Disponibilità metabolica della metionina nei fagioli verdi

Le valutazioni pre-studio includeranno la misurazione del tasso metabolico basale (BMR) / spesa energetica a riposo (REE) mediante calorimetria indiretta a circuito aperto e la composizione corporea (grasso e massa magra) mediante tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio.

Il protocollo di studio è un protocollo sperimentale di 3 giorni (2 giorni di adattamento più 1 giorno di studio), con un intervallo di ≥1 settimana per garantire il completo lavaggio del tracciante.

Ogni partecipante viene adattato alle diete di prova per due giorni per fornire loro energia e proteine ​​adeguate (dieta isonitrogena) e per stabilizzare il proprio pool metabolico. L'energia durante il periodo di adattamento viene fornita con un dispendio energetico a riposo (REE/BMR) x 1,7 e proteine ​​1,0 g.kg-1.d-1. Durante questo periodo, ciascun partecipante dovrà consumare 4 pasti al giorno costituiti da una bevanda liquida proteica e biscotti senza proteine ​​e/o un pasto a base di fagioli mung cotti, che i ricercatori forniranno.

Il giorno dello studio, dopo un digiuno notturno di 10-12 ore, i partecipanti verranno all'unità di ricerca per 8-9 ore e riceveranno 9 pasti orari isonitrogeni e isocalorici, ciascuno dei quali rappresenta un decimo delle proteine ​​totali giornaliere del partecipante (1 g.kg-1.d-1) e fabbisogno energetico (1,5 x REE/BMR).

La proteina viene fornita come miscela di amminoacidi di riferimento o come combinazione della miscela di amminoacidi di riferimento e delle proteine ​​in esame. La quantità di ciascuna proteina di prova fornita a ciascun livello di assunzione di IAA selezionato deve essere calcolata in base alla concentrazione proveniente da tutte le fonti.

Indicatore AA, la fenilalanina è fornita a 30 mg.kg-1.d -1 in tutte le diete studiate (da proteine ​​alimentari e isotopi). La quantità di fenilalanina fornita dall'amminoacido cristallino deve essere detratta in base al contenuto di fenilalanina naturale nella proteina in esame.

L'energia non proteica nelle diete di prova viene fornita attraverso una bevanda aromatizzata a base di olio e zucchero e biscotti a base di amido di frumento senza proteine.

La miscela di aminoacidi di riferimento, fenilalanina cristallina non marcata, tirosina e IAA selezionati vengono aggiunti e miscelati con la bevanda zucchero-olio prima di somministrare i mini-pasti orari. Le proteine ​​del test vengono somministrate separatamente ai partecipanti con ogni mini-pasto.

I campioni di respiro vengono raccolti prima di iniziare il primo mini-pasto, al basale (prima del protocollo del tracciante; un'abbondanza di fondo stabile di 13CO2 nel respiro si verifica dopo 4 mini-pasti orari) e ogni 15 minuti durante lo stato stazionario isotopico (circa 2,5 ore dopo iniziare l'isotopo). Tre campioni di respiro devono essere raccolti in provette da 10 ml non rivestite in silicone utilizzando un meccanismo di raccolta che consenta la rimozione dell'aria dello spazio morto in ogni momento. Quando la raccolta del respiro coincide con un pasto orario, il campione di respiro dovrebbe essere raccolto per primo, seguito dal pasto. Quindi, tutti i campioni di respiro vengono conservati a temperatura ambiente, in attesa dell'analisi.

L'arricchimento di 13C nel respiro viene analizzato mediante uno spettrometro di massa del rapporto isotopico a flusso continuo. L'arricchimento di 13CO2 nei campioni di respiro dovuto alla somministrazione di isotopi durante lo stato di pasto è espresso come percentuale di eccesso atomico (APE) rispetto al basale. Successivamente si calcola la frazione di 13CO2 (F13CO2) derivante dall'ossidazione della fenilalanina tracciante in relazione alla quantità somministrata.

Le pendenze della risposta IAAO di riferimento e di test sono calcolate dalle misurazioni di F13CO2 e dalle rispettive assunzioni di IAA utilizzando una modalità di regressione lineare a effetti misti, con un'origine comune della risposta di F13CO2 all'assunzione di IAA di test di base. La disponibilità metabolica (MA) dell'amminoacido in esame nel pasto in esame è determinata mediante il metodo del rapporto inclinato utilizzando la seguente equazione:

MA (%) = (Pendenza della proteina test × 100)/Pendenza di riferimento