Profil mikro RNA v tekutině ovariálních folikulů transgender mužů

Pozadí:

MikroRNA jsou malé molekuly RNA, které řídí genovou expresi v buňce. mikro RNA se také nacházejí v tělesných tekutinách ve váčcích známých jako exozomy, které interagují s buněčnými membránami, uvolňují jejich obsah, a jsou tak zodpovědné za kontakt mezi buňkami.

Tekutina ovariálních folikulů obsahuje různé látky, včetně mikro RNA, které jsou vylučovány různými folikulárními buňkami a hrají důležitou roli ve vývoji a zrání oocytu. Nedávné studie zjistily, že mikro RNA nalezené ve folikulární tekutině hrají důležitou roli při zrání oocytu, fertilizaci, kvalitě embrya a implantaci.

Transgenderismus je zastřešující termín popisující lidi, jejichž genderová identita a/nebo výraz se neshoduje s pohlavím přiřazeným při narození. Transgender muž je muž, kterému byla při narození přidělena žena. Mezi lékařské intervence pro transgender muže patří hormonální (testosteronová) léčba, která může negativně ovlivnit plodnost, a zachování plodnosti je možností, jak toto potenciální poškození překonat. Možnosti zachování plodnosti u transmenů zahrnují kryoprezervaci oocytů a embryí. Americká společnost pro reprodukční medicínu (ASRM) doporučuje: 1. Všichni transgender pacienti budou před zahájením přechodu na léčbu informováni o možnostech plodnosti. 2. Transgender musí před zahájením hormonální terapie zachovat gamety (kryokonzervace). 3. Transgenderové, kteří již užívají zkříženou hormonální léčbu, musí přerušit hormonální léčbu alespoň 3 měsíce před zachováním plodnosti. Cílem této studie je porovnat mikro RNA profil folikulární tekutiny pacientek s IVF vystavených vysokým hladinám testosteronu s pacientkami IVF s normálními hladinami testosteronu a prozkoumat možnou souvislost mezi expozicí testosteronu a potenciálem plodnosti.

Konkrétní cíle:

1. Charakterizovat profil extracelulárních RNA ve folikulární tekutině transgender pacientek léčených testosteronem.
2. Zjistit souvislost profilu RNA folikulární tekutiny u těchto pacientek s počtem a kvalitou oocytu, fertilizačním potenciálem a kvalitou embryí.

Výzkumný plán

Místo výzkumu:

IVF jednotka, Lis Maternity Hospital, The Tal Aviv Sourasky Medical Center (TASMC) Oddělení reprodukční medicíny, Divize mateřské fetální medicíny, University of California, San Diego (UCSD)

Předpokládaná doba trvání: 5 let

Velikost studie: 40 pacientů IVF: 10 transgender mužů po terapii testosteronem, 10 transgender mužů před terapií testosteronem, 10 pacientů se syndromem polycystických ovarií a vysokou endogenní hladinou testosteronu, 10 dárců vajíček

Návrh a metody výzkumu

1. Pacienti, kteří se mají účastnit studie, obdrží podrobné vysvětlení studie a podepíší formulář souhlasu.
2. Pacienti s IVF zahrnutí do studie budou odesláni ke všem testům, které jsou běžně vyžadovány před IVF, včetně krevních testů na hormonální profil a hladiny testosteronu a ultrazvuku na počet antrálních folikulů (AFC). Hladiny testosteronu u transgender pacientů budou testovány před a po ukončení léčby testosteronem.
3. Pacientky obdrží protokol IVF včetně hormonální terapie, po kterém bude následovat odběr oocytů.

4. Během odběru oocytů budou odebrány folikulární tekutiny z cyklů IVF od 10 transgender pacientek vystavených testosteronu a 30 kontrolních pacientek, které nebyly vystaveny externímu testosteronu (10 transgender mužů před terapií testosteronem, 10 pacientek se syndromem polycystických ovarií a vysokými endogenními hladinami testosteronu, 10 dárkyně vajíček). Tyto biotekutiny budou vyřazené materiály získané v průběhu klinických cyklů IVF.

   Vzorky folikulární tekutiny budou podrobeny nerozpoznaným vzorkům s průběžným číslem, zakódovaným, čímž se vyloučí jakákoli možnost navázání kontaktu s konkrétním pacientem.

5. Folikulární tekutina bude podrobena centrifugaci a supernatant bude udržován při -80 stupních v IVF jednotce, TASMC.
6. Folikulární tekutina z klinických cyklů IVF od zapsaných transgender subjektů a kontrol, spolu s neidentifikovatelnými informacemi o pacientech spojených s každým vzorkem folikulární tekutiny a tekutiny z kultivace embrya, včetně věku pacientky, BMI, použití testosteronu, příčiny IVF léčby, počtu oocytů, počet oplodněných oocytů a kvalita embryí, budou převedeny ze skupiny Amir na TASMC do skupiny Laurent na UCSD.
7. Na UCSD bude extracelulární RNA izolována ze vzorků folikulární tekutiny pomocí metod The Norgen a The ExoRNeasy (následovaná validací qRT-PCR) a podrobena analýze sekvenování RNA pomocí souprav pro přípravu několika malých knihoven RNAseq NEBNext.
8. Výsledná data RNAseq budou analyzována k identifikaci změn v expresi mikro RNA spojených s klinickými proměnnými, včetně příčiny IVF, léčby testosteronem a kvality embrya.

Kroky 1-6, 8 budou provedeny v TASMC. Kroky 7-8 budou provedeny v UCSD.

Kritéria pro zařazení:

* Pacienti ve věku 18 let a starší

Kritéria vyloučení:

• Pacienti mladší 18 let
• Pacientky, které nereagovaly na hormonální léčbu a cyklus IVF byl přerušen.