibliotecas pequeñas de ARNseq múltiples NEBNext.
8. Los datos de RNAseq resultantes se analizarán para identificar cambios en la expresión de micro ARN asociados con variables clínicas, incluida la causa de la FIV, el tratamiento con testosterona y la calidad del embrión.

Los pasos 1-6, 8 se realizarán en TASMC. Los pasos 7-8 se realizarán en UCSD.

Criterios de inclusión:

* Pacientes mayores de 18 años

Criterio de exclusión:

• Pacientes menores de 18 años
• Pacientes que no respondieron a la terapia hormonal y se suspendió el ciclo de FIV.