Perfil de micro RNA no fluido folicular ovariano de homens transgêneros

Fundo:

MicroRNAs são pequenas moléculas de RNA que controlam a expressão gênica na célula. micro RNAs também são encontrados nos fluidos corporais em vesículas conhecidas como exossomos que interagem com as membranas celulares, liberam seu conteúdo, sendo assim responsáveis ​​pelo contato célula a célula.

O fluido folicular ovariano contém várias substâncias, incluindo micro RNAs, que são secretados pelas diversas células foliculares e desempenham um papel importante no desenvolvimento e maturação do oócito. Estudos recentes descobriram que os micro RNAs encontrados no fluido folicular desempenham um papel importante na maturação do oócito, fertilização, qualidade do embrião e implantação.

Transgenerismo é um termo abrangente que descreve pessoas cuja identidade e/ou expressão de gênero não se alinha com o sexo atribuído no nascimento. Um homem transgênero é um homem que foi designado como mulher ao nascer. As intervenções médicas para homens transexuais incluem tratamento hormonal (testosterona) que pode afetar negativamente a fertilidade, e a preservação da fertilidade é uma opção para superar esse dano potencial. As opções de preservação da fertilidade para homens trans incluem a criopreservação de oócitos e embriões. A Sociedade Americana de Medicina Reprodutiva (ASRM) recomenda que: 1. Todos os pacientes transexuais serão aconselhados sobre as opções de fertilidade antes de iniciar a transição médica. 2. Os transgêneros devem preservar os gametas (criopreservação) antes de iniciar a terapia hormonal. 3. Transgêneros que já estão usando tratamento hormonal para sexo oposto devem interromper o tratamento hormonal por pelo menos 3 meses antes da preservação da fertilidade. O objetivo do presente estudo é comparar o perfil de micro RNA do fluido folicular de pacientes de fertilização in vitro expostos a altos níveis de testosterona com pacientes de fertilização in vitro com níveis normais de testosterona e examinar a possível associação entre a exposição à testosterona e o potencial de fertilidade.

Objetivos específicos:

1. Caracterizar o perfil de RNAs extracelulares no fluido folicular de pacientes transexuais tratados com testosterona.
2. Determinar a associação do perfil de RNA do fluido folicular nessas pacientes com o número e a qualidade do oócito, o potencial de fertilização e a qualidade dos embriões.

Plano de pesquisa

Localização da pesquisa:

Unidade de FIV, Lis Maternity Hospital, The Tal Aviv Sourasky Medical Center (TASMC) Departamento de Medicina Reprodutiva, Divisão de Medicina Materno-Fetal, Universidade da Califórnia, San Diego (UCSD)

Duração estimada: 5 anos

Tamanho do estudo: 40 pacientes de fertilização in vitro: 10 homens trans após terapia com testosterona, 10 homens trans antes da terapia com testosterona, 10 pacientes com síndrome do ovário policístico e altos níveis de testosterona endógena, 10 doadoras de óvulos

Projeto e métodos de pesquisa

1. Os pacientes que pretendem participar do estudo receberão uma explicação detalhada do estudo e assinarão um termo de consentimento.
2. Os pacientes de fertilização in vitro incluídos no estudo serão encaminhados para todos os testes rotineiramente necessários antes do procedimento de fertilização in vitro, incluindo exames de sangue para perfil hormonal e níveis de testosterona e ultrassom para contagem de folículos antrais (AFC). Os níveis de testosterona em pacientes transexuais serão testados antes e depois da interrupção da terapia com testosterona.
3. As pacientes receberão um protocolo de fertilização in vitro, incluindo terapia hormonal, que será seguida pela recuperação do oócito.

4. Durante a recuperação de oócitos, fluidos foliculares serão coletados de ciclos de fertilização in vitro de 10 pacientes trans expostas à testosterona e 30 pacientes controle não expostas à testosterona externa (10 homens trans antes da terapia com testosterona, 10 pacientes com síndrome do ovário policístico e altos níveis de testosterona endógena, 10 doadoras de óvulos). Esses biofluidos serão materiais descartados obtidos durante o curso dos ciclos clínicos de fertilização in vitro.

   As amostras do fluido folicular serão submetidas a amostras não reconhecidas com um número de execução, codificado, eliminando assim qualquer possibilidade de estabelecer contato com o paciente em particular.

5. O fluido folicular será centrifugado e o sobrenadante será mantido a -80 graus na unidade de fertilização in vitro, TASMC.
6. Fluido folicular de ciclos clínicos de fertilização in vitro de indivíduos transgêneros inscritos e controles, juntamente com informações não identificáveis ​​do paciente associadas a cada fluido folicular e amostra de fluido de cultura embrionária, incluindo idade do paciente, IMC, uso de testosterona, causa do tratamento de fertilização in vitro, número de oócitos, número de oócitos fertilizados e a qualidade dos embriões, serão transferidos do grupo Amir no TASMC para o grupo Laurent na UCSD.
7. Na UCSD, o RNA extracelular será isolado das amostras de fluido folicular usando os métodos Norgen e The ExoRNeasy (seguido pela validação qRT-PCR) e submetido à análise de sequenciamento de RNA usando kits de preparação de biblioteca de RNAseq múltiplos pequenos NEBNext.
8. Os dados de RNAseq resultantes serão analisados ​​para identificar alterações na expressão de micro RNA associadas a variáveis ​​clínicas, incluindo a causa da fertilização in vitro, tratamento com testosterona e qualidade do embrião.

As etapas 1-6, 8 serão realizadas no TASMC. As etapas 7 a 8 serão executadas no UCSD.

Critério de inclusão:

* Pacientes com 18 anos ou mais

Critério de exclusão:

• Pacientes menores de 18 anos
• Pacientes que não responderam à terapia hormonal e ao ciclo de fertilização in vitro foram descontinuados.