Micro-RNA-profiel in de ovariële follikelvloeistof van transgender mannen

Achtergrond:

MicroRNA's zijn kleine RNA-moleculen die genexpressie in de cel regelen. micro-RNA's worden ook aangetroffen in de lichaamsvloeistoffen in blaasjes die bekend staan ​​​​als exosomen en die interageren met celmembranen, hun inhoud vrijgeven, en dus verantwoordelijk zijn voor cel-tot-cel contact.

Het ovariële follikelvocht bevat verschillende stoffen, waaronder micro-RNA's, die worden uitgescheiden door de verschillende follikelcellen en speelt een belangrijke rol bij de ontwikkeling en rijping van de eicel. Recente studies hebben aangetoond dat micro-RNA's in het follikelvocht een belangrijke rol spelen bij de rijping van de eicel, de bevruchting, de kwaliteit van het embryo en de implantatie.

Transgenderisme is een overkoepelende term die mensen beschrijft van wie de genderidentiteit en/of -expressie niet overeenstemt met het bij de geboorte toegewezen geslacht. Een transgender man is een man die bij de geboorte een vrouw is toegewezen. De medische interventies voor transgendermannen omvatten hormonale (testosteron)behandelingen die de vruchtbaarheid negatief kunnen beïnvloeden, en behoud van vruchtbaarheid is een optie om deze potentiële schade te verhelpen. De opties voor het behoud van de vruchtbaarheid voor transmannen omvatten cryopreservatie van oöcyten en embryo's. De American Society for Reproductive Medicine (ASRM) beveelt het volgende aan: 1. Alle transgenderpatiënten krijgen advies over de vruchtbaarheidsopties voordat de medische transitie wordt gestart. 2. Transgenders moeten gameten bewaren (cryopreservatie) voordat ze beginnen met hormonale therapie. 3. Transgenders die al een geslachtsoverschrijdende hormoonbehandeling ondergaan, moeten minimaal 3 maanden stoppen met hormoonbehandeling voordat de vruchtbaarheid behouden blijft. Het doel van de huidige studie is om het micro-RNA-profiel van het follikelvocht van IVF-patiënten die zijn blootgesteld aan hoge testosteronspiegels te vergelijken met IVF-patiënten met normale testosteronspiegels en het mogelijke verband tussen blootstelling aan testosteron en vruchtbaarheidspotentieel te onderzoeken.

Specifieke doelen:

1. Karakteriseren van het profiel van extracellulaire RNA's in het follikelvocht van transgenderpatiënten die met testosteron zijn behandeld.
2. Vaststellen van de associatie van het follikelvloeistof-RNA-profiel bij deze patiënten met het aantal en de kwaliteit van de eicel, het bevruchtingspotentieel en de kwaliteit van de embryo's.

Onderzoeksplan

Onderzoekslocatie:

IVF-eenheid, Lis Kraamkliniek, The Tal Aviv Sourasky Medical Center (TASMC) Afdeling Reproductieve Geneeskunde, Afdeling Maternale Foetale Geneeskunde, Universiteit van Californië, San Diego (UCSD)

Geschatte duur: 5 jaar

Studiegrootte: 40 IVF-patiënten: 10 transgender mannen na testosterontherapie, 10 transgender mannen vóór testosterontherapie, 10 patiënten met het polycysteus ovariumsyndroom en hoge endogene testosteronspiegels, 10 eiceldonoren

Onderzoeksontwerp en methoden

1. Patiënten voor wie het de bedoeling is om aan het onderzoek deel te nemen, krijgen een gedetailleerde uitleg van het onderzoek en ondertekenen een toestemmingsformulier.
2. IVF-patiënten die in het onderzoek zijn opgenomen, zullen worden doorverwezen naar alle tests die routinematig vereist zijn voorafgaand aan de IVF-procedure, inclusief bloedtesten voor hormonaal profiel en testosteronniveaus, en echografie voor het aantal antrale follikels (AFC). Testosteronniveaus bij transgenderpatiënten zullen worden getest voor en nadat de testosterontherapie is gestopt.
3. Patiënten krijgen een IVF-protocol inclusief hormonale therapie, gevolgd door het ophalen van de eicel.

4. Tijdens de eicelpunctie wordt follikelvocht verzameld uit IVF-cycli van 10 transgenderpatiënten die zijn blootgesteld aan testosteron en 30 controlepatiënten die niet zijn blootgesteld aan extern testosteron (10 transgendermannen vóór testosterontherapie, 10 patiënten met het polycysteus ovariumsyndroom en hoge endogene testosteronspiegels, 10 eiceldonoren). Deze biovloeistoffen zijn weggegooide materialen die zijn verkregen tijdens klinische IVF-cycli.

   De monsters van de folliculaire vloeistof zullen worden onderworpen aan niet-herkende monsters met een doorlopend nummer, gecodeerd, waardoor elke mogelijkheid om contact te leggen met de specifieke patiënt wordt geëlimineerd.

5. De folliculaire vloeistof wordt gecentrifugeerd en het supernatant wordt op -80 graden gehouden in de IVF-eenheid, TASMC.
6. Folliculair vocht uit klinische IVF-cycli van geregistreerde transgenderproefpersonen en controles, samen met niet-identificeerbare patiëntinformatie geassocieerd met elk folliculair vocht- en embryokweekvochtmonster, inclusief leeftijd van de patiënt, BMI, gebruik van testosteron, oorzaak van IVF-behandeling, aantal oöcyten, aantal bevruchte eicellen en de kwaliteit van de embryo's, zal worden overgedragen van de Amir-groep bij TASMC naar de Laurent-groep bij UCSD.
7. Bij UCSD zal extracellulair RNA worden geïsoleerd uit de follikelvloeistofmonsters met behulp van de Norgen- en The ExoRNeasy-methoden (gevolgd door qRT-PCR-validatie) en worden onderworpen aan RNA-sequencinganalyse met behulp van meerdere kleine RNAseq-bibliotheekvoorbereidingskits van NEBNext.
8. De resulterende RNAseq-gegevens zullen worden geanalyseerd om veranderingen in micro-RNA-expressie te identificeren die verband houden met klinische variabelen, waaronder de oorzaak van IVF, testosteronbehandeling en embryokwaliteit.

Stappen 1-6, 8 worden uitgevoerd in TASMC. Stappen 7-8 worden uitgevoerd in UCSD.

Inclusiecriteria:

* Patiënten van 18 jaar en ouder

Uitsluitingscriteria:

• Patiënten jonger dan 18 jaar
• Patiënten die niet reageerden op hormoontherapie en de IVF-cyclus werden stopgezet.