Stoffwechselverfügbarkeit von Methionin in Mungobohnen

Die Bewertungen vor der Studie umfassen die Messung des Grundumsatzes (BMR)/Ruheenergieverbrauchs (REE) durch indirekte Kalorimetrie im offenen Kreislauf und der Körperzusammensetzung (Fett und fettfreie Masse) durch Deuteriumoxid-Verdünnungstechnik.

Das Studienprotokoll ist ein dreitägiges Versuchsprotokoll (2 Tage Anpassung plus 1 Studientag) mit einem Intervall von ≥1 Woche, um eine vollständige Auswaschung des Tracers sicherzustellen.

Jeder Teilnehmer wird zwei Tage lang an die Testdiäten angepasst, um ihn ausreichend mit Energie und Proteinen zu versorgen (isonitrogene Diät) und seinen Stoffwechselpool zu stabilisieren. Die Energie während der Anpassungsphase wird mit einem Ruheenergieverbrauch (REE/BMR) x 1,7 und einem Protein von 1,0 g.kg-1.d-1 bereitgestellt. Während dieses Zeitraums wird von jedem Teilnehmer erwartet, dass er 4 Mahlzeiten pro Tag zu sich nimmt, bestehend aus einem Protein-Flüssiggetränk und proteinfreien Keksen und/oder gekochtem Mungobohnenmehl, das von den Forschern bereitgestellt wird.

Am Studientag kommen die Teilnehmer nach einem 10–12-stündigen Fasten über Nacht für 8–9 Stunden in die Forschungseinheit und erhalten 9 isonitrogene, isokalorische stündliche Mahlzeiten, die jeweils einem Zehntel des gesamten täglichen Proteins des Teilnehmers entsprechen (1). g.kg-1.d-1) und Energiebedarf (1,5 x REE/BMR).

Das Protein wird entweder als Referenz-Aminosäuremischung oder als Kombination aus der Referenz-Aminosäuremischung und den Testproteinen geliefert. Die Menge jedes Testproteins, die bei jeder ausgewählten IAA-Zufuhrmenge bereitgestellt wird, sollte auf der Grundlage der Konzentration aus allen Quellen berechnet werden.

Der Indikator AA, Phenylalanin, wird mit 30 mg.kg-1.d bereitgestellt -1 in allen Studiendiäten (aus Nahrungsprotein und Isotop). Die Menge an Phenylalanin, die aus kristalliner Aminosäure bereitgestellt wird, sollte abhängig vom natürlichen Phenylalaningehalt im Testprotein abgezogen werden.

Die proteinfreie Energie in den Testdiäten wird durch ein aromatisiertes Zucker-Öl-Getränk und proteinfreie Weizenstärkekekse bereitgestellt.

Die Referenzaminosäuremischung, nicht markiertes kristallines Phenylalanin, Tyrosin und ausgewählte IAA werden vor der Verabreichung der stündlichen Minimahlzeiten zu dem Zucker-Öl-Getränk hinzugefügt und mit diesem vermischt. Die Testproteine ​​werden den Teilnehmern separat zu jeder Mini-Mahlzeit verabreicht.

Atemproben werden vor Beginn der ersten Mini-Mahlzeit, zu Studienbeginn (vor dem Tracer-Protokoll; ein stabiler Nahrungszustand in der 13CO2-Hintergrundhäufigkeit der Atemluft tritt nach 4 stündlichen Mini-Mahlzeiten ein) und alle 15 Minuten während des Isotopen-Steady-State (ungefähr 2,5 Stunden danach) gesammelt Starten des Isotops). Drei Atemproben sollten in nicht silikonbeschichteten 10-ml-Röhrchen gesammelt werden, wobei ein Sammelmechanismus verwendet wird, der die Entfernung von Totraumluft zu jedem Zeitpunkt ermöglicht. Wenn die Atemprobe mit einer stündlichen Mahlzeit zusammenfällt, sollte zuerst die Atemprobe entnommen werden, gefolgt von der Mahlzeit. Anschließend werden alle Atemproben bis zur Analyse bei Raumtemperatur gelagert.

Die Anreicherung von 13C im Atem wird mit einem kontinuierlichen Isotopenverhältnis-Massenspektrometer analysiert. Die 13CO2-Anreicherung in den Atemproben aufgrund der Isotopenverabreichung während der Nahrungsaufnahme wird als Atom-%-Überschuss (APE) gegenüber dem Ausgangswert ausgedrückt. Anschließend wird der Anteil an 13CO2 (F13CO2) aus der Tracer-Phenylalanin-Oxidation im Verhältnis zur verabreichten Menge berechnet.

Die Steigungen der Referenz- und Test-IAAO-Reaktion werden aus F13CO2-Messungen und den jeweiligen IAA-Aufnahmen unter Verwendung eines linearen Mixed-Effect-Regressionsmodus berechnet, mit einem gemeinsamen Ursprung der F13CO2-Reaktion bei der Basistest-IAA-Aufnahme. Die metabolische Verfügbarkeit (MA) der Testaminosäure in der Testmahlzeit wird mit der Steigungsverhältnismethode unter Verwendung der folgenden Gleichung bestimmt:

MA (%) = (Testproteinsteigung × 100)/Referenzsteigung