トランスジェンダー男性の卵胞液中のマイクロ RNA プロファイル

バックグラウンド：

マイクロRNAは、細胞内の遺伝子発現を制御する小さなRNA分子です。 マイクロ RNA は、細胞膜と相互作用し、その内容物を放出するエキソソームとして知られる小胞の体液にも見られ、細胞間接触の原因となります。

卵胞液には、さまざまな卵胞細胞から分泌されるマイクロ RNA を含むさまざまな物質が含まれており、卵母細胞の発生と成熟に重要な役割を果たしています。 最近の研究では、卵胞液に含まれるマイクロ RNA が、卵母細胞の成熟、受精、胚の質、および着床において重要な役割を果たすことがわかっています。

トランスジェンダーリズムとは、性同一性および/または表現が、出生時に割り当てられた性別と一致しない人々を表す包括的な用語です。 トランスジェンダーの男性とは、生まれたときに女性に割り当てられた男性のことです。 トランスジェンダーの男性に対する医学的介入には、生殖能力に悪影響を及ぼす可能性のあるホルモン (テストステロン) 治療が含まれます。生殖能力の温存は、この潜在的な損傷を克服するためのオプションです。 トランスメンの受胎能保存オプションには、卵母細胞および胚の凍結保存が含まれます。 米国生殖医学会 (ASRM) は、次のことを推奨しています。 すべてのトランスジェンダーの患者は、医学的移行を開始する前に、不妊治療の選択肢についてカウンセリングを受けます。 2. トランスジェンダーは、ホルモン療法を開始する前に配偶子を保存する必要があります (凍結保存)。 3. すでにクロスセックスのホルモン治療を受けているトランスジェンダーは、妊孕性温存の前に少なくとも 3 か月間ホルモン治療を中止する必要があります。 現在の研究の目的は、高テストステロン レベルにさらされた IVF 患者の卵胞液のマイクロ RNA プロファイルを、通常のテストステロン レベルの IVF 患者と比較し、テストステロンへの曝露と受精能力との関連性を調べることです。

具体的な目的:

1. テストステロンで治療されたトランスジェンダー患者の卵胞液中の細胞外 RNA のプロファイルを特徴付ける。
2. これらの患者の卵胞液 RNA プロファイルと、卵母細胞の数および質、受精能および胚の質との関連を決定すること。

研究計画

研究場所:

タルアビブ ソウラスキー医療センター (TASMC) リス マタニティ病院 IVF ユニット カリフォルニア大学サンディエゴ校 (UCSD) 母体胎児医学部門生殖医学科

推定期間: 5 年

研究規模: 40 体外受精患者: テストステロン療法後のトランスジェンダー男性 10 人、テストステロン療法前のトランスジェンダー男性 10 人、多嚢胞性卵巣症候群および内因性テストステロン レベルの高い患者 10 人、卵子提供者 10 人

研究のデザインと方法

1. 研究に参加する予定の患者は、研究の詳細な説明を受け、同意書に署名します。
2. 研究に含まれる体外受精患者は、ホルモンプロファイルとテストステロンレベルの血液検査、胞状卵胞数（AFC）の超音波検査など、IVF手順の前に定期的に必要とされるすべての検査を受けます。 トランスジェンダー患者のテストステロンレベルは、テストステロン療法を中止する前後にテストされます.
3. 患者はホルモン療法を含む体外受精プロトコルを取得し、その後に卵母細胞の回収が行われます。

4. 卵母細胞の回収中に、卵胞液は、テストステロンにさらされた10人のトランスジェンダー患者と、外部テストステロンにさらされていない30人の対照患者のIVFサイクルから収集されます（テストステロン療法前の10人のトランスジェンダー男性、10人の多嚢胞性卵巣症候群および内因性テストステロンレベルの高い患者、10人卵子提供者）。 これらの生体液は、臨床 IVF サイクルの過程で得られた廃棄物になります。

   卵胞液のサンプルは、コード化された実行番号を持つ認識されないサンプルにさらされ、特定の患者との接触を確立する可能性を排除します。

5. 卵胞液は遠心分離を受け、上清は体外受精ユニットTASMCで-80度に維持されます。
6. 登録されたトランスジェンダー被験者およびコントロールからの臨床 IVF サイクルからの卵胞液、および各卵胞液および胚培養液サンプルに関連付けられた識別不可能な患者情報 (患者の年齢、BMI、テストステロンの使用、IVF 治療の原因、卵母細胞の数など)受精卵母細胞の数と胚の質は、TASMC の Amir グループから UCSD の Laurent グループに移管されます。
7. UCSD では、Norgen および ExoRNeasy 法を使用して卵胞液サンプルから細胞外 RNA を分離し (その後、qRT-PCR 検証を行う)、NEBNext 複数の small RNAseq ライブラリ調製キットを使用して RNA シーケンス解析を行います。
8. 得られた RNAseq データを分析して、体外受精の原因、テストステロン治療、胚の質など、臨床変数に関連するマイクロ RNA 発現の変化を特定します。

手順 1 ～ 6、8 は TASMC で実行されます。 手順 7 ～ 8 は UCSD で実行されます。

包含基準:

※18歳以上の患者様

除外基準:

• 18歳未満の患者
• ホルモン療法に反応せず、体外受精サイクルが中止された患者。