Профиль микроРНК в фолликулярной жидкости яичников трансгендерных мужчин

Задний план:

МикроРНК представляют собой небольшие молекулы РНК, которые контролируют экспрессию генов в клетке. микроРНК также обнаруживаются в жидкостях организма в везикулах, известных как экзосомы, которые взаимодействуют с клеточными мембранами, высвобождая свое содержимое, тем самым отвечая за межклеточный контакт.

Фолликулярная жидкость яичников содержит различные вещества, в том числе микроРНК, которые секретируются различными фолликулярными клетками и играют важную роль в развитии и созревании ооцита. Недавние исследования показали, что микроРНК, обнаруженные в фолликулярной жидкости, играют важную роль в созревании ооцита, оплодотворении, качестве эмбриона и имплантации.

Трансгендеризм — это общий термин, описывающий людей, чья гендерная идентичность и/или самовыражение не соответствуют полу, назначенному им при рождении. Трансгендерный мужчина — это мужчина, которому при рождении была приписана женщина. Медицинские вмешательства для трансгендерных мужчин включают гормональное лечение (тестостерон), которое может негативно повлиять на фертильность, и сохранение фертильности является вариантом преодоления этого потенциального ущерба. Варианты сохранения фертильности для трансмужчин включают криоконсервацию ооцитов и эмбрионов. Американское общество репродуктивной медицины (ASRM) рекомендует: 1. Все трансгендерные пациенты будут проконсультированы относительно вариантов фертильности до начала медицинского перехода. 2. Трансгендеры должны сохранять гаметы (криоконсервация) перед началом гормональной терапии. 3. Трансгендеры, которые уже используют гормональную терапию, должны прекратить гормональную терапию как минимум за 3 месяца до сохранения фертильности. Целью настоящего исследования является сравнение профиля микроРНК фолликулярной жидкости пациентов с ЭКО, подвергшихся воздействию высоких уровней тестостерона, с пациентами с ЭКО с нормальным уровнем тестостерона и изучение возможной связи между воздействием тестостерона и потенциалом фертильности.

Конкретные цели:

1. Охарактеризовать профиль внеклеточных РНК в фолликулярной жидкости трансгендерных пациентов, получавших тестостерон.
2. Определить связь РНК-профиля фолликулярной жидкости у этих пациенток с количеством и качеством ооцитов, потенциалом оплодотворения и качеством эмбрионов.

План исследования

Место исследования:

Отделение ЭКО, Родильный дом Лис, Таль-Авивский медицинский центр Сураски (TASMC) Отделение репродуктивной медицины, Отделение медицины матери и плода, Калифорнийский университет, Сан-Диего (UCSD)

Расчетная продолжительность: 5 лет

Объем исследования: 40 пациентов с ЭКО: 10 трансгендерных мужчин после терапии тестостероном, 10 трансгендерных мужчин до терапии тестостероном, 10 пациентов с синдромом поликистозных яичников и высоким уровнем эндогенного тестостерона, 10 доноров яйцеклеток.

Дизайн и методы исследования

1. Пациенты, которые намерены участвовать в исследовании, получат подробное объяснение исследования и подпишут форму согласия.
2. Пациенты с ЭКО, включенные в исследование, будут направлены на все анализы, которые обычно требуются перед процедурой ЭКО, включая анализы крови на гормональный профиль и уровень тестостерона, а также ультразвуковое исследование для подсчета антральных фолликулов (AFC). Уровни тестостерона у трансгендерных пациентов будут проверяться до и после прекращения терапии тестостероном.
3. Пациенты получат протокол ЭКО, включая гормональную терапию, за которой последует извлечение ооцитов.

4. Во время извлечения ооцитов фолликулярная жидкость будет собрана из циклов ЭКО у 10 трансгендерных пациентов, подвергшихся воздействию тестостерона, и 30 контрольных пациентов, не подвергавшихся внешнему воздействию тестостерона (10 трансгендерных мужчин до терапии тестостероном, 10 пациентов с синдромом поликистозных яичников и высоким уровнем эндогенного тестостерона, 10 доноры яйцеклеток). Эти биожидкости будут выброшены из материалов, полученных в ходе клинических циклов ЭКО.

   Пробы фолликулярной жидкости будут подвергнуты нераспознанным пробам с порядковым номером, закодированным, что исключит любую возможность установления контакта с конкретным пациентом.

5. Фолликулярная жидкость будет подвергаться центрифугированию, а надосадочная жидкость будет поддерживаться при температуре -80 градусов в отделении ЭКО, TASMC.
6. Фолликулярная жидкость из клинических циклов ЭКО от зарегистрированных трансгендерных субъектов и контрольной группы, а также неидентифицируемая информация о пациенте, связанная с каждым образцом фолликулярной жидкости и культуральной жидкости эмбриона, включая возраст пациента, ИМТ, использование тестостерона, причину лечения ЭКО, количество ооцитов, количество оплодотворенных ооцитов и качество эмбрионов будут переданы из группы Amir в TASMC в группу Laurent в UCSD.
7. В UCSD внеклеточная РНК будет выделена из образцов фолликулярной жидкости с использованием методов Norgen и ExoRNeasy (с последующей проверкой qRT-PCR) и подвергнута анализу секвенирования РНК с использованием наборов для подготовки нескольких небольших библиотек RNAseq NEBNext.
8. Полученные данные RNAseq будут проанализированы для выявления изменений в экспрессии микроРНК, связанных с клиническими переменными, включая причину ЭКО, лечение тестостероном и качество эмбриона.

Шаги 1-6, 8 будут выполняться в TASMC. Шаги 7-8 будут выполняться в UCSD.

Критерии включения:

* Пациенты в возрасте 18 лет и старше

Критерий исключения:

• Пациенты до 18 лет
• Пациентки, не ответившие на гормональную терапию, и цикл ЭКО был прекращен.