Metioniinin metabolinen saatavuus mungpavuissa

Tutkimusta edeltävät arvioinnit sisältävät perusaineenvaihduntanopeuden (BMR) / lepoenergian kulutuksen (REE) mittaamisen avoimen kierron epäsuoralla kalorimetrialla ja kehon koostumuksen (rasva ja rasvaton massa) mittaamisen deuteriumoksidilaimennustekniikalla.

Tutkimusprotokolla on 3 päivän kokeellinen protokolla (2 päivää sopeutumista plus 1 tutkimuspäivä), jossa on ≥ 1 viikon välein merkkiaineen täydellinen huuhtoutuminen.

Jokainen osallistuja mukautetaan testiruokavalioihin kahden päivän ajan, jotta he saavat riittävästi energiaa ja proteiinia (isonitrogeeninen ruokavalio) ja stabiloivat aineenvaihdunnan poolin. Sopeutumisjakson energia saadaan lepoenergiankulutuksella (REE/BMR) x 1,7 ja proteiinia 1,0 g.kg-1.d-1. Tänä aikana jokaisen osallistujan odotetaan syövän 4 ateriaa päivässä, jotka koostuvat nestemäisestä proteiinijuomasta ja proteiinittomista keksistä ja/tai keitetystä mungpapujauhosta, jotka tutkijat tarjoavat.

Tutkimuspäivänä 10-12 tunnin yöpaaston jälkeen osallistujat tulevat tutkimusyksikköön 8-9 tunniksi ja saavat 9 isonitrogeenista, isokalorista tuntiateriaa, joista jokainen edustaa kymmenesosaa osallistujan päivittäisestä kokonaisproteiinista (1 g.kg-1.d-1) ja energiantarve (1,5 x REE/BMR).

Proteiini toimitetaan joko referenssiaminohapposeoksena tai vertailuaminohapposeoksen ja testiproteiinien yhdistelmänä. Kunkin testiproteiinin määrä kullakin valitulla IAA-saannin tasolla on laskettava kaikista lähteistä peräisin olevan pitoisuuden perusteella.

Indikaattori AA, fenyylialaniinia annetaan 30 mg.kg-1.d -1 kaikissa tutkimusruokavalioissa (ruokaproteiinista ja isotoopista). Kiteisestä aminohaposta saatavan fenyylialaniinin määrä on vähennettävä testiproteiinin luonnollisesta fenyylialaniinipitoisuudesta riippuen.

Testiruokavalioiden proteiiniton energia saadaan maustetusta sokeriöljyjuomasta ja proteiinittomista vehnätärkkelyskeksistä.

Referenssiaminohapposeos, leimaamaton kiteinen fenyylialaniini, tyrosiini ja valittu IAA lisätään ja sekoitetaan sokeri-öljyjuoman kanssa ennen tunnin miniaterioiden antamista. Testiproteiinit annetaan osallistujille erikseen jokaisen miniaterian yhteydessä.

Hengitysnäytteet otetaan ennen ensimmäisen miniaterian aloittamista, lähtötilanteessa (ennen merkkiaineprotokollaa; stabiili ruokintatila hengityksessä 13CO2-taustan runsaus tapahtuu 4 tunnin miniaterian jälkeen) ja 15 minuutin välein isotooppisen vakaan tilan aikana (noin 2,5 tunnin kuluttua isotoopin käynnistäminen). Kolme hengitysnäytettä tulee kerätä 10 ml:n ei-piipäällysteisiin putkiin käyttämällä keräysmekanismia, joka mahdollistaa kuolleen tilan ilman poistamisen joka ajankohtana. Kun hengityksen kerääminen osuu tunnin aterian kanssa, tulee ensin ottaa hengitysnäyte ja sen jälkeen ateria. Sitten kaikki hengitysnäytteet säilytetään huoneenlämmössä analyysiä odotettaessa.

Hengityksen 13C:n rikastuminen analysoidaan jatkuvan virtauksen isotooppisuhteen massaspektrometrillä. Hengitysnäytteiden 13CO2-rikastuminen, joka johtuu isotoopin antamisesta ruokailun aikana, ilmaistaan ​​atomi-% ylimääränä (APE) perusviivaan verrattuna. Sitten lasketaan 13CO2:n (F13CO2) osuus merkkiaineen fenyylialaniinin hapetuksesta suhteessa annettuun määrään.

Vertailu- ja testi-IAAO-vasteen kaltevuus lasketaan F13CO2-mittauksista ja vastaavista IAA-syötyksistä käyttämällä lineaarista sekavaikutteista regressiomoodia, jossa F13CO2-vasteen yhteinen alkuperä on perustestin IAA-syötössä. Testiaminohapon metabolinen saatavuus (MA) testiateriassa määritetään kaltevuussuhdemenetelmällä käyttämällä seuraavaa yhtälöä:

MA (%) = (Testiproteiinin kaltevuus × 100)/ Vertailukulma