Dostępność metaboliczna metioniny w fasoli mung

Ocena przed badaniem będzie obejmować pomiar podstawowej przemiany materii (BMR) / spoczynkowego wydatku energetycznego (REE) za pomocą pośredniej kalorymetrii w obwodzie otwartym oraz składu ciała (masa tłuszczu i beztłuszczowa) za pomocą techniki rozcieńczania tlenku deuteru.

Protokół badania to 3-dniowy protokół eksperymentalny (2 dni adaptacji plus 1 dzień badania), z przerwą ≥1 tygodnia, aby zapewnić całkowite wypłukanie znacznika.

Każdy uczestnik przez dwa dni dostosowywany jest do diet testowych, aby zapewnić mu odpowiednią ilość energii i białka (dieta izoazotowa) oraz ustabilizować pulę metaboliczną. Energia w okresie adaptacyjnym jest dostarczana przy spoczynkowym wydatku energii (REE/BMR) x 1,7 i białku 1,0 g.kg-1.d-1. Oczekuje się, że w tym okresie każdy uczestnik będzie spożywał 4 posiłki dziennie składające się z płynnego napoju białkowego oraz ciasteczek niezawierających białka i/lub gotowanej fasoli mung, które zapewnią badacze.

W dniu badania, po 10-12 godzinach nocnego postu, uczestnicy przybędą do jednostki badawczej na 8-9 godzin i otrzymają co godzinę 9 izoazotowych, izokalorycznych posiłków, z których każdy stanowi jedną dziesiątą całkowitego dziennego zapotrzebowania na białko uczestnika (1 g.kg-1.d-1) i zapotrzebowanie na energię (1,5 x REE/BMR).

Białko jest dostarczane albo jako referencyjna mieszanina aminokwasów, albo jako kombinacja referencyjnej mieszaniny aminokwasów i białek testowych. Ilość każdego badanego białka dostarczonego na każdym poziomie wybranego spożycia IAA należy obliczyć na podstawie stężenia ze wszystkich źródeł.

Wskaźnik AA, fenyloalanina dostarczana jest w dawce 30 mg.kg-1.d -1 we wszystkich badanych dietach (z białka i izotopów spożywczych). Ilość fenyloalaniny dostarczonej z aminokwasu krystalicznego należy odjąć w zależności od naturalnej zawartości fenyloalaniny w badanym białku.

Energia niebiałkowa w dietach testowych jest dostarczana poprzez smakowy napój z olejem cukrowym i bezbiałkowe ciasteczka ze skrobi pszennej.

Referencyjną mieszaninę aminokwasów, nieznakowaną krystaliczną fenyloalaninę, tyrozynę i wybrane IAA dodaje się i miesza z napojem cukrowo-olejowym przed podaniem godzinnych miniposiłków. Białka testowe podaje się uczestnikom oddzielnie w każdym miniposiłku.

Próbki oddechu pobiera się przed rozpoczęciem pierwszego miniposiłku, na początku badania (przed protokołem znacznika; stabilny stan po posiłku, obfitość tła 13CO2 w wydychanym powietrzu występuje po 4-godzinnych miniposiłkach) i co 15 minut w izotopowym stanie ustalonym (około 2,5 godziny po rozpoczęcie izotopu). Należy pobrać trzy próbki oddechu do probówek o pojemności 10 ml niepokrytych silikonem, korzystając z mechanizmu zbierającego umożliwiającego usunięcie powietrza z martwej przestrzeni w każdym punkcie czasowym. Jeżeli pobieranie oddechu zbiega się z godzinnym posiłkiem, należy najpierw pobrać próbkę oddechu, a następnie zjeść posiłek. Następnie wszystkie próbki oddechu są przechowywane w temperaturze pokojowej do czasu analizy.

Wzbogacenie w 13C w wydychanym powietrzu analizuje się za pomocą spektrometru masowego o ciągłym przepływie. Wzbogacenie w 13CO2 w próbkach oddechu w wyniku podawania izotopu podczas stanu po posiłku wyraża się jako % nadmiaru atomowego (APE) w stosunku do wartości bazowej. Następnie oblicza się udział 13CO2 (F13CO2) ze znacznika utleniania fenyloalaniny w stosunku do podanej ilości.

Nachylenie odpowiedzi IAAO dla odniesienia i testu obliczono na podstawie pomiarów F13CO2 i odpowiednich pobrań IAA przy użyciu trybu regresji liniowej z efektem mieszanym, przy wspólnym pochodzeniu odpowiedzi F13CO2 przy podstawowym poborze IAA w teście. Dostępność metaboliczną (MA) badanego aminokwasu w badanym posiłku określa się metodą współczynnika nachylenia, stosując następujące równanie:

MA (%) = (nachylenie białka testowego × 100)/nachylenie odniesienia