Метаболическая доступность метионина в бобах мунг

Оценки перед исследованием будут включать измерение базального уровня метаболизма (BMR) / расхода энергии в состоянии покоя (REE) с помощью непрямой калориметрии открытого цикла, а также состава тела (жировая и обезжиренная масса) с помощью метода разбавления оксида дейтерия.

Протокол исследования представляет собой трехдневный протокол эксперимента (2 дня адаптации плюс 1 день исследования) с интервалом ≥1 недели для обеспечения полного вымывания индикатора.

Каждого участника адаптировали к тестовой диете в течение двух дней, чтобы обеспечить его достаточным количеством энергии и белка (изонитрогенная диета), а также стабилизировать его метаболический пул. Энергия в период адаптации обеспечивается при расходе энергии в состоянии покоя (REE/BMR) x 1,7 и белке 1,0 г/кг-1.д-1. В течение этого периода каждый участник должен будет употреблять 4 приема пищи в день, состоящие из белкового жидкого напитка и безбелкового печенья и/или приготовленной еды из маша, которую предоставят исследователи.

В день исследования, после 10-12-часового ночного голодания, участники придут в исследовательский блок на 8-9 часов и получат 9 изоазотистых, изокалорийных ежечасных приемов пищи, каждый из которых представляет одну десятую часть общего суточного белка участника (1 г.кг-1.д-1) и потребность в энергии (1,5 x REE/BMR).

Белок поставляется либо в виде эталонной смеси аминокислот, либо в виде комбинации эталонной смеси аминокислот и тестируемых белков. Количество каждого тестируемого белка, обеспечиваемого при каждом уровне приема выбранной ИУК, следует рассчитывать на основе концентрации из всех источников.

Индикатор AA, фенилаланин предоставляется в дозе 30 мг/кг-1 день. -1 во всех исследованных диетах (из пищевого белка и изотопов). Количество фенилаланина, полученного из кристаллической аминокислоты, следует вычесть в зависимости от содержания природного фенилаланина в тестируемом белке.

Небелковая энергия в тестируемых рационах обеспечивается за счет ароматизированного сахарно-масляного напитка и безбелкового печенья из пшеничного крахмала.

Эталонную смесь аминокислот, немеченый кристаллический фенилаланин, тирозин и выбранную IAA добавляют и смешивают с сахарно-масляным напитком перед ежечасным приемом мини-приемов пищи. Тестовые белки вводятся участникам отдельно при каждом мини-приеме пищи.

Пробы дыхания собираются перед началом первого мини-приема пищи, на исходном уровне (до протокола индикатора; стабильное состояние насыщения в выдыхаемом воздухе фоновое содержание 13CO2 происходит после 4-часового мини-приема пищи) и каждые 15 минут во время изотопно-устойчивого состояния (примерно через 2,5 часа после запуск изотопа). Три пробы дыхания следует собрать в пробирки без силиконового покрытия емкостью 10 мл с использованием механизма сбора, позволяющего удалять воздух из мертвого пространства в каждый момент времени. Если сбор дыхания совпадает с ежечасным приемом пищи, сначала следует собирать пробу дыхания, а затем – прием пищи. Затем все пробы дыхания хранятся при комнатной температуре в ожидании анализа.

Обогащение 13C в выдыхаемом воздухе анализируется с помощью непрерывного проточного масс-спектрометра соотношения изотопов. Обогащение 13CO2 в пробах дыхания вследствие введения изотопов во время приема пищи выражается в виде превышения атомного процента (APE) над исходным уровнем. Затем рассчитывают долю 13CO2 (F13CO2) от окисления индикаторного фенилаланина по отношению к введенному количеству.

Наклоны реакции эталонного и тестируемого IAA рассчитываются на основе измерений F13CO2 и соответствующего поступления IAA с использованием режима линейной регрессии со смешанным эффектом с общей причиной ответа F13CO2 при базовом тестируемом приеме IAA. Метаболическую доступность (МА) тестируемой аминокислоты в тестируемом блюде определяют методом наклона-коэффициента с использованием следующего уравнения:

MA (%) = (наклон тестируемого белка × 100)/эталонный наклон