Metabolická dostupnost methioninu v mungo fazolích

Hodnocení před zahájením studie bude zahrnovat měření bazální metabolické rychlosti (BMR) / klidového energetického výdeje (REE) nepřímou kalorimetrií s otevřeným okruhem a tělesného složení (tuk a beztuková hmota) technikou ředění oxidu deuteria.

Protokol studie je 3denní experimentální protokol (2 dny adaptace plus 1 den studie) s intervalem ≥1 týden pro zajištění úplného vymytí indikátoru.

Každý účastník je adaptován na testovací diety po dobu dvou dnů, aby mu dodal dostatek energie a bílkovin (izodusíkatá strava) a stabilizoval jeho metabolický fond. Energie během adaptačního období je zajištěna při klidovém energetickém výdeji (REE/BMR) x 1,7 a bílkovin 1,0 g.kg-1.d-1. Během tohoto období se od každého účastníka očekává, že zkonzumuje 4 jídla denně sestávající z proteinového tekutého nápoje a sušenek bez proteinů a/nebo vařeného jídla z mungo fazolí, které poskytnou vyšetřovatelé.

V den studie, po 10–12 hodinách nočního půstu, účastníci přijdou do výzkumné jednotky na 8–9 hodin a dostanou 9 izonitrogenních, izokalorických hodinových jídel, z nichž každé představuje jednu desetinu celkových denních bílkovin účastníka (1 g.kg-1.d-1) a energetickou náročnost (1,5 x REE/BMR).

Protein je dodáván buď jako referenční směs aminokyselin nebo jako kombinace směsi referenčních aminokyselin a testovaných proteinů. Množství každého testovaného proteinu poskytnutého na každé úrovni zvoleného příjmu IAA by se mělo vypočítat na základě koncentrace ze všech zdrojů.

Indikátor AA, fenylalanin je poskytován v dávce 30 mg.kg-1.d -1 ve všech studijních dietách (z potravinových bílkovin a izotopů). Množství fenylalaninu poskytnutého z krystalické aminokyseliny by mělo být odečteno v závislosti na přirozeném obsahu fenylalaninu v testovaném proteinu.

Neproteinová energie v testovaných dietách je poskytována prostřednictvím ochuceného nápoje s cukrem a olejem a sušenek z pšeničného škrobu bez obsahu bílkovin.

Referenční směs aminokyselin, neznačený krystalický fenylalanin, tyrosin a vybraná IAA jsou přidány a smíchány s nápojem z cukru a oleje před podáváním hodinového mini-jídla. Testovací proteiny jsou účastníkům podávány samostatně s každým minijídlem.

Vzorky dechu se odebírají před zahájením prvního minijídla, na začátku (před protokolem indikátoru; stabilní stav nasycení v dechu na pozadí hojnosti 13CO2 nastává po 4 hodinových minijídlech) a každých 15 minut během izotopového ustáleného stavu (přibližně 2,5 hodiny po spuštění izotopu). Tři vzorky dechu by měly být odebrány do 10ml zkumavek bez silikonu pomocí sběrného mechanismu, který umožňuje odstranění vzduchu z mrtvého prostoru v každém časovém bodě. Když se sběr dechu kryje s hodinovým jídlem, měl by být nejprve odebrán vzorek dechu a poté jídlo. Poté se všechny vzorky dechu skladují při pokojové teplotě, dokud se neanalyzuje.

Obohacení 13C v dechu je analyzováno hmotnostním spektrometrem s poměrem izotopů s kontinuálním průtokem. Obohacení 13CO2 ve vzorcích dechu v důsledku podávání izotopů během nasyceného stavu je vyjádřeno jako atomový % přebytek (APE) nad výchozí hodnotou. Poté se vypočítá podíl 13CO2 (F13CO2) z oxidace stopovače fenylalaninu ve vztahu k podanému množství.

Referenční a testovací sklon odezvy IAAO se vypočítají z měření F13CO2 a příslušných příjmu IAA pomocí lineárního regresního režimu se smíšeným efektem se společným původem odezvy F13CO2 při příjmu IAA při základním testu. Metabolická dostupnost (MA) testované aminokyseliny v testovaném jídle se určuje metodou sklonu-poměru pomocí následující rovnice:

MA (%) = (sklon testovacího proteinu × 100)/ referenční sklon